猴頭菌培養液乙酸乙酯提取物的化學成分研究

〔摘要〕 目的 研究猴頭菌培養液乙酸乙酯提取物的化學成分。方法 通過凝膠柱色譜、硅膠柱色譜、半制備高效液相色譜等技術進行分離和純化；根據其理化性質數理和波譜對得到的化合物進行結構鑒定。結果 從猴頭菌培養液乙酸乙酯提取物中分離并鑒定得到22個化合物，分別為3-甲氧基-4-羥基苯甲醛（1），吲哚甲酸甲酯（2），2-呋喃甲酸（3），苯甲酸（4），2（3H）-苯并惡唑酮（5），香草酸（6），沒食子酸（7），polisin C（8），bis（2-ethylhexyl）benzene-1，2-dicarboylate（9），p-tyrosyl acetate（4-hydroxyphenethyl acetate）（10），1-（4-hydroxy-3，5-dimethoxyphenyl）ethanon（11），對羥基苯乙酮（12），1-苯基-1，2-丙二醇（13），6-羥基異苯并呋喃-1（3H）-酮（14），對羥基苯乙醛（15），1H-吲哚-3-吡咯甲醛（16），環（脯氨酸-纈氨酸）（17），環（脯氨酸-亮氨酸）（18），環（苯丙氨酸-纈氨酸）（19），環（異亮氨酸-苯丙氨酸）（20），苜蓿素（21），dihydro-4-hydroxy-2（3H）-furanone（22）。結論 除化合物16和21外，其他化合物均為首次從猴頭菌培養液中分離得到。

〔關鍵詞〕 猴頭菌培養液；化學成分；小分子化合物；環肽類化合物；生物堿

〔中圖分類號〕R284.2 " " " " 〔文獻標志碼〕A " " " " "〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０24.02.010

Chemical constituents of ethyl acetate extracts of the culture solution of Hericium erinaceus

YAO Qingying1，2， ZHANG Xiaojuan1，2， ZENG Ni1，2， FU Gang1，2， LI Bin1，2*， WANG Wei1，2

1. School of Pharmacy， Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China; 2. Traditional Chinese

Medicine and Ethnomedicine Innovation amp; Development International Laboratory， Hunan University of

Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To study the chemical constituents of ethyl acetate extracts of the culture solution of Hericium erinaceus. Methods Compounds were isolated and purified using Sephadex LH-20 column chromatography， silica gel column chromatography， semi-preparative HPLC and so on， and their structures were identified based on their physicochemical properties and spectral data. Results A total of 22 compounds were isolated and obtained from the ethyl acetate extracts of the culture solution of Hericium erinaceus， including 3-methoxy-4-hydroxybenzaldehyde （1）， methyl indole-3-carboxylate （2）， 2-furancarboxylic acid （3）， benzoic acid （4）， 2（3H）-benzoxazolone （5）， vanillic acid （6）， gallic acid （7）， polisin C （8）， bis（2-ethylhexyl）benzene-1，2-dicarb？鄄oxylate （9）， p-tyrosyl acetate（4-hydroxyphenethyl acetate） （10）， 1-（4-hydroxy-3，5-dimethoxyphenyl）ethanon （11）， hydroxyacetophenone （12）， 1-phenyl-1，2-propanediol （13）， 6-hydroxy isobenzofuran-1（3H）-one （14）， 4-hydroxyphenylacetaldehyde （15）， 1H-indole-3-carbox？鄄

aldehyde （16）， cyclo（Pro-Val） （17）， cyclo（Pro-Leu） （18）， cyclo（Phe-Val） （19）， cyclo（Ile-Phe） （20）， 3'，5'-dimethoxy-4'，5，7-trihydroxyflavone （21）， and dihydro-4-hydroxy-2（3H）-furanone （22）. Conclusion With the exception of compounds 16 and 21， all other compounds were isolated from the culture solution of Hericium erinaceus for the first time.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 culture solution of Hericium erinaceus; chemical constituents; small-molecular compounds; cyclopeptides; alkaloids

