急性心肌梗死病人血清circCDYL表達與預后的關系

朱小琴 鄧仁生

摘要目的：檢測急性心肌梗死（AMI）病人血清環狀RNACDYL（circCDYL）表達水平，探討其與預后的關系。方法：選取2018年1月—2020年6月恩施土家族苗族自治州中心醫院收治的108例AMI病人作為AMI組，另選取同期健康體檢志愿者110名作為對照組。采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qRTPCR）法檢測受試者血清circCDYL表達水平。隨訪2年，根據circCDYL表達水平分為低表達組（53例）和高表達組（55例），比較兩組隨訪期間主要不良心血管事件（MACE）發生情況，采用KaplanMeier生存曲線分析血清circCDYL與AMI病人總MACE發生率的關系；根據隨訪期間預后情況分為MACE組（48例）和非MACE組（60例），采用Logistic回歸分析AMI病人預后的影響因素；采用受試者工作特征（ROC）曲線評估血清circCDYL對AMI病人預后的預測價值。結果：AMI組血清circCDYL表達水平明顯低于對照組（P＜0.05）。circCDYL低表達組惡性心律失常發生率、心肌梗死復發率明顯高于高表達組（P＜0.05）。KaplanMeier生存曲線分析顯示，circCDYL低表達組總MACE發生率明顯高于circCDYL高表達組（χ2＝17.732，P＜0.001）。多因素Logistic回歸分析表明，circCDYL是AMI病人預后的獨立保護因素（P＜0.05）。ROC曲線結果顯示，血清circCDYL預測AMI病人不良預后的曲線下面積（AUC）為0.855，敏感度為93.8%。結論：AMI病人血清circCDYL表達水平降低，與AMI病人MACE密切相關，對AMI病人預后具有較高的預測價值。

關鍵詞急性心肌梗死；環狀RNACDYL；主要不良心血管事件；預后

doi：10.12102/j.issn.16721349.2024.06.026

急性心肌梗死（acutemyocardialinfarction，AMI）是冠狀動脈粥樣硬化斑塊破裂后形成血栓阻塞血管引發的心肌缺血性壞死［12］。隨著醫療技術的不斷進步，臨床對于AMI的治療手段得到充分改善，但其總體死亡率依然呈不斷升高的趨勢［3］。經皮冠狀動脈介入（PCI）是AMI的主要治療手段，有助于解除血管內部狹窄，恢復血流，但部分病人接受PCI后發生主要不良心血管事件（MACE），預后情況較差［4］。環狀RNA（circRNAs）是一種閉合環狀結構的內源性非編碼RNA，在疾病中發揮重要的調控作用。Wu等［5］分析出多個在AMI中異常表達的circRNA。circCDYL有助于維持心肌細胞的正常發育［6］。一項與心肌梗死相關的動物實驗證實circCDYL能夠促進心肌梗死模型小鼠的心肌細胞再生［7］，由此推測circCDYL在AMI病人中也呈現異常表達。本研究通過檢測AMI病人血清circCDYL表達水平，探討血清circCDYL表達與AMI病人PCI術后MACE發生的關系及對預后評估的臨床價值。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2018年1月—2020年6月我院收治的108例AMI病人作為AMI組，男70例，女38例；年齡42～75（60.50±7.80）歲；體質指數（BMI）為（23.08±3.29）kg/m2。另選取同期健康體檢志愿者110名作為對照組，男65名，女45名；年齡41～74（60.90±8.01）歲；

BMI為（22.78±3.30）kg/m2。兩組性別、年齡、BMI比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。本研究獲得本院倫理委員會批準，受試者及其家屬對本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2納入標準

1）AMI病人符合《急性ST段抬高型心肌梗死診斷和治療指南》［8］中急性ST段抬高型心肌梗死（STEMI）或《不穩定性心絞痛和非ST段抬高心肌梗死診斷與治療指南》［9］中急性非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI）的診斷標準，并經相關檢查確診；2）首次發病；3）入院后及時接受PCI手術治療；4）臨床資料完整。

1.3排除標準

1）患有先天性心臟病、風濕性心臟病等其他類型心臟病病人；2）合并腫瘤、感染性疾病、自身免疫缺陷病病人；3）既往接受過PCI手術或冠狀動脈搭橋治療病人；4）不符合PCI手術指征病人；5）肝腎等重要器官嚴重功能障礙病人。

