核桃分心木不同極性部位 a -葡萄糖苷酶抑制活性研究

關(guān)鍵詞：核桃分心木；不同極性部位； a. -葡萄糖苷酶；抑制活性中圖分類號(hào)：R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADOI：10.19345/j.cnki.1674-7909.2025.11.022文章編號(hào)：1674-7909（2025）11-99-4

0 引言

核桃分心木為胡桃科核桃屬植物核桃（JuglansregiaL.）果核內(nèi)的干燥木質(zhì)隔膜，是我國傳統(tǒng)中藥材之一，其性平、味苦澀，具有固腎澀精、利尿清熱等功效。相關(guān)報(bào)道顯示，核桃分心木富含黃酮類、酚酸類、多糖及萜類化合物，具有抗氧化、抗菌、抗腫瘤及降血糖等多種生物活性[1-2]。近年來，其降糖作用備受關(guān)注。趙鑫丹3發(fā)現(xiàn)核桃內(nèi)種皮的乙酸乙酯萃取物有較強(qiáng)的自由基清除活性及抗油脂氧化活性，其酚類主要化合物鞣花酸有較強(qiáng)的降脂和降血糖活性。林棟等4發(fā)現(xiàn)，復(fù)合酶法能有效提取核桃分心木多酚，多酚具有良好的抗氧化性、亞硝酸鹽清除活性和降糖能力。類似研究表明，不同產(chǎn)地的環(huán)境因子顯著影響植物次生代謝產(chǎn)物積累[5]，而當(dāng)前研究多集中于單一產(chǎn)地。因此，系統(tǒng)評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地、不同極性部位核桃分心木的 ∝ -葡萄糖苷酶抑制活性，對(duì)揭示其降糖物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量控制具有重要意義。

1材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

核桃分心木分別來自山東省濟(jì)寧市 （S₁） 、云南省哀牢山 （S₂） 、云南省大理市 （S₃） 、河北省 （?₈₄） 、吉林省樺甸市 （S₅） 、陜西省寶雞市 （S₆） 、陜西省商洛市（ S₇） 、山西省呂梁市 （S₈） 、四川省 （S₉） ）、安徽省亳州市 （S₁₀） 等10個(gè)不同產(chǎn)地。

1.2 主要試驗(yàn)儀器

1550Multiskan全波長酶標(biāo)儀、XU-RE-201D

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、FA2204B電子分析天平、2500C多功能粉碎機(jī)、KQ-300VSM超聲波清洗儀、LBAO-150鼓風(fēng)干燥箱、96微孔板。

1.3 主要試劑

α- 葡萄糖苷酶（AGC）、對(duì)硝基苯酚- -α -D-吡喃葡萄糖苷（pNPG）、阿卡波糖（Acarbose）、磷酸鹽緩沖液（PBS pH=7.0 ）、 95% 乙醇（ CH₃CH₂OH 、石油醚（ C_nH_2n+2， 、三氯甲烷（ CHCl₃ ）乙酸乙酯（ C₄H₈O₂. 、正丁醇（ C₄H₁₀O 、碳酸鈉（ Na₂CO₃ 。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 材料處理

將核桃分心木清洗后在 45^°C 下干燥 12h ，并粉碎過孔徑 0.15mm 細(xì)篩，密封保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2 流浸膏的制備

先準(zhǔn)確稱取 100.13g 核桃分心木粉末，再將核桃分心木粉末與 80% 乙醇按質(zhì)量比1：6混合，浸泡10min 后回流提取 2h ，過濾，重復(fù)1h進(jìn)行二次提取，并將溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，獲得流浸膏。將流浸膏于70^°C 水浴蒸干，置于 2～8^°C 冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.3不同極性萃取物的制備

精確稱取干浸膏粉末 120.0068g ，加水溶解。將所得溶液轉(zhuǎn)移至分液漏斗，加入等量的石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、 95% 乙醇、殘余的水溶液進(jìn)行逐級(jí)萃取，重復(fù)操作至溶液澄清并蒸干，獲得核桃分心木石油醚、三氯甲烷等6種不同極性的萃取物，置于 2～8^°C 冰箱中冷藏備用。

