基于LDHA基因和Wnt/β-catenin信號通路探討自噬在卵巢癌細胞侵襲和遷移及糖酵解中的作用

［摘 要］目的 探討自噬通過調控乳酸脫氫酶A（LDHA）和Wnt/β-連環蛋白（β-catenin）信號通路對卵巢癌細胞侵襲、遷移能力和糖酵解的影響。方法 2021年1月至2022年12月在空軍軍醫大學西京醫院使用厄爾平衡鹽溶液（EBSS）饑餓處理誘導人卵巢腺癌細胞系SKOV3細胞誘導自噬。細胞實驗分組1為：Control組、EBSS組和EBSS+3-MA組；細胞實驗分組2為：EBSS+NC-shRNA組、EBSS+LDHA-shRNA1組和EBSS+LDHA-shRNA2組；細胞實驗分組3為：EBSS+NC-shRNA組、EBSS+β-catenin-shRNA1組和EBSS+β-catenin-shRNA2組。采用實時熒光定量PCR（RT-qPCR）法、Western blotting法、Transwell實驗、細胞免疫熒光染色等檢測并統計分析有關表達量的情況。結果 Control組和EBSS組及EBSS+3-MA組間細胞的微管相關蛋白1輕鏈3（LC3）-Ⅱ/LC3-Ⅰ表達量相對比值比較，差異有統計學意義（F＝113.900，P＜0.01）。Control組和EBSS組及EBSS+3-MA組間細胞的侵襲和遷移細胞數及基質金屬蛋白酶（MMP）2和MMP9蛋白相對表達量比較，差異均有統計學意義（F值分別為2 448.000、1 405.000、111.000、132.200，P＜0.01）。Control組和EBSS組及EBSS+3-MA組間細胞的LDHA mRNA、GLUT1 mRNA、LDHA蛋白相對表達量比較，差異均有統計學意義（F值分別為311.400、66.940、154.200，P＜0.01）。NC-shRNA組和LDHA-shRNA1組及LDHA-shRNA2組間細胞的LDHA蛋白相對表達量比較，差異有統計學意義（F＝123.200，P＜0.01）。Control組和EBSS組及EBSS+3-MA組間細胞的β-catenin、p-β-catenin磷酸化相對表達量比較，差異均有統計學意義（F值分別為206.500、222.200，P＜0.01）。NC-shRNA組和β-catenin-shRNA1組及β-catenin-shRNA2組間細胞的β-catenin相對表達量比較，差異有統計學意義（F＝127.000，P＜0.01）。結論 饑餓誘導的自噬激活可促進卵巢癌的侵襲、遷移能力及糖酵解活性，其機制可能與自噬激活Wnt/β-catenin信號通路并上調LDHA表達有關。

［關鍵詞］卵巢癌；自噬；乳酸脫氫酶A；糖酵解；β-連環蛋白

Doi：10.3969/j.issn.1673-5293.2025.02.006

［中圖分類號］R173 ［文獻標識碼］A

［文章編號］1673-5293（2025）02-0037-10

Role of autophagy in invasion and migration and glycolysis of ovarian cancer cellsinvestigated based on LDHA gene and Wnt/β-catenin signaling pathway

CHEN Liangfeng1，2，LV Xiaohui3，WANG Jian3，MA Yuanyuan4

（1.Department of Obstetrics and Gynecology，Ankang Central Hospital，Shaanxi Ankang 725000，China;2.Department of Obstetrics and Gynecology，Ankang Gaoxin Hospital，Shaanxi Ankang 725000，China;3.Department of Obstetrics and Gynecology，the First Affiliated Hospital of the Air Force Military Medical University，Shaanxi Xi′an 710032，China;4.Department of Obstetrics and Gynecology，Yan′an Central Hospital，Shaanxi Yan′an 716000，China）

