胃癌組織中突觸融合蛋白6的表達與臨床病理特征及遠期預后的相關性

王娜,楊迷玲,楊金花,郝義彬

[河南中醫藥大學第五臨床醫學院(鄭州人民醫院) 病理科,河南 鄭州 450053]

胃癌是起源于胃黏膜上皮細胞的一種惡性腫瘤,發病率和病死率在中國所有惡性腫瘤中分別居第2位和第3位,近年來發病人數還在不斷增加,并逐漸向年輕化趨勢發展[1-2]。手術是胃癌患者可能獲得根治的唯一方法,但受腫瘤分期、分化程度等影響,患者整體治療效果欠佳,預后較差[3]。一項全國多中心研究顯示,腹腔鏡遠端胃癌根治術患者10 a總生存率僅為46.1%[4]。由此可見,胃癌患者腹腔鏡遠端根治術的遠期預后較差。因此,探討胃癌發病的分子機制,對改善患者遠期預后具有重要意義。突觸融合蛋白6(syntaxin 6,STX6)是一種囊泡轉運蛋白,在腎透明細胞癌[5]、肝癌[6]等多種腫瘤組織中均呈高表達。最近研究發現,P53基因調控著細胞凋亡相關基因gm1、bax、P2xm、pag608和killer/dr5表達,而STX6是P53的直接作用靶點,能促進P53依賴型癌細胞生長,導致癌癥復發轉移[7]。然而,STX6在胃癌組織中的表達及作用機制尚不清楚。基于此,本研究采用回顧性分析方法,探討胃癌術后腫瘤組織中STX6表達水平與臨床病理特征、遠期預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性納入2019年6月至2022年6月在河南中醫藥大學第五臨床醫學院(鄭州人民醫院)接受手術的82例胃癌患者的臨床資料,其中男48例,女34例;年齡46～70(54.60±5.38)歲;體重指數20～26(22.57±2.10)kg·m-2。

1.2 入選標準

納入標準:胃癌經手術病理、影像學等檢查后確診;病理資料、實驗室檢查資料及隨訪資料完整;年齡40～62歲;術前未接受過其他抗腫瘤治療。排除標準:伴有其他惡性腫瘤;主要器官功能受損;伴有精神功能障礙;患有嚴重急慢性疾病或感染性疾病;術后出現嚴重并發癥。

1.3 研究方法

STX6檢測:采用免疫組織化學En Vision法染色,4 μm石蠟切片在60 ℃下烘烤2 h,加入二甲苯和梯度乙醇脫蠟至水,采用檸檬酸熱修復法抗原修復,加入3%(質量分數)過氧化氫封閉,一抗4 ℃孵育過夜,滴加HRP標記的二抗,室溫孵育30 min,常規DAB顯色,設置PBS代替一抗作為陰性對照組,已知陽性片作為陽性對照組。安排兩名經驗豐富的病理科醫師采用雙盲法評價STX6表達情況,于400倍視野鏡下觀察胃癌組織和癌旁組織的腫瘤細胞及染色程度,參照馬麗等[8]研究評價腫瘤細胞和染色程度,腫瘤細胞:0分(無陽性腫瘤細胞)、1分(<10%陽性腫瘤細胞)、2分(11%～35%陽性腫瘤細胞)、3分(36%～70%陽性腫瘤細胞)、4分(>70%陽性腫瘤細胞)。染色程度:1分(淡黃色)、2分(黃棕色)、3分(棕褐色)。將陽性比例和染色程度得分相乘即得到最終得分,0分為STX6陰性表達,1～12分為STX6陽性表達。

蛋白質免疫印跡實驗:采用蛋白質免疫印跡實驗檢測STX6表達情況,操作如下。根據試劑盒說明書要求提取胃癌組織蛋白,采用BCA法測定總蛋白濃度,蛋白提取完成后放置于-80 ℃冰箱保存。采用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)凝膠配制100 g·L-1的分離膠和80 g·L-1的濃縮膠進行電泳,電泳結束后轉膜1.5 h,用磷酸鹽吐溫緩沖液洗膜,洗膜后用50 g·L-1的脫脂牛奶封閉;一抗是STX6抗體(Abcam公司,ab140607),抗體在4 ℃環境下孵育過夜,二抗室溫孵育30 min;最后,于暗室曝光顯影,分析STX6相對表達量。

1.4 臨床病理資料收集、隨訪及預后監測

查閱胃癌患者電子病例檔案,收集腫瘤部位、腫瘤直徑、分化程度、TNM分期、淋巴結轉移、人類表皮生長因子受體-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)等病理資料。所有患者出院后均接受隨訪,每3個月進行1次電話隨訪或門診復查,門診復查內容主要包括胸部CT、胃鏡、腫瘤標志物等,隨訪時間截至2023年6月31日,記錄患者生存時間。