猴頭菌（Hericium erinaceus）是一種藥用真菌，研究表明，其在治療慢性胃炎、消化不良、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等消化系統疾病方面有良好的療效[1]，除此之外，猴頭菌還具有抗衰老、抗炎、抗腫瘤、降血脂的作用[2]。猴頭菌中主要的化學成分為多糖、甾體、萜類、脂肪酸、酚類以及蛋白質等[1]。目前，國內外對猴頭菌的研究在多糖方面取得了許多成果，但對其小分子化合物的研究較少。為了進一步探索猴頭菌的藥用價值，本文通過生物發酵技術對猴頭菌進行培養，并對其代謝產物進行研究，利用各種色譜分離技術和波譜技術對猴頭菌培養液乙酸乙酯提取物進行分離、純化和結構鑒定，共分離并鑒定22個化合物，其中有20個為首次從猴頭菌中分離得到，分別為3-甲氧基-4-羥基苯甲醛（1），吲哚甲酸甲酯（2），2-呋喃甲酸（3），苯甲酸（4），2（3H）-苯并惡唑酮（5），香草酸（6），沒食子酸（7），polisin C（8），bis（2-ethylhexyl） benzene-1，2-dicarboylate（9），p-tyrosyl acetate （4-hydroxyphenethyl acetate）（10），1-（4-hydroxy-3，5-dimethoxyphenyl）ethanon（11），對羥基苯乙酮（12），1-苯基-1，2-丙二醇（13），6-羥基異苯并呋喃-1（3H）-酮（14），對羥基苯乙醛（15），1H-吲哚-3-吡咯甲醛（16），環（脯氨酸-纈氨酸）（17），環（脯氨酸-亮氨酸）（18），環（苯丙氨酸-纈氨酸）（19），環（異亮氨酸-苯丙氨酸）（20），苜蓿素（21），dihydro-4-hydroxy-2（3H）-furanone（22）。

1 材料

1.1 "主要儀器與試劑

Bruker ascend 600 MHz核磁共振光譜儀（德國Bruker公司）；Agilgent DD2 500 MHz核磁共振光譜儀（美國Agilgent公司）；Agilent 1260半制備型高效液相色譜儀（美國Agilgent公司）；ZF7型紫外分析儀（鞏義市予華儀器有限公司）；KQ5200DE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；BSZ-100型部分收集器（上海青浦滬西儀器廠）；METTER AE240型電子天平（梅特勒托利多科技有限公司）；半制備色譜柱Agient ZORBAX XDB C18（10 mm×100 mm，5 ？滋m）（美國Agilgent公司）；半制備色譜柱YMC-PACK ODS-A C18（10 mm×250 mm，5 ？滋m）（日本YMC公司）；葡聚糖凝膠Sephadex LH-20（通用電氣醫療系統有限公司）；柱色譜硅膠（80-100目、100～200目、200～300目）和薄層色譜板GF254 20 cm×20 cm（青島海洋化工有限公司）；反相硅膠C18（日本Dasio公司）；乙酸乙酯、甲醇、氯仿、二甲基亞砜（分析純，青島海洋化工有限公司）；5%香草醛-濃硫酸（自制）。

1.2 "實驗材料

猴頭菌培養液水提物由湖南省新匯制藥有限公司提供。其標本（編號：HTGPYY-1020）存于湖南中醫藥大學含浦校區實驗樓C棟629室。

2 提取分離

猴頭菌培養液濃縮得到25 kg水提物，水提物加水制成混懸液，用等量的乙酸乙酯萃取，重復3次。合并乙酸乙酯萃取液，旋轉蒸發儀減壓濃縮后，得乙酸乙酯浸膏63.5 g。

將乙酸乙酯浸膏用硅膠柱色譜分離，二氯甲烷∶甲醇（100∶1、80∶1、60∶1、40∶1、20∶1、10∶1、5∶1、3∶1、1∶1、1∶5）梯度洗脫，流分濃縮后用TLC檢查，合并具有相同Rf值及相同斑點顏色的流分，得到10個組分Fr.A～Fr.J。

Fr.E（116.0 mg）用Sephadex LH-20柱色譜進行分離，石油醚∶氯仿：甲醇（4∶5∶1）洗脫得到化合物1（8.3 mg）和化合物2（12.0 mg）。

Fr.F（12.8 g）用硅膠柱色譜分離，石油醚∶丙酮（60∶1、40∶1、20∶1、10∶1、5∶1、3∶1、1∶1）梯度洗脫，流分經TLC檢識并合并相同的流分，得到7個組分Fr.F.Ⅰ～Fr.F.Ⅶ。Fr.F.I（801.0 mg）重結晶得到化合物3（510.0 mg）；母液經葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜分離，氯仿∶甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物4（7.1 mg），剩余流分用半制備HPLC（40%甲醇，3 mL·min-1）分離，洗脫得到化合物5（5.3 mg，tR=13.5 min）。

Fr.F.Ⅱ（613.0 mg）用反相C18柱色譜柱分離，甲醇∶水（0∶100-100∶0）梯度洗脫得到化合物6（4.9 mg），子流分Fr.F.Ⅱ.b用半制備HPLC（25%甲醇，3 mL·min-1）分離，得到化合物7（7.8 mg，tR=2.6 min）和化合物8（6.7 mg，tR=2.8 min）。