［Abstract］ Objective To investigate the effects of autophagy on ovarian cancer cell invasion，migration and glycolysis by regulating lactate dehydrogenase A （LDHA） and Wnt/β-caten β in signaling pathways. Methods From January 2021 to December 2022，autophagy was induced by starvation treatment with Earl balanced salt solution （EBSS） in Xijing Hospital of Air Force Medical University，human ovarian adenocarcinoma cell line SKOV3 cells. Cell experiment group 1 was divided into control group，EBSS group and EBSS+3-MA group. Cell experimental group 2 was as follows：EBSS+NC-shRNA group，EBSS+LDHA-shRNA1 group and EBSS+LDHA-shRNA2 group. Group 3 of the cell experiment was EBSS+NC-shRNA group，EBSS+β-catenin-shRNA1 group，and EBSS+β-catenin-shRNA2 group. Real-time quantitative PCR （RT-qPCR），Western blotting，Transwell assay，and cell immunofluorescence staining were used to detect and statistically analyze the expression level. Results There was a significant difference in the relative ratio of LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ expression between control group，EBSS group and EBSS+3-MA group （F＝113.900，P＜0.01）. There were significant differences in the number of invasive and migrating cells and the relative expression levels of MMP2 and MMP9 proteins between the Control group，the EBSS group and the EBSS+3-MA group （F values were 2 448.000，1 405.000，111.000 and 132.200，respectively，P＜0.01）. There were significant differences in the relative expressions of LDHA mRNA，GLUT1 mRNA and LDHA protein between the control group，the EBSS group and the EBSS+3-MA group （F values were 311.400，66.940 and 154.200，P＜0.01，respectively）. There was a significant difference in the relative expression of LDHA protein between the NC-shRNA group，LDHA-shRNA1 group and LDHA-shRNA2 group （F＝123.200，P＜0.01）. There were significant differences in the relative expressions of β-catenin and phosphorylated p-β-catenin between the control group，the EBSS group and the EBSS+3-MA group （F-values were 206.500 and 222.200，P＜0.01，respectively）. There was a significant difference in the relative expression of β-catenin between the NC-shRNA group，the β-catenin-shRNA1 group and the β-catenin-shRNA2 group （F＝127.000，P＜0.01） . Conclusion Starvation-induced autophagy activation can promote the invasion，migration and glycolytic activity of ovarian cancer，which may be related to the activation of Wnt/β-catenin signaling pathway and up-regulation of LDHA expression by autophagy.

［Key words］ ovarian cancer;autophagy;lactate dehydrogenase A;glycolysis;β-catenin

卵巢癌是世界范圍內最常見的婦科惡性腫瘤之一，因早期診斷準確率低，晚期廣泛轉移導致死亡率最高，預后差［1-2］。雖然卵巢癌的治療策略已經取得了很大的進展，包括手術、化療和放療，但卵巢癌患者的5年生存率仍然低于45%［3］。因此，尋找更多有效地治療卵巢癌的方法迫在眉睫。

正常細胞在有氧條件下，首先通過糖酵解轉化為丙酮酸，然后丙酮酸通過三羧酸循環進入線粒體進行氧化磷酸化，并產生大約38個三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）分子。當氧氣不足時，丙酮酸轉化為乳酸，通過厭氧糖酵解只產生2個ATP分子。而在腫瘤中存在另一種被稱為“沃伯格效應”的現象，即使有足夠的氧氣，腫瘤細胞仍然使用效率較低的“有氧糖酵解”過程來更快地獲得能量［4］。由于氧化磷酸化的代謝損傷，ATP濃度降低。為了補償減少的能量產出，腫瘤細胞大量攝取葡萄糖，厭氧糖酵解、戊糖磷酸途徑等上調，生物合成增加。在腫瘤的中心區域通常是低氧、缺氧環境，腫瘤細胞會更多地進入“沃伯格效應”的能量代謝重編程，這將需要更高地合成代謝。細胞（巨）自噬（autophagy）是一種具有維持穩態和促進細胞生存功能的溶酶體分解代謝過程，自噬后的降解產物可作為底物被腫瘤細胞用于新的合成代謝途徑［5］。自噬是一把雙刃劍，具有促癌和抑癌兩種效應。自噬降解去除受損或功能失調的細胞器和損傷的DNA，可以抑制腫瘤的發展；也可以促進腫瘤細胞增殖，增強腫瘤細胞在缺氧惡劣環境中的存活并賦予其耐藥性［5-6］。缺氧導致的ATP濃度降低可上調缺氧誘導因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α），激活5′-腺苷磷酸依賴蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）途徑，增強癌細胞存活率［7-8］。但自噬如何調控葡萄糖代謝尚不明晰。