1.5 α- 葡萄糖苷酶活性篩選

設(shè)計(jì)體外 ∝- 葡萄糖苷酶抑制試驗(yàn)，對(duì)核桃分心木不同產(chǎn)地、不同極性部位進(jìn)行 α- 葡萄糖苷酶活性篩選。對(duì)ZHANG等人的方法進(jìn)行改進(jìn)，采用酶標(biāo)儀對(duì) α- 葡萄糖苷酶活性進(jìn)行測(cè)定，取 0.5μg/mg 的 α- 葡萄糖苷酶 80μL ，加入 80mL 樣品溶液，置于37^°C 恒溫水浴中 5min ；加入 13.3mol/L 的pNPG100μL ，搖勻后，再次放入 37^°C 恒溫水浴中 15min ，隨后加入 0.2mol/L 的 Na₂CO₃200μL ，立即在波長405nm 處測(cè)定吸光度。按公式（1）計(jì)算出各樣品溶液對(duì) ∝ -葡萄糖苷酶的抑制率。

式（1）中： η 為抑制率， 分別為樣品、樣品背景、空白溶液的吸光度。

以樣品濃度 （x） 為橫坐標(biāo)、抑制率 （y） 為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算出半數(shù)抑制濃度 IC₅₀ 值。反應(yīng)體系見表1，共設(shè)4個(gè)組，每組設(shè)3個(gè)平行試驗(yàn)。

2結(jié)果分析

2.1不同產(chǎn)地核桃分心木對(duì) ∝ -葡萄糖苷酶抑制活性的影響

不同產(chǎn)地核桃分心木對(duì) α- 葡萄糖苷酶抑制活性的影響如圖1所示。由圖1可知，在一定濃度范圍內(nèi)，隨著核桃分心木樣品溶液濃度的增大，其對(duì)α- 葡萄糖苷酶的抑制能力也逐漸增大。不同產(chǎn)地核桃分心木對(duì) α- 葡萄糖苷酶的抑制活性線性方程及 IC₅₀ 如表2所示。由表2可知，各處理 IC₅₀ 為 S₁₀618379425lt; 。 IC₅₀ 越小，降糖效果越顯著。 S₁₀ 的醇提物對(duì) α- 葡萄糖苷酶抑制作用最強(qiáng)，其 IC₅₀=0.000 271 2mg/mL ;其次為 S₆ ，其IC₅₀=0.002 717 0mg/mL 。當(dāng)樣品溶液質(zhì)量濃度為0.01mg/mL 時(shí)， S₁₀，S₆ 的抑制率分別達(dá)到 89.32% 80.35% S₁₀ 的抑制作用比陽性對(duì)照阿卡波糖 ′C₅₀= 0.0003125mg/mL 強(qiáng)。 S₂ 和S對(duì) α? -葡萄糖苷酶活性的抑制作用最弱，其 IC₅₀ 分別為 0.012 600 0mg/mL. 0.0313000mg/mL ；當(dāng)樣品溶液質(zhì)量濃度達(dá)到0.10mg/mL 時(shí)， S₂ 和 S₅ 的抑制率分別為 90.55% 和84.46% 。

2.2不同極性部位對(duì) α- 葡萄糖苷酶抑制活性的影響

不同極性部位對(duì) α- 葡萄糖苷酶活性抑制的影響如圖2所示。由圖2可知，在一定濃度范圍內(nèi)，隨著核桃分心木樣品溶液濃度的增大，其不同極性部位對(duì) α- 葡萄糖苷酶的抑制作用越強(qiáng)。核桃分心木不同極性部位對(duì) α- 葡萄糖苷酶抑制活性線性方程及 IC₅₀ 如表3所示，可知 IC₅₀ 為乙酸乙酯部位lt;水提部位 lt; 正丁醇部位 lt; 三氯甲烷部位 ∠ 醇提部位lt;石油醚部位。因此，乙酸乙酯部位抑制作用最為顯著，其次是水提部位， IC₅₀ 分別為 0.0005817mg/mL 和0.0125400mg/mL 。當(dāng)不同極性萃取物質(zhì)量濃度為0.01mg/mL 時(shí)，乙酸乙酯部位和水提部位抑制率分別達(dá) 93.57%.42.36% 。陽性對(duì)照的阿卡波糖在質(zhì)量濃度為 0.01mg/mL 時(shí)，抑制率為 94.66% IC₅₀ 為0.000 312 5mg/mL 。相較之下，醇提部位和石油醚部位的抑制作用較弱， IC₅₀ 分別為 0.0319200mg/mL 和 0.0743900mg/mL ；當(dāng)質(zhì)量濃度提升至 0.10mg/mL 時(shí)，醇提部位和石油醚部位抑制率分別為 84.63% 和56.38% 。雖然乙酸乙酯部位抑制作用略遜于阿卡波糖，但仍表現(xiàn)出良好的抑制效能。