Fr.F.Ⅲ（880.0 mg）經葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜分離，氯仿∶甲醇（1∶1）洗脫得到化合物9（4.2 mg），子流分繼續用半制備型HPLC純化（30%甲醇，3 mL·min-1），洗脫得到化合物10（4.6 mg）。

Fr.F.Ⅳ（900.0 mg）經葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜分離，氯仿∶甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物11（3.5 mg），子流分Fr.F.Ⅳ.1繼續用半制備HPLC（30%甲醇，3 mL·min-1）洗脫得到化合物12（4.1 mg，tR=15.6 min），子流分Fr.F.Ⅳ.2半制備HPLC（35%甲醇，3 mL·min-1）等度洗脫得到化合物13（5.6 mg，tR=10.4 min）；子流分Fr.F.Ⅳ.3繼續用半制備HPLC（35%甲醇，3 mL·min-1）純化，洗脫得到化合物14（4.0 mg，tR=18.2 min）。

Fr.F.Ⅴ（220.0 mg）用反相C18柱色譜分離，甲醇∶水（0∶100-100∶0）梯度洗脫，TLC檢識具有褐色主斑點的成分繼續用半制備HPLC純化（25%甲醇，3 mL·min-1），洗脫得到化合物15（0.8 mg）和化合物16（1.3 mg）。

Fr.F.Ⅵ（4.1 g）經反相C18柱色譜甲醇∶水（0∶100-100∶0）梯度洗脫得到化合物17（5.5 mg），化合物18（6.7 mg）和化合物19（3.8 mg），子流分反復經過葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜，用氯仿∶甲醇（1∶1）洗脫得到化合物20（4.9 mg）。

Fr.F.Ⅶ（62.0 mg）經葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜進行分離，氯仿∶甲醇（1∶1）洗脫得到化合物21（3.2 mg）和化合物22（5.1 mg）。

3 結構鑒定

化合物1：無色油狀液體（氯仿）；1H-NMR（CDCl3， 500 MHz） δH： 7.41～7.43（m， 2H， H-2，6）， 7.04（d， J=8.5 Hz， 1H， H-5）， 9.82（s， 1H， H-7）， 3.96 （s， 3H， 3-OCH3）；13C-NMR （CDCl3， 125 MHz） δC： 129.9（C-1）， 114.4（C-2）， 147.1（C-3）， 151.7（C-4）， 108.8（C-5）， 127.5（C-6）， 190.9（C-7）， 56.1（3-OCH3）。以上數據與文獻報道基本一致[3]，故鑒定為3-甲氧基-4-羥基苯甲醛。

化合物2：白色無定型粉末（氯仿）；1H-NMR（CDCl3， 500 MHz） δH： 8.18～8.20 （m， 1H， H-2）， 7.92（d， J=2.7 Hz， 1H， H-5）， 7.27～7.29（m， 2H， H-6，7）， 7.41～7.43（m， 1H， H-8）， 3.93（s， 3H， 10-OCH3）， 8.66（brs， 1H， -NH-）；13C-NMR（CDCl3， 125 MHz） δC： 130.9（C-2）， 111.5（C-3）， 125.8（C-4）， 123.2（C-5）， 121.5（C-6）， 122.0（C-7）， 108.9（C-8）， 136.0（C-9）， 165.6（C-10）， 51.1（10-OCH3）。以上數據與文獻報道基本一致[4]，故鑒定為吲哚甲酸甲酯。

化合物3：白色粉末（甲醇）；1H-NMR（CD3OD， 500 MHz） δH： 7.20（dd， J=3.5， 0.8 Hz， 1H， H-3）， 6.58（dd， J=3.5， 1.7 Hz， 1H， H-4）， 7.71（dd， J=1.7， 0.8 Hz， 1H， H-5）；13C-NMR（CD3OD， 125 MHz） δC： 145.0（C-2）， 117.6（C-3）， 111.5（C-4）， 146.6（C-5）， 160.4（C-6）。以上數據與文獻報道基本一致[5]，故鑒定為2-呋喃甲酸。

化合物4：白色無定型粉末（甲醇）；1H-NMR（CD3OD， 600 MHz） δH： 8.04（d， J=7.4 Hz， 2H， H-2，6）， 7.46（t， J=7.4 Hz， 2H， H-3，5）， 7.58（t， J=7.4 Hz， 1H， H-4）；13C-NMR（CD3OD， 150 MHz） δC： 129.3（C-1）， 130.5（C-2，6）， 128.1（C-3，5）， 132.7（C-4）， 168.5（C-7）。以上數據與文獻報道基本一致[6]，故鑒定為苯甲酸。