乳酸脫氫酶A（lactate dehydrogenase A，LDHA）是糖酵解過程中的關鍵酶。在卵巢癌中，LDHA表達顯著增強，并賦予卵巢癌聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（poly ADP-ribos polymerase，PARP）抑制劑抗性［9］。但是LDHA在糖酵解調節中的作用仍不清楚。本研究旨在探討自噬、LDHA影響卵巢癌細胞侵襲和遷移及糖酵解能力的機制，為進一步研究自噬在卵巢癌疾病發展和治療中的作用提供理論基礎。

1研究材料與方法

自2021年1月至2022年12月在空軍軍醫大學西京醫院婦產科，研究自噬通過調控LDHA和Wnt/β-連環蛋白（β-catenin）信號通路對卵巢癌細胞侵襲、遷移能力及糖酵解的影響。

本研究已經通過空軍軍醫大學第一附屬醫院醫學倫理委員會審批（編號：20241183）。

1.1主要試劑和儀器

人卵巢腺癌細胞系SKOV3細胞，中國科學院ATCC細胞庫；RPMI 1640培養基、胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）厄爾平衡鹽溶液（Earle’s balanced salt solution，EBSS）、3-甲基腺嘌呤（3-methyl-3H-adenine，3-MA），美國Gibco公司；乳酸檢測試劑盒、葡萄糖檢測試劑盒，上海碧云天生物有限公司；NC-shRNA、LDHA-shRNA1、LDHA-shRNA2、β-連環蛋白（β-catenin）-shRNA1、β-catenin-shRNA2，BCA蛋白測定試劑盒，賽默飛世爾科技公司（中國）；LipofectamineTM2000試劑盒、TRIzol試劑，美國Invitrogen公司；PrimeScript RT-PCR試劑盒、SYBR Green試劑盒，寶生物工程（大連）有限公司；微管相關蛋白1輕鏈3（microtubule-associated protein 1 light chain 3，LC3）、基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）2、MMP9、LDHA、β-catenin一抗，美國Sigma公司。實時熒光定量PCR（real time quantitative PCR，RT-qPCR）儀，美國Applied Biosystems公司；多功能酶標儀，奧地利TECAN公司；倒置普通光學顯微鏡，德國Leica公司。

1.2方法

細胞實驗分組1為：Control組、EBSS組和EBSS+3-MA組；細胞實驗分組2為：EBSS+NC-shRNA組、EBSS+LDHA-shRNA1組和EBSS+LDHA-shRNA2組；細胞實驗分組3為：EBSS+NC-shRNA組、EBSS+β-catenin-shRNA1組和EBSS+β-catenin-shRNA2組。

1.2.1細胞培養與轉染

將人卵巢腺癌細胞系SKOV3細胞在含10%胎牛血清、100IU/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的RPMI 1640培養基中，于37℃、5%CO2的細胞培養箱進行培養。使用EBSS或10μmol/L自噬抑制劑3-MA處理細胞6h。收集對數期細胞，接種于6孔板，密度為1×106細胞/孔。進一步培養細胞至50%融合，使用Lipofectamine 3000并根據說明書將NC-shRNA、LDHA-shRNA1、LDHA-shRNA2、β-catenin-shRNA1和β-catenin-shRNA2轉染至細胞中。轉染48h后，收集細胞用于后續實驗。shRNAs序列如下：

