Optimization of a Method for the Determination of Neotame Content in Dry Wine by High Performance Liquid Chromatography
LI Chunmei (Baoji Quality and Technology Inspection and Testing Center, Baoji 721ooo, China)
Abstract: Objective: To establish a method for determining the content of neotame in dry wine by high performance liquid chromatography by optimizing chromatographic conditions and sample pretreatment steps. Method: The samples were extracted with mixed extracts,concentrated and then analyzed by liquid chromatography. Result: Neotame showed a good linear relationship in the concentration range of 0.06μg?mL-1 to 6.00μg?mL-1 ,with a correlation coefficient of 0.999 6.The recoveries of neotame in dry wine at different spiked levels were 83.4% to 93.0% ,and the relative standard deviation (RSD) was lt;3% .Conclusion: This method is simple, rapid and accurate, suitable for large-scale sample detection,and has good practicality and promotion potential.
Keywords: food additives; high performance liquid chromatography; neotame; dry wine
隨著生活品質的持續提升,人們對食品的訴求早已跨越單純的溫飽階段,轉而聚焦于健康與安全。這一深刻轉變,有力推動了食品添加劑工業的蓬勃發展。食品添加劑功能多元,不僅能夠提升加工食品的營養價值,維持食品的新鮮度,還能優化食品的色澤、香氣和口感,大幅改善食品的感官特性,同時滿足特殊消費群體的個性化需求。在食品行業中,食品添加劑發揮著不可或缺的作用,成為推動食品行業創新發展的重要力量。
紐甜,化學名稱為N-[N-(3,3-二甲基丁基)-L-α-天冬氨酰]-L-苯丙氨酸-1-甲酯[1],是一種白色結晶性粉末,約含 4.5% 的結晶水,易溶于水,屬于功能性甜味劑。紐甜甜味純正,清新自然,甜度為蔗糖的 8000~12000 倍,阿斯巴甜的40倍以上[2]。紐甜不會引發蛀牙,在酸性條件下能保持甜味不變,但在水溶液中,其受溫度、pH值、時間等因素影響,甜度會有一定程度的下降。
目前,食品工業常用的甜味劑包括紐甜、安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、三氯蔗糖和阿斯巴甜等。這些甜味劑都有相應的檢測方法,使用量必須遵循《食品安全國家標準食品添加劑使用標準》(GB2760—2024)的要求。GB2760—2024對酒類產品中紐甜的使用量有嚴格限制,僅允許在發酵酒(葡萄酒除外)中使用,允許最大使用量為 0.033g?kg-1 ,蒸餾酒和葡萄酒中不得添加。然而,部分不良商家為追求經濟利益,通過非法添加紐甜來提高產品的口感,此舉嚴重擾亂了市場秩序,損害了消費者的權益本研究對《食品安全國家標準食品中紐甜的測定》(GB5009.247—2016)中方法進行優化,旨在提供一種高效、快速的紐甜檢測方法。
1材料與方法
1.1儀器與設備
SPD-20A高效液相色譜儀(配有紫外檢測器),日本島津公司;超聲波清洗機,昆山市超聲儀器有限公司;恒溫電熱板,中興偉業世紀儀器有限公司;渦旋振蕩器,無錫沃信儀器制造有限公司。
1.2材料與試劑
干型葡萄酒,煙臺凱富葡萄酒有限公司。
甲醇,月旭科技公司;辛烷磺酸鈉,迪馬科技公司;磷酸(分析純),天津市科密歐化學試劑有限公司;紐甜標準品( 1 000μg?mL-1 ),編號為BW902596-1000-L,壇墨質檢科技產品;超純水。
混合提取液:分別吸取 0.80mL 甲酸和 2.50mL 三乙胺,加水定容至 1000mL ,pH值約為4.5。
離子對試劑緩沖液:稱取 2.00g 辛烷磺酸鈉用 500mL 水溶解,加入 1.0mL 磷酸,加水定容至1000mL[3] C
1.3實驗方法
1.3.1 標準溶液的配制