化合物5：白色無定型粉末（甲醇）；1H-NMR（CD3OD， 600 MHz） δH： 7.17（td， J=7.7， 1.2 Hz， 1H， H-5）， 7.09～7.11（m， 1H， H-6）， 7.12 （td， J=7.7， 1.2 Hz， 1H， H-7）， 7.22（d， J=8.0 Hz， 1H， H-8）， 9.78（s， 1H， -NH-）；13C-NMR（CD3OD， 150 MHz） δC： 155.8（C-2）， 130.3（C-4）， 122.0（C-5）， 109.2（C-6）， 109.5（C-7）， 123.7（C-8）， 144.0（C-9）。以上數據與文獻報道基本一致[7]，故鑒定為2（3H）-苯并惡唑酮。

化合物6：白色無定型粉末（甲醇）；1H-NMR（CD3OD， 500 MHz） δH： 7.52～7.55（m， 2H， H-2， 6）， 6.82（d， J=8.7 Hz， 1H， H-5）， 3.88（s， 3H， 3-OCH3）；13C-NMR（CD3OD， 125 MHz） δC： 122.0（C-1）， 112.4（C-2）， 147.2（C-3）， 151.1（C-4）， 114.4（C-5）， 123.8（C-6）， 169.1（C-7）， 55.0（3-OCH3）。以上數據與文獻報道基本一致[8]，故鑒定為香草酸。

化合物7：白色無定型粉末（甲醇）；1H-NMR（CD3OD， 500 MHz） δH： 6.37（s， 2H， H-2， H-6）；13C-NMR（CD3OD， 125 MHz） δC： 121.3（C-1）， 108.9（C-2， C-6）， 144.9（C-3， C-5）， 137.8（C-4）， 169.1（C-7）。以上數據與文獻報道基本一致[9]，故鑒定為沒食子酸。

化合物8：無色粉末（甲醇）；1H-NMR（CD3OD， 500 MHz） δH： 1.44～1.49（m， overlap， 1H， H-1）， 1.38～1.46（m， overlap， 2H， H-2）， 1.72（dp， J=12.4， 3.1 Hz， 1H， H-3a）， 1.08～1.12（m， overlap， 1H， H-3b）， 1.93～1.97（m， overlap， 1H， H-4）， 1.93～1.96（m， overlap， 1H， H-5a）， 1.31～1.36（m， overlap， 1H， H-5b）， 3.84（q， J=2.7 Hz， 1H， H-6）， 2.18（ddd， J=13.3， 10.0， 8.4 Hz， 1H， H-8a）， 1.92～1.96（m， 1H， H-8b）， 2.68（ddd， J=18.4， 10.1， 8.4 Hz， 1H， H-9a）， 2.54（ddd， J=18.4， 10.1， 5.0 Hz， 1H， H-9b）， 0.94（d， J=6.5 Hz， 3H， H-13）， 1.31（s， 3H， H-14）；13C-NMR（CD3OD， 125 MHz） δC： 36.2（C-1）， 27.5（C-2）， 26.4（C-3）， 40.0（C-4）， 33.9（C-5）， 69.7（C-6）， 89.6（C-7）， 30.8（C-8）， 28.5（C-9）， 178.3（C-10）， 17.3（C-13）， 21.4（C-14）。以上數據與文獻報道基本一致[10]，故鑒定為polisin C。

化合物9：白色無定型粉末；1H-NMR（CD3OD， 500 MHz） δH： 4.15～4.22（m， 4H， H-1， H-1'）， 1.62～1.69 （m， 2H， H-2， "H-2'）， 0.90～0.92（m， overlap， 6H， H-6，6'）， 0.87～0.89 （m， overlap， 6H， H-8，8'）， 7.68 （dd， J=6.0， 3.0 Hz， 2H， H-3\"， H-6\"）， 7.55（dd， J=6.0， 3.0 Hz， 2H， H-4\"， H-5\"）， 1.29～1.41（m， 16H， 8×CH2）；13C-NMR （CD3OD， 125 MHz） δC： 68.1（C-1， C-1'）， 38.7（C-2， C-2'）， 30.3（C-3， C-3'）， 28.8（C-4， C-4'）， 22.8（C-5， C-5'）， 10.6（C-6， C-6'）， 23.6（C-7， C-7'）， 13.6（C-8， C-8'）， 132.2（C-1\"， C-2\"）， 128.6（C-3\"， C-6\"）， 131.0（C-4\"， C-5\"）， 168.1（C7\"， C-8\"）。以上數據與文獻報道基本一致[11]，故鑒定為bis（2-ethylhexyl） benzene-1，2-dicarboxylate。