LDHA-shRNA1：5′-GGATATACCAACTGGG CTA-3′，LDHA-shRNA2：5′-GTACAGTCCTGAT TGCATC-3′；β-catenin-shRNA1：5′-TTGGAATGA GACTGCTGAT-3′，β-catenin-shRNA2：5′-CATGG AAGAAATAGTTGAA-3′；NC-shRNA：5′-TTCTC CGAACGTGTCACGT-3′。

1.2.2 RT-qPCR檢測分析

按照說明書，使用Trizol試劑從細胞中提取總RNA。然后，使用PrimeScript逆轉錄試劑盒，將總RNA逆轉錄為cDNA。隨后，采用SYBR Green進行RT-qPCR擴增分析。每個樣本中基因的相對表達均采用2-ΔΔCt法進行定量。GAPDH作為基因的內參。

引物序列如下：GLUT1 F 5′-CCCCGTCCTGC TGCTATTG-3′，R 5′-GCACCGTGAAGATGATG AAGAC-3′；LDHA F 5′-CCAACATGGCAGCCTT TTCCTTAGAACACC-3′，R 5′-GACGTGCCCCA GCCGTGATAATGAC-3′；LDHB F 5′-GTGGAG TGGAGTGAATGTGG-3′，R 5′-TGTCTGTTCCC ATTCTGGA-3′；β-Actin F 5′-TGATGATATCGC CGCGCTCG-3′，R 5′-AGGCCCAGAGCAAGAGA GGC-3′。所有實驗重復測定6次。

1.2.3 Western blotting法

使用放射免疫沉淀法裂解緩沖液（radio immunoprecipitation assay lysis buffer，RIPA）從SKOV3細胞中提取總蛋白，用BCA檢測試劑盒測定蛋白濃度。蛋白樣品在10% SDS-PAGE上分離后，轉移到聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride membrane，PVDF）上。5%脫脂牛奶封閉后，用一抗LDHA（1∶1 000稀釋）、β-catenin（1∶1 000稀釋）和β-Actin（1∶1 000稀釋）4℃孵育過夜。然后用TBST沖洗膜3次，山羊抗兔IgG二抗（1∶5 000稀釋）孵育1h，再次沖洗，最后用ECL化學發光檢測試劑觀察蛋白條帶，并使用Image J軟件分析目標條帶的灰度值。所有實驗重復測定6次。

1.2.4 Transwell實驗檢測細胞侵襲和遷移

檢測細胞侵襲實驗時，將轉染的2×105個SKOV3細胞接種在涂有Matrigel膠的Transwell小室上腔中，下腔加入600μL含10% FBS的完全培養基。置于細胞培養箱中常規培養24h后，將小室取出。用PBS洗滌細胞后，將細胞用4%多聚甲醛固定30min，并用棉簽小心地擦拭小室內側底面的細胞，在室溫下放置5min進行空氣干燥。用0.1%結晶紫染色30min，隨后PBS洗滌3次，風干。在倒置顯微鏡下隨機選擇5個不同的視野進行觀察拍照，使用Image J軟件計數細胞數量。Transwell遷移實驗使用未涂有Matrigel膠的Transwell小室進行實驗，其余實驗步驟與侵襲實驗一致。所有實驗重復測定6次。

1.2.5細胞免疫熒光染色

細胞爬片后，在培養板中用PBS洗滌細胞，隨后用4%多聚甲醛固定15min，0.2% Triton X-100通透10min，山羊血清封閉30min，PBS洗滌3次。用抗LC3的一抗（1∶500稀釋）4℃孵育過夜。然后，將細胞與相應的異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，FITC）標記的二抗（1∶1 000稀釋）室溫下孵育1h，并用4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（4′，6-Diamidino-2-phenylindole，DAPI）標記細胞核。共聚焦熒光顯微鏡下觀察細胞并拍照。

