上市利巴韋林滴眼液抑菌效力評價及分析研究

摘要：目的 評價利巴韋林滴眼液抑菌效力能否滿足《中國藥典》2020年版四部通則lt;1121gt;的有關要求，分析抑菌劑種類和濃度差異，探索處方優化條件。方法 按“《中國藥典》四部通則1121抑菌效力檢查法”對利巴韋林滴眼液制劑、不含抑菌劑的利巴韋林溶液、抑菌劑溶液（苯扎溴銨、羥苯乙酯、硫柳汞鈉）進行抑菌效力考察。結果 利巴韋林溶液對細菌有一定抑菌作用，對真菌抑菌效力較低，需要添加適宜的抑菌劑以保證其抑菌效力滿足要求。苯扎溴銨溶液（0.1 mg/mL）抑菌效力可達到A級標準，硫柳汞鈉溶液（0.006 mg/mL）可達到B級標準，羥苯乙酯溶液（0.25 mg/mL）不滿足B級標準。抽檢的11份利巴韋林滴眼液制劑中，含苯扎溴銨的5份樣品抑菌效力可達到A級，含硫柳汞鈉的1份樣品含可達到B級，羥苯乙酯的5份樣品不滿足抑菌效力標準要求。結論 綜合抑菌效力試驗數據及3種抑菌劑毒性、國內外常用濃度、限值范圍等信息，利巴韋林滴眼液中苯扎溴銨的濃度仍有優化下降的空間，羥苯乙酯和硫柳汞鈉在利巴韋林滴眼液處方中抑菌效力不滿足要求或毒性較大，不適宜作為抑菌劑使用，建議優化處方更換更加適宜的抑菌劑。

關鍵詞：抑菌效力；利巴韋林；滴眼液；多劑量

中圖分類號：R978.7 文獻標志碼：A

Evaluation and analysis of antimicrobial effectiveness in ribavirin eye drops

Abstract" " Objective" "To evaluate the antimicrobial effectiveness of ribavirin eye drops for matching the general requirements of the 2020 edition of Chinese Pharmacopoeia （ChP） lt;1121gt;， and analyze the effectiveness of different kinds of antimicrobials with different concentrations for optimizing the prescription. Methods" " Three sample groups were investigated according to the antimicrobial effectiveness testing method in ChP， including 11 ribavirin eye drops， ribavirin solution without antimicrobials and antimicrobial solutions （benzalammonium bromide， hydroxyphenylate and thiomersal sodium）. Results" " The antimicrobial effectiveness of ribavirin solution was fair on bacteria; however， it was not good enough on fungi. Apparently， it was necessary to add appropriate antimicrobial preservatives. The antimicrobial effectiveness of benzalkonium bromide solution （0.1 mg/mL） could meet the grade A standard; thiomersal sodium solution （0.006 mg/mL） could meet the grade B standard; but hydroxyphenylate solution"（0.25 mg/mL） could not meet the grade B standard. Among the 11 samples of ribavirin eye drops， 5 samples containing benzalammonium bromide could reach grade A， 1 sample containing thiomersal sodium could reach grade B， and 5 samples containing hydroxyphenylate could not meet the requirements. Conclusion" " Based on our experimental data and information regarding the toxicity， commonly used concentrations， and limit values of the three antimicrobial preservatives， the concentration of benzalkonium bromide in ribavirin eye drops should be optimized and decreased. Hydroxyphenylate and thiomersal sodium were not suitable as antimicrobials in ribavirin eye drops， for they did not meet the requirements or had high toxicity. It was suggested to optimize the prescription by investigating the effectiveness and safety of antimicrobial preservatives.

Key words" " Antimicrobial effectiveness; Ribavirin; Eye drops; Multiple-unit container

《中國藥典》（2020年版）四部lt;1121gt;抑菌效力檢查法[1]規定：如果藥物本身不具有充分的抗菌效力，那么應根據制劑特性（如水溶性制劑）添加適宜的抑菌劑，以防止制劑在正常貯藏或使用過程中由于微生物污染和繁殖，使藥物變質而對使用者造成危害，尤其是多劑量包裝的制劑。