化合物10：亮黃色無定型粉末（甲醇∶氯仿=1∶1）；1H-NMR（CD3OD， 500 MHz） δH： 7.56（d， J=8.5 Hz， 2H， H-2，6）， 7.02（d， J=8.5 Hz， 2H， H-3，5）， 2.82（t， J=7.1 Hz， 2H， H-1'）， 4.19（t， J=7.1 Hz， 2H， H-2'）， 2.01（s， 3H， 4'-CH3）；13C-NMR（CD3OD， 125 MHz） δC： 128.5（C-1）， 129.7（C-2，6）， 115.1（C-3，5）， 155.4（C-4）， 34.0（C-1'）， 65.4（C-2'）， 171.8（C-4'）， 20.3（4'-CH3）。以上數據與文獻報道的基本一致[12]，故鑒定為p-tyrosyl acetate（4-hydroxyphnethyl acetate）。

化合物11：無色油狀物（甲醇）；1H-NMR（CD3OD， 500 MHz） δH： 7.30（s， 2H， H-2，6）， 2.55（s， 3H， 7-CH3）， 3.90（s， 6H， 3，5-OCH3）；13C-NMR（CD3OD， 125 MHz） δC： 127.7（C-1）， 106.0（C-2，6）， 147.6（C-3，5）， 141.4（C-4）， 197.9（C-7）， 24.9（7-CH3）， 55.4（3，5-OCH3）。以上數據與文獻報道的基本一致[13]，故鑒定為4-hydroxy-3，5-dimethoxyphenyl-ethanone。

化合物12：白色無定型粉末（甲醇）；1H-NMR（CD3OD， 500 MHz） δH： 7.83（d， J=8.8 Hz， 2H， H-2，6）， 6.82（d， J=8.8 Hz， 2H， H-3，5）， 2.51（s， 3H， 7-CH3）；13C-NMR （CD3OD， 125 MHz） δC： 128.8（C-1）， 130.9（C-2，6）， 115.1（C-3，5）， 162.3（C-4）， 198.3（C-7）， 25.6（7-CH3）。以上數據與文獻報道基本一致[14]，故鑒定為對羥基苯乙酮。

化合物13：白色無定型粉末（甲醇）；1H-NMR（CD3OD， 600 MHz） δH： 7.38（d， J=7.2 Hz， 2H， H-2， H-6）， 7.34（t， J=7.2 Hz， 2H， H-3，5）， 7.26（t， J=7.2 Hz， 1H， H-4）， 4.53（d， J=5.2 Hz， 1H， H-1'）， 3.90（p， J=6.2 Hz， 1H， H-2'）， 1.13（d， J=6.4 Hz， 3H， H-3'）；13C-NMR（CD3OD， 150 MHz） δC： 141.9（C-1）， 126.7（C-2， C-6）， 127.7（C-3， C-5）， 127.0（C-4）， 77.7（C-1'）， 71.0（C-2'）， 16.8（C-3'）。以上數據與文獻報道基本一致[15]，故鑒定為1-苯基-1，2-丙二醇。

化合物14：白色無定型粉末（甲醇∶氯仿=1∶1）；1H-NMR（CD3OD， 500 MHz） δH： 5.25（s， 2H， H-3）， 7.20（d， J=2.3 Hz， 1H， H-4）， 7.16（dd， J=8.3， 2.3 Hz， 1H， H-5）， 7.34 （d， J=8.3 Hz， 1H， H-7）；13C-NMR（CD3OD， 125 MHz） δC： 172.5（C-1）， 70.0（C-3）， 123.0（C-4）， 122.9（C-5）， 158.3（C-6）， 110.1（C-7）， 126.4（C-8）， 137.8（C-9）。以上數據與文獻報道的基本一致[16]，故鑒定為6-羥基異苯并呋喃-1（3H）-酮。

化合物15：黃色油狀液體（甲醇∶氯仿=1∶1）；1H-NMR（CD3OD， 500 MHz） δH： 7.80（d， J=8.8 Hz， 2H， H-2，6）， 6.84（d， J=8.8 Hz， 2H， H-3，5）， 2.51（s， 2H， H-7）；13C-NMR（CD3OD， 125 MHz） δC： 125.6（C-1）， 130.0（C-2， C-6）， 115.4（C-3，5）， 162.8（C-4）， 64.6（C-7）， 197.0（C-8）。以上數據與文獻報道的基本一致[17]，故鑒定為對羥基苯乙醛。