1.2.6細胞能量代謝水平的檢測

收集轉染后的細胞培養基，分別使用葡萄糖檢測試劑盒和乳酸檢測試劑盒，根據說明書測定葡萄糖消耗和乳酸產量。結果按細胞總蛋白量歸一化。所有實驗重復測定6次。

1.3統計學方法

應用SPSS 21.0統計學軟件對數據進行分析。計量數據以均數±標準差（x-±s）的形式表示，采用t檢驗分析兩組之間的差異，使用單因素方差分析多組間差異。當P＜0.05為差異具有統計學意義。

2結果

2.1饑餓對卵巢癌細胞自噬的影響

采用Western blotting和免疫熒光染色法對相應指標進行檢測，結果顯示，與Control組比較，EBSS組SKOV3細胞自噬蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表達量相對比值顯著升高，熒光斑點聚集增多；與EBSS組比較，EBSS+3-MA組細胞自噬蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表達量相對比值顯著降低，熒光斑點減少；三組間細胞的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表達量相對比值比較，差異有統計學意義（F＝113.900，P＜0.01），表明饑餓處理可以誘導卵巢癌細胞自噬，見圖1和表1。

2.2饑餓及自噬對卵巢癌細胞侵襲和遷移的影響

Transwell實驗結果顯示，與Control組比較，EBSS組SKOV3細胞侵襲和遷移細胞數顯著增加（P＜0.01），MMP2和MMP9蛋白相對表達量顯著升高（P＜0.01）；與EBSS組比較，EBSS+3-MA組細胞侵襲和遷移細胞數顯著減少（P＜0.01），MMP2和MMP9蛋白相對表達量顯著降低（P＜0.01）；三組間細胞的侵襲和遷移細胞數及基質金屬蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2，MMP2）和MMP9蛋白相對表達量比較，差異均有統計學意義（F值分別為2 448.000、1 405.000、111.000、132.200，P＜0.01），表明饑餓可以促進卵巢癌細胞的侵襲和遷移能力，抑制自噬抑制饑餓對卵巢癌細胞侵襲和遷移能力的促進作用，見圖2和表2。

2.3饑餓及自噬對卵巢癌細胞糖酵解關鍵酶活性的影響

與Control組比較，EBSS組SKOV3細胞的相對葡萄糖消耗量和乳酸生成量顯著升高（P＜0.01），與EBSS組比較，EBSS+3-MA組細胞的相對葡萄糖消耗量和乳酸生成量顯著降低（P＜0.01）；三組間細胞的相對葡萄糖消耗量和乳酸生成量比較，差異均有統計學意義（F值分別為53.060、44.300，P＜0.01），見表3。

RT-qPCR和Western blotting檢測結果顯示，與Control組比較，EBSS組SKOV3細胞LDHA mRNA、GLUT1 mRNA、LDHA蛋白相對表達量顯著升高（P＜0.01），而LDHB mRNA相對表達量無顯著性變化（P＞0.05）；與EBSS組比較，EBSS+3-MA組細胞LDHA mRNA、GLUT1 mRNA、LDHA蛋白相對表達量顯著降低（P＜0.01），而LDHB mRNA相對表達量無顯著性變化（P＞0.05）；三組間細胞的LDHA mRNA、GLUT1 mRNA、LDHA蛋白相對表達量比較，差異均有統計學意義（F值分別為311.400、66.940、154.200，P＜0.01），表明饑餓上調了LDHA的表達，抑制自噬抑制饑餓對LDHA的上調表達，見圖3和表3。

2.4 LDHA和自噬對卵巢癌細胞糖酵解的影響

Western blotting檢測結果顯示，與NC-shRNA組比較，LDHA-shRNA1組和LDHA-shRNA2組LDHA蛋白相對表達量顯著降低（P＜0.01），三組間細胞的LDHA蛋白相對表達量比較，差異有統計學意義（F＝123.200，P＜0.01），見圖4、表4。