1.5 觀察指標

(1)不同臨床病理特征患者胃癌組織中STX6表達情況;(2)胃癌患者的遠期預后;(3)胃癌患者臨床病理特征、遠期預后與STX6表達的關聯性。

1.6 統計學方法

2 結果

2.1 胃癌組織中STX6表達情況

免疫組織化學法檢測結果顯示,胃癌組織STX6表達陽性率為65.85%(54/82),高于癌旁組織中50.00%(41/82)(χ2=4.228,P=0.040)。

2.2 胃癌組織中STX6表達與臨床病理特征的關系

胃癌組織中STX6表達與腫瘤部位、腫瘤直徑及分化程度無相關性(P>0.05),但與TNM分期、淋巴結轉移及HER-2表達相關(P<0.05)。見表1。

表1 胃癌組織中STX6表達與臨床病理特征的關系[n(%)]

2.3 STX6陽性表達和STX6陰性表達患者的總生存期比較

隨訪結果顯示,STX6陽性表達和STX6陰性表達患者的總生存率分別為74.07%、92.86%(χ2=4.142,P=0.042)。經log-rankχ2檢驗,STX6陽性表達者的總生存時間較STX6陰性表達者短(χ2=16.346,P<0.001)。見圖1。

圖1 STX6陽性表達和STX6陰性表達患者的生存曲線

2.4 胃癌組織中STX6表達與遠期預后的關系分析

經一般雙變量Pearson相關性分析顯示,胃癌組織中STX6表達與患者總生存期呈負相關(r=-0.508,P<0.001)。

3 討論

現階段,臨床對胃癌多采用以手術為主的綜合治療策略,但難早期診斷、術后復發轉移率高等導致胃癌患者總體預后較差[9]。STX6是突觸前膜中的一類特殊蛋白,可通過介導囊泡轉運和膜融合參與多種惡性腫瘤的發生及發展過程[10-11]。目前研究顯示,STX6是一種潛在的致癌基因,影響著食管癌[12]、前列腺癌[13]等多種惡性腫瘤的預后轉歸。。

本研究結果顯示,STX6在胃癌組織和癌旁組織中存在差異表達,且在胃癌組織中的表達更高。胃癌的進展與原癌基因或抑癌基因的異常表達有關,STX6作為一種促癌基因,可維持人體內血管內皮細胞生長因子受體2水平,誘導腫瘤細胞增殖、細胞遷移和血管生成,最終導致胃癌復發轉移[14]。研究發現,抑制STX6功能可阻斷血管內皮細胞生長因子受體2功能,阻礙新生血管生成[10]。提示STX6對血管內皮細胞生長因子受體2的調控機制可能是胃癌復發轉移的重要因素之一。既往大量文獻報道,P53是迄今為止與人類腫瘤關系最密切的基因之一,P53基因的突變和功能喪失會導致新生血管生成,有利于腫瘤快速生長[15-16]。而STX6是P53基因的作用靶點之一,STX6在腫瘤組織中呈高表達會增強P53家族對血管生成基因Smad4的刺激能力,最終導致腫瘤細胞增殖、遷移和侵襲能力增強,增加患者預后不良風險[17-18]。一項針對乳腺癌細胞的研究發現,STX6敲低后可阻礙細胞黏附,引起腫瘤細胞周期停滯并加快腫瘤細胞凋亡,進而對乳腺癌細胞的增殖產生抑制作用[19]。可見STX6在腫瘤的發生和發展中扮演重要角色。Zhou等[20]研究發現,STX6能通過激活USF2/LC3B軸改變腫瘤細胞對化療藥物的敏感性,最終促進惡性腫瘤進展。提示對于胃癌根治術后仍接受化療的患者來說,STX6改變癌細胞對化療藥物的敏感性也可能是胃癌轉移、復發的一個關鍵因素。本研究經Pearson相關性檢驗顯示,胃癌組織中STX6表達與患者總生存期呈負相關。這與上述觀點相符。

本研究還顯示,TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結轉移、HER-2陽性的胃癌組織中STX6陽性比率較高,與馬麗等[8]研究結果大致相符。TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結轉移和HER-2陽性往往預示著腫瘤浸潤程度較深、惡性程度較高,因此具有上述病理特征的胃癌患者STX6陽性表達占比較高。提示在臨床工作中,可以根據STX6表達情況篩選出術后高復發、轉移風險的胃癌患者,并針對此類患者開展相應的治療,可能對改善患者遠期預后有積極意義。

4 結論

胃癌患者的臨床病理特征和遠期預后與STX6表達存在密切相關性,但本研究作為回顧性、單中心研究,病例數量有限,所得結論仍有待大樣本、多中心的前瞻性研究加以驗證。此外,目前STX6在胃癌中的研究證據有限,其在胃癌發生發展中的具體作用機制還有待深入研究。