3結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，10個(gè)產(chǎn)地的核桃分心木醇提物均表現(xiàn)出對(duì) ∝- 葡萄糖苷酶活性有抑制作用，其中 S₁₀ 樣品活性最強(qiáng)，其 IC₅₀=0.000 271 2mg/mL ，在0.01mg/mL 質(zhì)量濃度時(shí)抑制率高達(dá) 89.32% 。 S₅ 的醇提物對(duì) α- 葡萄糖苷酶活性的抑制作用最弱，其 IC₅₀= 0.0313000mg/mL ，當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到 0.10mg/mL 時(shí)，抑制率為 84.46% 。 IC₅₀ ·S₁₀6183794lt; S₂5c ，在不同極性部位中，乙酸乙酯部位活性最突出，其 IC₅₀=0.0005817mg/mL ，石油醚部位抑制效能最低，其 ?IC₅₀=0.0743900mg/mL;IC₅₀ ：乙酸乙酯部位lt;水提部位 ∠ 正丁醇部位 lt; 三氯甲烷部位 ∠ 醇提部位lt;石油醚部位。

參考文獻(xiàn)：

[1]孫江怡，王豆豆，魏驪霏，等.核桃分心木總黃酮的提取工藝優(yōu)化及其抗氧化活性研究[J].糧食與油脂，2025，38（2）：97-102.

[2]郭育濤.核桃各部位體外抗氧化性、抑菌活性比較及分心木在中式香腸的防腐保鮮作用研究D].成都：成都大學(xué)，2023.

[3]趙鑫丹.核桃內(nèi)種皮抗氧化成分的提取分離及其活性研究D」.咸陽：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2021.

[4]林棟，倪亞林，王港薇，等.分心木多酚復(fù)合酶提取工藝優(yōu)化及其體外生物活性[J].食品科技，2024，49（12）：221-229.

[5]戴悅.不同地域苗圃銀杏葉的質(zhì)量特征與環(huán)境因素相關(guān)性分析研究[D].上海：上海中醫(yī)藥大學(xué)，2020

[6]ZHANGJ，LIYN，GUOLB，etal.Diverse Gallotannins with a -Glucosidase and a -Amylase InhibitoryActivityfromtheRootsofEuphorbiaFischeriana Steud.[J].Phyto Chemistry，2022，202：113304.

Study on ααααααααααααααααααααααααα -Glucosidase Inhibitory Activity of Different Polarity Fractions from Juglans regia Septum

TANGHaimei LIN Jing2 WEIQiaona'

1.SchoolofGeneralEducation，GuangxiAgricultural VocationalandTechnical University，Nanning53oo7，China; 2.SchoolofFoodand Drug Engineering，Guangxi Agricultural Vocationaland Technical University，Naning 530007，China

Abstract： To investigate the influence of geographical origins and polarity-based fractions of walnut septum on α- glucosidase inhibitory activity，walnut septum samples from 1O geographical origins were extracted using solvents including petroleum ether and chloroform to obtain six polaritybased fractions.Differences in geographical origins significantly afected inhibitory activity.Sample S₁₀ exhibited the strongest activity （ IC₅₀=0.000 271 2mg?mL^-1 ），surpassingacarbose（ IC₅₀ =0.000312 5mg?mL^-1 ）.Among the polarity-based fractions，the ethyl acetate fraction demonstrated the most potent inhibitory activity （ IC₅₀=0.0005817mg?mL^-1 ，achievinga 93.57% inhibition rate at 0.01mg?mL^-1 comparable to the positive control （94.66% ）.The order of inhibitory activity among the fractionswas： ethyl acetate fraction gt; aqueous fraction gt; n-butanol fraction gt; chloroform fraction gt; ethanol fraction gt; petroleum ether fraction.The ethyl acetate fraction and S₁₀ sample from walnut septum demonstrated significant potential for inhibiting α? -glucosidase activity，providing a critical basis for screening key components and region specific resource optimization strategies in the development of natural hypoglycemic drugs.

Key words： Juglans regia Septum; different polarity fractions; α -glucosidase;inhibitory activity （欄目編輯：董清芝）