進一步用EBSS對SKOV3細胞進行饑餓處理（誘導自噬）后結果顯示，與EBSS+NC-shRNA組比較，EBSS+LDHA-shRNA1和EBSS+LDHA-shRNA2組細胞的相對葡萄糖消耗量、乳酸生成量顯著降低（P＜0.01）；三組間細胞的相對葡萄糖消耗量、乳酸生成量比較，差異均有統計學意義（F值分別為106.300、90.110，P＜0.01），表明LDHA參與了饑餓及自噬誘導的卵巢癌細胞糖酵解，見表5。

2.5 Wnt/β-catenin信號通路在卵巢癌細胞自噬中的作用

Western blotting檢測結果顯示，與Control組比較，EBSS組SKOV3細胞內β-catenin、p-β-catenin磷酸化相對表達量顯著升高（P＜0.01）；與EBSS組比較，EBSS+3-MA組細胞β-catenin、p-β-catenin磷酸化相對表達量顯著降低（P＜0.01）；三組間細胞的β-catenin、p-β-catenin磷酸化相對表達量比較，差異均有統計學意義（F值分別為206.500、222.200，P＜0.01），表明饑餓誘導的自噬可以激活磷酸化的β-catenin，抑制自噬可以抑制β-catenin的磷酸化，見圖5和表6。

2.6 β-catenin對饑餓和自噬誘導的卵巢癌細胞糖酵解的影響

Western blotting檢測結果顯示，與NC-shRNA組比較，β-catenin-shRNA1組和β-catenin-shRNA2組SKOV3細胞內β-catenin相對表達量顯著降低（P＜0.01）；三組間細胞的β-catenin相對表達量比較，差異有統計學意義（F＝127.000，P＜0.01），見圖6、表7。

與EBSS+NC-shRNA組比較，EBSS+β-catenin-shRNA1組和EBSS+β-catenin-shRNA2組LDHA蛋白相對表達量、相對葡萄糖消耗量及乳酸生成量均顯著降低（P＜0.01），三組間細胞的LDHA蛋白相對表達量、相對葡萄糖消耗量及乳酸生成量比較，差異均有統計學意義（F值分別為153.600、128.300、50.530，P＜0.01），表明β-catenin下調抑制饑餓及自噬誘導的卵巢癌細胞糖酵解，見圖6和表8。

3討論

3.1自噬對癌細胞行為的影響

由于過度的自我消耗可能對細胞有害，自噬由一系列稱為UNC-51樣激酶1（UNC-51-like kinase 1，ULK1）和激酶2（UNC-51-like kinase 2，ULK2）的蛋白因子控制，其與自噬相關基因13（autophagy-related genes 13，ATG13）、自噬核心蛋白和200kDa家族相互作用蛋形成復合物，在自噬起始中起關鍵作用。自噬主要受AMPK和雷帕霉素靶蛋白（mechanistic target of rapamycin complex 1，mTORC1）信號通路的調控。當細胞處于營養剝奪或氧化應激狀態時，AMPK可激活自噬；相反，在營養豐富的條件下，mTORC1通過降低ULK1的激活抑制自噬。高水平自噬可導致癌細胞死亡；因此誘導細胞高水平自噬是卵巢癌靶向治療的潛在靶點［10］。但另一方面，自噬對受損細胞器和DNA降解過程中的中間體可以為腫瘤細胞葡萄糖代謝、氨基酸代謝和脂質代謝提供底物，其能影響癌細胞的行為，包括在代謝惡劣環境條件下增強癌細胞生存、促進侵襲性生長、促進免疫逃逸和化療耐藥等。在卵巢癌中，癌細胞釋放炎癥因子激活腫瘤微環境中基質成纖維細胞、抑制免疫細胞對癌細胞的抗腫瘤殺傷活性；基質成纖維細胞和癌細胞釋放自噬衍生的代謝物和底物，通過自分泌和旁分泌途徑調節臨近癌細胞的自噬水平和癌細胞行為［11］。本研究顯示，饑餓引起卵巢癌細胞上調自噬。