1.4方法

1.4.1一般資料收集

病人入院后，收集病人一般資料，包括年齡、性別、BMI、吸煙、高血壓、高脂血癥、糖尿病、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDLC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）、血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、白細胞計數（WBC）、肌酸激酶同工酶（CKMB）、心肌肌鈣蛋白I（cTnI）、D二聚體（DD）、心肌梗死類型、Killip分級。

1.4.2樣本收集

收集AMI病人入院時及健康體檢志愿者體檢當日肘靜脈血5mL，4℃下3000r/min離心15min，分離血清，儲存于－80℃冰箱冷凍待測。

1.4.3實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈式反應（qRTPCR）法檢測血清circCDYL表達水平

使用TRIzol試劑（15596026，賽默飛世爾科技公司）提取各組血清中總RNA，使用NanoDropND12000分光光度計（美國Thermo公司）評估總RNA濃度和純度。使用反轉錄試劑盒（RRO47AA，日本Takara公司）反轉錄成cDNA，使用SYBRGreenRealtimePCRMasterMix（QPK201，北京索萊寶科技有限公司）、qRTPCR儀（CFX384，美國BioRad公司）擴增cDNA，采集循環閾值（CT值）。擴增條件：94℃預變性30s，94℃變性5s，60℃退火15s，72℃延伸10s，擴增45個循環。以甘油醛3磷酸脫氫酶（GAPDH）為內參，引物序列：circCDYL正向引物序列為5′CTTAGCTGTTAACGGGAAA3′，反向引物序列為5′CTGTTGAAGTCGTGGATGT3′；GAPDH正向引物序列為5′ACAACTTTGGTATCGTGGAAGG3′，反向引物序列為5′GCCATCACGCCACAGTTTC3′。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司提供。采用2－ΔΔCt方法計算circCDYL的表達量。

1.4.4隨訪

AMI病人接受PCI術后以電話或門診復查的方式進行隨訪，第1年每2個月進行1次隨訪，之后每6個月進行1次隨訪，隨訪時間為24個月。病人發生惡性心律失常、心力衰竭、心源性死亡、復發心肌梗死等MACE情況定義為預后不良，病人出現預后不良事件為終點時間。本研究隨訪截至2022年6月。隨訪期間未出現失訪病例，隨訪率100%。根據AMI病人預后情況分為MACE組（48例）、非MACE組（60例）。

1.5統計學處理

采用SPSS25.0軟件分析數據。符合正態分布的定量資料以均數±標準差（x±s）表示，兩組比較采用t檢驗；定性資料采用χ2檢驗。KaplanMeier生存曲線分析血清circCDYL表達水平與AMI病人總MACE發生率的關系；Logistic回歸分析AMI病人預后的影響因素；受試者工作特征（ROC）曲線評價血清circCDYL對AMI病人預后的預測價值。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1AMI組、對照組血清circCDYL表達水平比較

AMI組血清circCDYL表達水平明顯低于對照組（P＜0.05）。詳見表1。

2.2circCDYL高、低表達組病人MACE發生情況比較及circCDYL表達水平與AMI病人總MACE發生率的關系

以circCDYL表達水平平均值0.68將AMI組分為低表達組（＜0.68，53例）、高表達組（≥0.68，55例）。低表達組發生MACE共35例，高表達組發生MACE共13例。兩組心力衰竭、心源性死亡發生率比較差異無統計學意義（P＞0.05），低表達組惡性心律失常、心肌梗死復發率高于高表達組（P＜0.05）。KaplanMeier生存曲線分析顯示，circCDYL低表達組總MACE發生率高于circCDYL高表達組（χ2＝17.732，P＜0.001）。詳見表2、圖1。

2.3不同預后病人臨床資料比較

MACE組、非MACE組年齡、性別、BMI、吸煙、高血壓、高脂血癥、糖尿病、TC、TG、HDLC、LDLC、Scr、BUN、心肌梗死類型比較差異均無統計學意義（P＞0.05），MACE組WBC、CKMB、cTnI、DD水平及Killip≥3級比例高于非MACE組（P＜0.05），circCDYL表達水平低于非MACE組（P＜0.05）。詳見表3。

2.4AMI病人預后影響因素的Logistic回歸分析

以病人預后情況（發生MACE＝1，未發生MACE＝0）為因變量，以表3中具有統計學意義的指標為自變量，進行Logistic回歸分析。單因素Logistic回歸分析結果表明，WBC、CKMB、cTnI、Killip分級（≥3級）、circCDYL是AMI預后的影響因素（P＜0.05）；多因素Logistic回歸分析結果表明，Killip分級（≥3級）是AMI預后情況的獨立危險因素（P＜0.05），circCDYL是AMI預后情況的獨立保護因素（P＜0.05）。詳見表4。