化合物16：白色無定型粉末（甲醇∶氯仿=1∶1）；1H-NMR（CD3OD， 500 MHz） δH： 7.93（s， 1H， H-2）， 8.16（dd， J=2.0， 6.5 Hz， 1H， H-4）， 7.21～7.27（m， 2H， H-5， H-6）， 7.44（dd， J=2.0， 6.5 Hz， 1H， H-7）， 9.87（s， 1H， H-8）， 11.61（s， 1H， -NH-）；13C-NMR（CD3OD， 125 MHz） δC： 138.0（C-2）， 118.7（C-3）， 124.3（C-3a）， 123.8（C-4）， 122.5（C-5）， 121.2（C-6）， 112.0（C-7）， 137.4（C-7a）， 186.0（C-8）。以上數據與文獻報道的基本一致[18]，故鑒定為1H-吲哚-3-吡咯甲醛。

化合物17：白色粉末狀固體（甲醇）；1H-NMR（CD3OD， 600 MHz） δH： 4.04～4.05（m， 1H， H-2）， 2.29～2.35（m， 1H， H-3）， 1.92～1.97（m， 2H， H-3，4）， 2.01～2.04（m， 1H， H-4）， 3.49～3.52（m， 1H， H-5）， 3.54～3.59（m， 1H， H-5）， 4.19～4.22（m， 1H， H-2'）， 2.49（heptd， J=7.2， 2.6 Hz， 1H， H-3'）， 0.94（d， J=7.2 Hz， 3H， 3'-CH3）， 1.10（d， J=7.2 Hz， 3H， 3'-CH3）， 7.92（s， 1H， H-Val）；13C-NMR（CD3OD， 150 MHz） δC： 172.6（C-1）， 61.5（C-2）， 29.9（C-3）， 23.3（C-4）， 46.2（C-5）， 167.6（C-1'）， 60.0（C-2'）， 29.5（C-3'）， 16.7（3'-CH3）， 18.8（3'-CH3）。以上數據與文獻報道的基本一致[19]，故鑒定為環（脯氨酸-纈氨酸）。

化合物18：白色固體（DMSO）；1H-NMR（DMSO-d6， 600 MHz） δH： 4.17～4.19（m， 1H， H-2）， 1.90（m， 1H， H-3a）， 2.09～2.13（m， 1H， H-3b）， 1.77～1.93（m， 2H， H-4）， 3.17（d， J=4.9 Hz， 1H， H-5a）， 3.30～3.38（m， 1H， H-5）， 4.00（t， J=6.3 Hz， 1H， H-2'）， 1.73～1.76（m， 2H， H-3'）， 1.35（m， 1H， H-4'）， 0.85（d， J=6.5 Hz， 3H， 4'-CH3）， 0.87（d， J=6.5 Hz， 3H， 4'-CH3）， 8.00（s， 1H， H-Leu）；13C-NMR（DMSO-d6， 150 MHz） δC： 167.0（C-1）， 58.9（C-2）， 38.2（C-3）， 23.3（C-4）， 45.3（C-5）， 170.8（C-1'）， 53.1（C-2'）， 27.9（C-3'）， 24.5（C-4'）， 22.9（4'-CH3）， 22.3（4'-CH3）。以上數據與文獻報道的基本一致[20]，故鑒定為環（脯氨酸-亮氨酸）。

化合物19：白色針狀固體（DMSO）；1H-NMR（DMSO-d6， 600 MHz） δH： 4.17（t， J=4.2 Hz， 1H， H-2）， 2.90（dd， J=13.6， 4.9 Hz， 1H， H-3）， 3.16（dd， J=13.6， 3.9 Hz， 1H， H-3）， 7.25～7.27（m， 2H， H-5，9）， 7.20～ 7.21（m， 2H， H-6，8）， 7.22～7.23（m， 1H， H-7）， 4.38（t， J=5.4 Hz， 1H， H-2'）， 2.05（m， 1H， H-3'））， 0.76（d， J=7.2 Hz， 3H， 3'-CH3）， 0.84（d， J=7.2 Hz， 3H， 3'-CH3）， 7.95（s， 1H， H-Val）， 8.13（s， 1H， H-Phe）；13C-NMR（DMSO-d6， 150 MHz） δC： 167.9（C-1）， 59.4（C-2）， 38.5（C-3）， 136.6（C-4）， 128.5（C-5，9）， 130.7（C-6，8）， 127.1（C-7）， 167.6（C-1'）， 55.2（C-2'）， 32.0（C-3'）， 17.1（3'-CH3）， 18.6（3'-CH3）。以上數據與文獻報道的基本一致[21]，故鑒定為環（苯丙氨酸-纈氨酸）。