準確吸取 2.50mL 紐甜標準品( 1 000μg?mL-1 )于 50mL 容量瓶中,用混合提取液定容,配制成濃度為 50μg?mL-1 的紐甜標準工作液。分別吸取0.012、0.040、0.200、0.400、0.600、0.800、 1.000mL 和1.200mL 紐甜標準工作液( 50μgmL-1 )于 10mL 容量瓶中用混合提取液定容,配制成濃度分別為0.06、0.20、1.00、2.00、3.00、4.00、 5.00μg?mL-1 和 6.00μg?mL-1 的系列標準工作液。
1.3.2 樣品處理
稱取約 10g 混勻試樣于 50mL 具塞塑料離心管中,加入 30mL 混合提取液,振蕩混勻。超聲 15min 后,轉移至 50mL 容量瓶中,用混合提取液定容,混勻后待用。
吸取 10.0mL 上述樣液于小燒杯中,置于恒溫電熱板上 110°C 濃縮至近干,用 1.00mL 混合提取液溶解,渦旋混勻,經 0.45μm 濾頭過濾后作為待測液供液相色譜分析。
1.3.3 色譜條件
色譜柱: C18 色譜柱( 250mm×4.6mm , 5μm );柱溫: 35°C ;流動相:A相為離子對試劑緩沖液,B相為甲醇;等度洗脫: A+B=35+65 ;流速:1.0mL?min-1 ;波長: 210nm ;進樣量: 50μL 。
2 結果與分析
2.1色譜條件的優化
與國標方法相比,本文在以下幾個方面進行了優化: ① 采用等度洗脫替代梯度洗脫,縮短了檢測時間(約 50% ); ② 將乙腈替換為甲醇,以減少對檢驗人員、色譜柱和儀器的損傷; ③ 通過實驗確定流動相比例為離子對試劑緩沖液 + 甲醇 =35+65 時,目標峰分離效果最佳; ④ 將檢測波長從 218nm 優化至210nm ,以提高目標峰響應。經過優化后,色譜條件顯著提高了效率,標準溶液色譜圖見圖1。
2.2 樣品處理方法優化
本研究以干紅葡萄酒作為基質,向樣品中添加適量紐甜標準工作液對樣品進行污染。按照1.3.2樣品處理流程對污染樣品進行前處理,分別考察了樣品定容后的取樣體積(10、15、 20mL )和恒溫電熱板加熱溫度(40、50、60、70、80、90、100、110‰ 和 120°C )、加熱時間等因素對檢測結果的影響。經系統優化與分析,最終確定最佳前處理條件為取樣體積 10mL 、加熱溫度 110qC 、加熱時間30min (加熱至近干狀態)。

2.3標準曲線與線性范圍
對1.3.1配制的系列標準溶液進行測定,以濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線。線性回歸方程為 y=1.37×10-5x+9.15×10-3 ,相關系數為0.9996,可見紐甜在 0.06~6.00μg?mL-1 內呈現良好的線性關系。標準曲線及相關系數見表 1[4]
2.4方法的重復性
稱取 10g 干型葡萄酒空白樣品,分別加入0.2、0.4、 2.0mg?kg-13 個水平的紐甜標準工作液,經前處理后進行測定,計算相對標準偏差(RelativeStandardDeviation,RSD)。如表2所示,3種不同濃度檢測結果的RSD均小于 3% ,表明方法的重復性良好[5]。
2.5方法的準確度
稱取 10g 干型葡萄酒空白樣品,進行0.2、0.4、2.0mg.kg-1 加標回收實驗,結果見表3。該方法回收率在 83.4%~93.0% ,說明方法準確度良好。樣品加標回收圖譜如圖2所示[]
3結論
本研究通過優化高效液相色譜分析條件,建立了高效、準確檢測干型葡萄酒中紐甜含量的方法。通過選擇適當的流動相(離子對試劑緩沖液 + 甲醇 =35+65 )并采用等度洗脫,實驗中獲得了較為理想的出峰時間、峰形及分離度。選擇 210nm 作為檢測波長,不僅能獲得較好的響應值,還能有效提升分離度。同時,本方法顯著降低了對 C18 色譜柱和高效液相色譜儀的損害,從而延長了色譜柱和單向閥的使用壽命。在樣品前處理方面,采用超聲振蕩萃取,并通過電熱板加熱濃縮。與國家標準方法相比,本研究建立的分析方法在試劑消耗、實驗時間、毒性減少及對實驗人員的身體傷害等方面均表現出顯著優勢。該方法結果準確,重現性良好,且適用于大批量樣品的檢測,具有較高的推廣應用價值。





參考文獻
[1]周魁,黨璐,張存社,等.高效液相色譜法測定紐甜的含量[J].廣東化工,2012,39(5):203-204.
[2]王齊,朱偉偉,楊俊.高效液相色譜法快速篩查與測定葡萄酒中紐甜[J].食品科學,2013,34(4):154-156
[3]國家衛生和計劃生育委員會.食品安全國家標準食品中紐甜的測定:GB5009.247—2016[S].北京:中國標準出版社,2016.
[4]蔡基智,林杰,廖金華.高效液相色譜法測定食品中紐甜的含量[J].廣東化工,2009,36(9):176.
[5]國家衛生健康委員會,國家市場監督管理總局.食品安全國家標準化學分析方法驗證通則:GB5009.295—2023[S].北京:中國標準出版社,2023.
[6]國家質量監督檢驗檢疫總局.實驗室質量控制規范食品理化檢測:GB/T27404—2008[S].北京:中國標準出版社,2008.
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