滴眼液是直接用于眼部治療作用的無菌制劑[2]，目前我國仍有許多滴眼液使用多劑量包裝。為防止此類制劑在正常貯藏或使用過程中由于微生物污染和繁殖，使藥物變質而對使用者造成危害，需考察藥物本身是否具有充分的抗菌效力，是否需要添加抑菌劑，以及所添加抑菌劑是否滿足《中國藥典》2020年版四部“1121抑菌效力檢查法”的要求。抗生素類滴眼液因主藥成分有較強的抑菌作用，其處方中抑菌劑的使用更加復雜，需要考慮制劑對主藥抑菌譜之外微生物的抑菌效力是否滿足要求。因此，近年來抗生素類滴眼液抑菌效力評價受到較多關注[3-5]。利巴韋林為抗病毒處方藥，體外具有抑制呼吸道合胞病毒、流感病毒、甲肝病毒和腺病毒等多種病毒生長的作用[6]。利巴韋林滴眼液為溶液劑，適用于單純皰疹病毒性角膜炎，其為多劑量包裝的滴眼劑[7]。目前尚缺少利巴韋林溶液對細菌和真菌的抑菌效力考察相關研究，其制劑處方中抑菌劑的種類和用量也有較大差別[8]。

針對上述目的，選取國家藥品抽檢的11個生產企業的利巴韋林滴眼液各1批，配制處方中相應濃度的利巴韋林溶液和抑菌劑（苯扎溴銨、羥苯乙酯、硫柳汞鈉）溶液，同時增加表皮葡萄球菌這一眼表最常見菌株[9]，進行抑菌效力考察。

1 儀器及材料

1.1 儀器

1389型AII級生物安全柜（美國Thermo Fisher公司）； BD720/KB400型生物培養箱（德國Binder公司）；GR110DA型壓力蒸汽滅菌鍋[致微（廈門）儀器有限公司]；CP225D型電子天平（德國Sartorius公司）。

1.2 培養基及試驗菌種

胰酪大豆胨瓊脂培養基、胰酪大豆胨液體培養基、沙氏葡萄糖液體培養基、沙氏葡萄糖瓊脂培養基購自北京三藥科技開發公司，培養基適用性檢查試驗結果符合《中國藥典》2020年版[10]要求。

金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]第3代；銅綠假單胞菌[CMCC（B）10 104]第3代；表皮葡萄球菌[CMCC（B）26 069]；大腸埃希菌[CMCC（B）44 102]第3代；白念珠菌[CMCC（F）98 001]第3代；黑曲霉[CMCC（F）98 003]第3代；來源為中國食品藥品檢定研究院購買的0代凍干菌，按照《中國藥典》2020年版要求進行確認。

1.3 試驗樣品

抽檢的市售利巴韋林滴眼液樣品及編號見表1，11份利巴韋林滴眼液使用的抑菌劑共有3種，分別是苯扎溴銨（5份）、羥苯乙酯（5份）、硫柳汞鈉（1份）。苯扎溴銨的標示濃度均為0.1 mg/mL，樣品的實測值與標示值比值均在80.0%以上；羥苯乙酯的標示濃度由低到高依次為0.25 mg/mL（2份）、0.3 mg/mL（2份）、0.4 mg/mL（1份），樣品的實測值與標示值比值均在80.0%以上；硫柳汞鈉的標示濃度為0.02 mg/mL，實測值與標示值比值為30.0%。

為考察利巴韋林與抑菌劑是否有協同抑菌作用，本研究根據市售利巴韋林滴眼液樣品中的標示濃度配制了不同濃度抑菌劑溶液及不含抑菌劑的利巴韋林滴眼液。抑菌劑的考察濃度為：苯扎溴銨0.1 mg/mL（標示濃度）、羥苯乙酯0.25 mg/mL（標示最低濃度）、硫柳汞鈉0.006 mg/mL（實測濃度）；利巴韋林的考察濃度為：1.0和5.0 mg/mL（標示濃度）。具體信息見表2。

2 方法與結果

2.1 計數方法適用性檢查

為保證供試品中加入微生物存活菌數測定結果的準確性，應進行存活菌數測定方法適用性試驗。存活菌數測定方法及方法適用性試驗照《中國藥典》2020年版四部“1105非無菌產品微生物限度檢查：微生物計數法”進行[10]。檢驗結果見表3。

表3的回收率數據表明：苯扎溴銨溶液及含有苯扎溴銨的樣品對細菌的抑制性較強，細菌組計數需用1∶50的供試液；而羥苯乙酯和硫柳汞鈉溶液及含有相應抑菌劑的樣品對細菌的抑制性較弱，細菌數計數用1∶10的供試液甚至原液即可，但硫柳汞鈉對真菌的抑制性強于細菌，真菌計數需用1∶50的供試液。1.0和5.0 mg/mL濃度的利巴韋林溶液對細菌和真菌的抑制性較弱，細菌計數和真菌計數均可用原液。