化合物20：白色片狀固體（甲醇）；1H-NMR（CD3OD， 600 MHz） δH： 4.27～4.29（m， 1H， H-2）， 1.81～1.85 （m， 2H， H-3）， 1.35～1.41（m， 1H， H-4a）， 1.17～1.22（m， 1H， H-4b）， 0.86（d， J=7.5 Hz， 3H， H-5）， 0.89（d， J=7.1Hz， 3H， H-6）， 4.61（s， 2H， H-2'）， 3.02（dd， J=13.8， 4.6 Hz， 1H， H-3'）， 3.27（dd， J=13.8， 4.1 Hz， 1H， H-3'）， 7.27～7.30（m， 3H， H-5'， H-6'， H-8'）， 7.23～7.25（m， 2H， H-7'， H-9'）， 8.23（s， 1H， H-Phe）， 7.92（s， 1H， H-Ile）；13C-NMR（CD3OD， 150 MHz） δC： 168.6（C-1）， 58.4（C-2）， 39.1（C-3）， 24.0（C-4）， 10.8（C-5）， 13.8（C-6）， 168.7（C-1'）， 55.7（C-2'）， 38.5（C-3'）， 135.1（C-4'）， 130.4（C-5'， C-9'）， 128.1（C-6'， C-8'）， 126.9（C-7'）。以上數據與文獻報道的基本一致[22]，故鑒定為環（異亮氨酸-苯丙氨酸）。

化合物21：黃色粉末狀固體（DMSO）；1H-NMR（DMSO-d6， 600 MHz） δH： 7.00（s， 1H， H-3）， 6.21（d， J=2.0 Hz， 1H， H-6）， 6.57（d， J=2.0 Hz， 1H， H-8）， 7.34 （s， 2H， H-2'， H-6'）， 3.89（s， 6H， 3'，5'-OCH3）；13C-NMR（DMSO-d6， 150 MHz） δC： 164.1（C-2）， 104.8（C-3）， 182.3（C-4）， 104.2（C-4a）， 161.9（C-5）， 99.3（C-6）， 164.6（C-7）， 94.7（-C-8）， 157.8（C-8a）， 120.9（C-1'）， 104.1（C-2'， C-6'）， 148.7（C-3'， C-5'）， 140.3（C-4'）， 56.8（3'，5'-OCH3）。以上數據與文獻報道的基本一致[23]，故鑒定為苜蓿素。

化合物22：無色液體；1H-NMR（Pyridine-d5， 500 MHz） δH： 2.70～2.92（m， 2H， H-3）， 4.44（m， 1H， H-4）， 4.75（m， 2H， H-5）；13C-NMR（Pyridine-d5， 125 MHz） δC： 176.7（C-2）， 38.3（C-3）， 76.6（C-4）， 67.1（C-5）。以上數據與文獻報道的基本一致[24]，故鑒定為dihydro-4-hydroxy-2（3H）-furanone。

4 結論

本實驗利用生物發酵技術對猴頭菌進行培養，對其次生代謝產物進行化學成分研究，采用硅膠柱色譜、葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜、C18反向柱色譜和半制備高效液相色譜等方法對猴頭菌培養液乙酸乙酯提取物的化學成分進行分離及結構鑒定，最終從中分離出了22個化合物。通過光譜分析以及參照文獻數據鑒定了其結構，除了化合物16和21外，其他均為首次從猴頭菌中分離得到，其中21為黃酮類，1、4、6、7、9～15為苯環衍生物，2、16為吲哚類生物堿，17～20為環肽類化合物。根據文獻報道，環肽類多具有免疫調節、抗菌和抗腫瘤等作用[22]，生物堿具有抗炎鎮痛等作用[25]，黃酮類化合物則具有抗氧化、抗炎等活性[26]。本研究為猴頭菌中小分子成分的開發應用提供了物質基礎。

參考文獻

[1] 喻 "凱. 猴頭菌培養物化學成分及藥理活性研究[D]. 長沙： 中南大學， 2014.

[2] 王振麗， 李書華， 閆澤華. 猴頭菌絲多糖提取工藝的研究[J]. 農產品加工， 2022（8）： 41-42， 46.

[3] ITO J， CHANG F R， WANG H K， et al. Anti-AIDS agents. 48.1 Anti-HIV activity of moronic acid derivatives and the new melliferone-related triterpenoid isolated from Brazilian propolis[J]. Journal of Natural Products， 2001， 64（10）： 1278-1281.

[4] 李興博， 齊耀東， 劉海濤， 等. 新疆藁本化學成分的研究[J]. 中國中藥雜志， 2013， 38（10）： 1543-1547.

[5] 閆兆威， 劉金平， 盧 "丹， 等. 刺五加果肉化學成分的研究（Ⅱ）[J]. 天然產物研究與開發， 2013， 25（3）： 338-341.