2.5血清circCDYL對AMI病人預后的預測價值

ROC曲線結果顯示，血清circCDYL預測AMI病人不良預后的曲線下面積（AUC）為0.855，95%CI（0.783，0.926），截斷值為0.742，敏感度為93.8%，特異度為68.3%，約登指數為0.621。詳見圖2。

3討論

中國等發展中國家與AMI相關的死亡病人占全球缺血性心臟病死亡病人的80%以上［10］。AMI病情進展迅速，往往因送醫不及時延誤救治，嚴重者造成死亡，而得以存活的病人往往面臨著預后發生MACE的情況。臨床急需尋找一種能夠有效預測病人MACE發生的生物標志物以幫助臨床對癥治療并采取干預措施改善預后。

circRNA不受RNA外切酶的影響，表達更穩定且不易發生降解，在真核生物中分布廣泛，可以充當miRNA或與RNA結合蛋白（RBP）結合發揮作用［11］。研究表明，多種circRNA在AMI發生發展過程中發揮著重要作用［1214］。本研究中，AMI病人血清circCDYL表達水平明顯低于對照組，Zhang等［7］通過動物實驗和細胞實驗證實，circCDYL在AMI小鼠的心臟組織和心肌細胞中表達明顯降低，提示circCDYL對AMI具有抑制作用。Siede等［6］通過RNA測序發現，circCDYL水平隨著心肌細胞的發育過程逐漸升高，表明circCDYL對心肌細胞具有保護作用。研究表明，在梗死心肌中，circRNA能夠海綿化miRNAs/RBP，形成circRNAmiRNA/RBP調控網絡在心肌梗死中發揮不同作用［15］。circCDYL即是通過靶向miR47935p/淀粉樣前體蛋白通路來促進AMI小鼠的心肌細胞增殖和心肌血管生成［6］。但其在AMI病人中是否通過相同的機制發揮作用需要進一步的研究。然而，通過查閱文獻發現，circCDYL在不同疾病中所發揮的作用不同，在腎母細胞瘤組織中，circCDYL表達下調，在疾病中發揮抑制作用［16］，而在乳腺癌等相關癌癥病人中表達上調，對疾病就有促進作用［17］，可能與不同疾病發病機制不同相關。

目前臨床對于AMI最有效的治療方法是及時進行PCI，以實現再灌注，但PCI術后容易出現的MACE也不能忽視。本研究中，AMI病人血清circCDYL低表達組心力衰竭、心源性死亡發生率與高表達組相比差異無統計學意義，低表達組惡性心律失常發生率、心肌梗死復發率明顯高于高表達組，可能與AMI病人的個體差異具有一定的關系，KaplanMeier生存曲線分析顯示，circCDYL低表達組總MACE發生率明顯高于circCDYL高表達組，可能是由于血清circCDYL對心肌細胞具有保護作用，circCDYL低表達的AMI病人心肌細胞受損更嚴重，在PCI術后心肌受損的程度進一步加重，因此發生MACE的概率就更大。以發生MACE為預后不良，通過多因素Logistic回歸分析發現，circCDYL是AMI病人預后的獨立保護因素。ROC曲線顯示，血清circCDYL對AMI病人不良預后具有較高的預測價值。同時本研究單因素Logistic回歸分析發現，WBC、CKMB、cTnI水平、Killip分級與AMI病人的不良預后有關，臨床可根據病人血清circCDYL表達水平，結合病人臨床指標，對病人的預后及時做出判斷并采取相應的干預措施，以改善病人預后情況。

綜上所述，AMI病人血清circCDYL表達水平降低，與MACE的發生密切相關，是AMI病人預后的獨立保護因素，對AMI病人不良預后具有較高的預測價值，有望成為AMI預后的生物標志物。但本研究并未對circCDYL在AMI中的具體作用機制進行研究，后續可結合已有的研究結果，從circCDYLmiR47935p/淀粉樣前體蛋白通路進行更加深入的研究，同時查閱更多的最新研究成果進行深入探討。

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（收稿日期：20220906）

（本文編輯郭懷印）

作者單位恩施土家族苗族自治州中心醫院（湖北恩施445000）

通訊作者鄧仁生，Email：335899120@qq.com

引用信息朱小琴，鄧仁生.急性心肌梗死病人血清circCDYL表達與預后的關系［J］.中西醫結合心腦血管病雜志，2024，22（6）：10991103.