3.2乳酸脫氫酶、癌細胞內糖酵解活性和癌細胞行為的相關性

乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）是一種高活性糖酵解途徑酶，屬于2-羥基酸氧化還原酶家族，其在氧化磷酸化向糖酵解的轉換中起著關鍵作用。在丙酮酸轉化為乳酸的過程中，要發生煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（還原形式）（reduced form of nicotinamide adenine dinucleotide，NADH）到煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（氧化形式）（oxidized form of nicotinamide adenine dinucleotide，NAD+）的再生，這對于正在進行的糖酵解是必不可少的，LDH是這一再生過程的關鍵酶［12］。LDH是一種同源四聚體或異源四聚體分子，由兩個M亞基（肌肉）和兩個H亞基（心臟）組成。ldha基因編碼M亞基，LDHA基因編碼H亞基。M和H亞基組合形成LDH1～LDH5共五種同工酶［13］。LDHA在卵巢癌中表達上調并促進癌細胞增殖。下調LDHA抑制卵巢癌細胞增殖［14］。LDHA抑制劑可增敏卵巢癌細胞對PARP抑制劑的抗腫瘤活性［15］。miR-383通過靶向抑制LDHA的表達，抑制卵巢癌細胞增殖、侵襲和有氧糖酵解［16］。本研究顯示，饑餓上調了LDHA的表達，并促進了卵巢癌細胞的侵襲和遷移能力。

MMP2和MMP9是癌細胞侵襲、遷移和血管發生過程中的關鍵酶，負責降解基質成分，協助癌細胞從原位退出及進入新的微環境。與癌旁組織相比，人類惡性卵巢癌組織中轉錄調節劑巨核細胞性白血病因子1（megakaryocytic leukemia 1，MKL1）的轉錄和表達水平升高，伴有MMP2表達水平也升高的現象。研究發現，MKL1是MMP2的轉錄調節因子，在缺氧條件下負責促進MMP2及其活化相關因子的轉錄和表達，并賦予卵巢癌細胞侵襲和遷移能力［17］。LncRNA TP73-AS1通過上調MMP2和MMP9，促進卵巢癌細胞增殖和惡性轉移［18］。Wnt/β-catenin信號通路在調節胚胎發育和生理過程中起重要作用。當該通路受到Wnt配體的刺激時，β-catenin從其降解復合物中解離并易位到細胞核中，與TCF/LEF轉錄因子相互作用，激活下游靶基因的轉錄和表達。Wnt/β-catenin信號通路的異常激活，在子宮內膜樣和黏液型上皮性卵巢癌中多有報道，并被證明在所有類型卵巢癌中促進癌癥干細胞自我更新、轉移及化療耐藥［19］。Wnt/β-catenin是高級別漿液性低分化卵巢癌惡性轉移的關鍵信號通路；性別決定區Y-盒轉錄因子9（SRY-box 9，SOX9）通過活化Wnt/β-catenin信號通路進一步促進高級別漿液性卵巢癌的惡性轉移［20］。本研究顯示，饑餓上調了磷酸化-β-catenin的水平并激活β-catenin。敲低β-catenin可下調LDHA的表達，并抑制乳酸生成。

總之，本研究發現饑餓激活卵巢癌細胞自噬，并促進其侵襲和遷移能力，增強糖酵解活性。與此同時，饑餓上調了LDHA的表達并磷酸化活化β-catenin信號，敲低β-catenin可下調LDHA的表達并抑制乳酸生成。本研究結果揭示了卵巢癌細胞自噬與糖代謝之間的聯系，可能為卵巢癌治療提供潛在的治療靶點。

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［專業責任編輯：安瑞芳］

［中文編輯：王 懿；英文編輯：李曉雪］

［收稿日期］2024-04-24

［基金項目］國家自然科學基金（81172458）；陜西省自然科學基礎研究計劃重點項目（2024JC-ZDXM-52）

［作者簡介］陳良鳳（1981—），女，副主任醫師，碩士，主要從事婦科腫瘤及子宮內膜異位癥的基礎研究。

［通訊作者］馬園園，副主任醫師。