[6] 林建斌， 趙立春， 郭建忠， 等. 金蕎麥地上部分化學成分的研究[J]. 中草藥， 2016， 47（11）： 1841-1844.

[7] 彭 "興， 龍盛京. 老鼠簕的化學成分研究[J]. 中草藥， 2006， 37（7）： 971-973.

[8] 倪付勇， 溫建輝， 李 "明， 等. 金銀花化學成分研究[J]. 中草藥， 2017， 48（18）： 3689-3692.

[9] 龐 "鬧， 王亞鳳， 何瑞杰， 等. 甜櫧化學成分研究（Ⅰ）[J]. 中藥材， 2018， 41（9）： 2116-2119.

[10] WANG S， LI Z H， DONG Z J， et al. Norbisabolane and eremophilane sesquiterpenoids from cultures of the basidiomycete Polyporus ellisii[J]. Fitoterapia， 2013， 91： 194-198.

[11] KATADE S R， PAWAR P V， TUNGIKAR V B， et al. Larvicidal activity of bis（2-ethylhexyl） benzene-1， 2-dicarboxylate from Sterculia guttata seeds against two mosquito species[J]. Chemistry amp; Biodiversity， 2006， 3（1）： 49-53.

[12] 韋 "瑋， 鄧家剛， 郝二偉， 等. 黃紅鉆乙酸乙酯萃取部位化學成分分離鑒定[J]. 中國實驗方劑學雜志， 2018， 24（21）： 51-55.

[13] SCHMALZ H G， CVENGRO？譒 J， NEUFEIND S， et al. Microwave-assisted cleavage of aryl methyl ethers with lithium thioethoxide （LiSEt）[J]. Synlett， 2008， 2008（13）： 1993-1998.

[14] DING H Y， LIN H C， TENG C M， et al. Phytochemical and pharmacological studies on Chinese Paeonia species[J]. Journal of the Chinese Chemical Society， 2000， 47（2）： 381-388.

[15] NICOLAOU K C， SNYDER S A， LONGBOTTOM D A， et al. New uses for the Burgess reagent in chemical synthesis： Methods for the facile and stereoselective formation of sulfamidates， glycosylamines， and sulfamides[J]. Chemistry， 2004， 10（22）： 5581-5606.

[16] TEIXEIRA R R， PEREIRA J L， DA SILVA S F， et al. Synthesis， characterization and phytotoxic activity of hydroxylated isobenzofuran-1（3H）-ones[J]. Journal of Molecular Structure， 2014， 1061： 61-68.

[17] 盛 "麗. 異葉敗醬化學成分及其抗腫瘤活性和玉米須對Ⅱ型糖尿病小鼠降糖作用的研究[D]. 合肥： 安徽醫科大學， 2019.

[18] 劉 "佳， 蘇錦松， 仁真旺甲， 等. 藏藥黃葵子的化學成分研究[J]. 中藥材， 2022， 45（7）： 1623-1626.

[19] 邱 "玲， 何 "鑫， 馮 "丹， 等. 冬蟲夏草中一株內生菌次級代謝產物的化學成分[J]. 應用與環境生物學報， 2018， 24（6）： 1290-1294.

[20] 馮 "丹， 秦玲玲， 鄭東濱， 等. 冬蟲夏草內生菌皮殼青霉菌化學成分的研究[J]. 中成藥， 2019， 41（8）： 1863-1867.

[21] 馮 "芮， 郭 "力， 蒲忠慧， 等. 川芎化學成分及其抑制子宮平滑肌收縮作用[J]. 中成藥， 2020， 42（7）： 1781-1785.

[22] 劉海濱， 高 "昊， 王乃利， 等. 紅樹林真菌草酸青霉（092007）的環二肽類成分[J]. 沈陽藥科大學學報， 2007， 24（8）： 474-478.

[23] KUWABARA H， MOURI K， OTSUKA H， et al. Tricin from a Malagasy connaraceous plant with potent antihistaminic activity[J]. Journal of Natural Products， 2003， 66（9）： 1273-1275.

[24] FANG J M， WANG K C， CHENG Y S. The chemical constituents from the aerial part of Rosa laevigata[J]. Journal of the Chinese Chemical Society， 1991， 38（3）： 297-299.

[25] 雷 "倩. 基于低共熔溶劑的超聲輔助綠色高效萃取防己中生物堿類活性成分研究[D]. 贛州： 贛南師范大學， 2023.

[26] 郭炎峰， 郭海海， 范玉雪， 等. 苜蓿素對高脂飼糧誘發的大鼠血管內皮損傷的治療作用[J]. 動物營養學報， 2022， 34（10）： 6768-6780.