2.2 抑菌效力測定

按《中國藥典》2020年版四部“1121抑菌效力檢查法”規定，分別用金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、表皮葡萄球菌[CMCC（B）26 069]、銅綠假單胞菌[CMCC（B）10104]、白念珠菌[CMCC（F）98001]和黑曲霉[CMCC（F）98003]菌懸液接種。將試驗菌直接接種于供試品容器中進行試驗，接種菌液的體積為供試品體積的1%，混合均勻，每份樣品及溶液每種菌各制備2支，25 ℃避光貯存。分別在6 h、24 h、第7天、第14天、第28天取接種后的供試品按上述適用性檢查確定的菌數測定方法測定金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白念珠菌、黑曲霉的存活菌數，以菌數變化情況評價其抑菌效力；計算每一種試驗菌在供試品中存活菌數，并換算成lg值，與供試品中接種菌數的lg值或前一測定時間點存活菌數的lg值比較，計算經過不同放置時間后的對數下降值（lg），標準要求見表4。

利巴韋林溶液、抑菌劑溶液、利巴韋林滴眼液抑菌效力檢查結果及整體評價見表5～7。

表5表明，1.0 mg/mL的利巴韋林溶液僅對金黃色葡萄球菌的抑制性滿足B級，對其他菌的抑制性均低于B級；5.0 mg/mL的利巴韋林溶液對細菌的抑制性已可滿足B級，但對真菌的抑制性均低于B級。

表6表明，0.1 mg/mL的苯扎溴銨溶液對細菌和真菌的抑制性均可達到A級；0.25 mg/mL的羥苯乙酯僅對金黃色葡萄球菌的抑制性達到B級，對其他菌的抑制性均低于B級；0.006 mg/mL的硫柳汞鈉對銅綠假單胞菌和真菌的抑制性可達到A級，對革蘭陽性的金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的抑制性只能達到B級。

表6～7表明，利巴韋林滴眼液的抑菌效力等級基本與相應濃度的抑菌劑基本一致，即：含苯扎溴銨的滴眼液（Y1～Y5）抑菌效力可達到A級，含羥苯乙酯的滴眼液（Y6～Y10）僅對個別菌的抑制性達到B級，但整體抑菌效力均達不到B級，含硫柳汞鈉的滴眼液對表皮葡萄球菌的抑制性為B級，對其他菌抑制性A級，整體B級。

3 討論及結論

查詢國內外相關文獻、Inactive Ingredient Search for Approved Drug Product（美國FDA批準藥物非活性成分數據庫）[11]、Handbook of Pharmaceutical Excipients（藥用輔料手冊）[12]、《中國醫院制劑規范》[13]和《現代藥劑學》[14]等數據庫和資料，梳理苯扎溴銨、羥苯乙酯和硫柳汞鈉的抑菌制劑、毒性及國內外滴眼劑常用濃度等基本信息，見表8。比較抽檢的11個生產企業的抑菌劑濃度與國內外常用濃度的差異，見表9。

抽檢的利巴韋林滴眼液11個生產企業中，抑菌劑為苯扎溴銨的5個企業處方的抑菌效力均可達到A級，雖然抑菌劑濃度低于國內常用濃度，且在FDA規定濃度內，但其鑒于其對眼部細胞和組織的毒性，結合抑菌試驗的數據，其濃度仍有優化下降的空間；抑菌劑為羥苯乙酯的5個企業處方的抑菌效力均達不到B級，但其濃度均已高出FDA規定的口服制劑濃度，考慮其毒性，建議上述樣品的生產企業更換抑菌劑的種類。抑菌劑為硫柳汞鈉的企業處方雖達到B級要求，也低于國內常用濃度，且在FDA規定濃度內，但考慮到其毒性，也建議上述樣品的生產企業更換抑菌劑的種類。抑菌效力整體評價結果見表10。

抑菌劑在多劑量包裝的藥物制劑全生命周期中，對降低微生物污染風險發揮重要作用，在藥品生產過程中配合嚴格的GMP管理盡量降低藥品的生物負載，從而控制制劑中抑菌劑用量。所有抑菌劑都具有一定的毒性，制劑中抑菌的量應當為最低有效量。綜合抑菌效力試驗數據及3種抑菌劑毒性、國內外常用濃度、限值范圍等信息，本次抽檢的11份利巴韋林滴眼液抑菌劑的種類及用量均有優化空間，其中苯扎溴銨的濃度可進一步降低，羥苯乙酯和硫柳汞鈉抑菌效力不足或毒性較大，不適宜作為抑菌劑使用。建議相關生產企業優化處方，篩選更加適宜的抑菌劑種類和濃度。

參 考 文 獻

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