過表達NtMYC2對煙草多酚物質合成及鹽脅迫抗性的影響

中圖分類號：S572.03 文獻標識碼：A

文章編號：1007-5119（2025）03-0029-08

Effects of NtMYC2 Overexpression on Polyphenol Synthesis and Salt Stress Resistance in Tobacco

QU Xiaoling， CHEN Shuai， LI Xiuchun， YANG Aiguo， REN Min， TONG Ying， WU Xiuming， SUN Yangyang （Institute of Tobacco Research， Chinese Academy of Agricultural Sciences， Qingdao 266101， China）

Abstract：InthisstudytheNtMC2transeriptionfactorwassuccefullylonedviaomologousconing.Toanalyzeitsbological functionsinpolyphenolbiosynthesisandsaltstressresistance，weemployedRealtimePCRtoanalyzeitsregulatoryefecton NtCHS1，a keyrate-limitingenzymegeneinflavonoid biosynthesis.NtMYC2-overexpressionlines wereconstructed，andthe diferences inpolyphenolicsubstancesandkeyenzymegenesbetweetheNMYC2-overexpresionlinesandthewild-typelineswere analyzed.ThegerminationrateandresistancephysiologicalindicatorsoftobaccoseedsundersaltstresswerealsodeterminedThe results showed that NtMYC2transcription factorlocalizes tothenucleusandfunctionsasapositiveregulator，ativatingthe transcriptionalactivityofthe NCHS1gene promoter.Overexpressionof NMYC2 significantlyupregulated theexpressonlevelof severalkeystructuralenzymegenes involved inpolyphenolsbiosynthesis pathway，uchasPALandCHS，leadingtosignificantly increasedlevelsofogenccidcorogeicciddtotetinasgicaccoes.rtoredh the wild-type controls，under 100mmol/L NaCl treatment， the germination rate of NtMYC2-overexpressing transgenic lines was significantly increased. Under 200 mmol/L NaCl stress， the MDA and H₂O₂ content of NtMYC2-overexpressing transgenic lines were significantlyrduced，hile teODandAPXactivitiesweresigniicantlyincreased.InummaryNMC2positielygulateskey polyphenolsythesisgenes，enancingthesthesisofpolypheolicsubstances，andpotentiallhacingplatsalttrssistace through improved oxidative stress tolerance.

Keywords： Nicotiana tabacum; NtMYC2; expression regulation; polyphenol synthesis; salt stress resistance

多酚類化合物是一類廣泛存在于植物中的次生代謝物質，目前已經從植物中分離鑒定出近萬種，按結構大致可分為類黃酮、芪類、酚酸類和木酚素類。作為植物體內重要的生物活性物質，多酚類化合物在植物生長發育、色素沉著及抵御多種生物脅迫和非生物脅迫中發揮重要的功能[1]，并影響煙草生長發育、調制特性、烤后煙葉等級等，其種類和含量是衡量煙葉品質的一個重要因素[2]。

多酚類化合物的合成起始于苯丙氨酸，經苯丙烷代謝途徑和類黃酮代謝途徑生成多酚類物質。多酚類物質的合成在轉錄水平上受多種類型轉錄因子的調控。研究發現，MYB類轉錄因子、bHLH類轉錄因子、WD40類轉錄因子通常形成MBW復合體行使調控多酚合成的功能，亦可單獨行使調控功能[3]。WRKY類轉錄因子如MdWRKY11、WRK-Y71-L、NtWRKY41a等，在煙草綠原酸、類黃酮生物合成中發揮重要功能[4-5]。與此同時，上述類型的轉錄因子也在鹽脅迫信號轉導中發揮重要作用[]。Chen等[7]發現 NtMYB4 能夠響應高濃度鹽脅迫并調控類黃酮的生物合成。

MYC2屬于bHLH家族，不僅是植物茉莉酸類激素響應途徑中的核心轉錄因子，而且能夠響應和調控GA、ABA、SA、ETH和IAA的合成積累，在植物抵御病原菌、病蟲害等生物脅迫和增強低溫、冷害、重金屬等非生物脅迫耐受性方面，以及調控倍半萜、花青素、煙堿等次生代謝物合成方面發揮重要作用[8]，然而其對鹽脅迫的抗性鮮見報道。本研究克隆到一個NtMYC2轉錄因子，以NtMYC2基因過表達和其野生型植株為材料，分析其過表達對煙草中多酚物質含量及鹽脅迫下煙草種子發芽率的影響，并測定了過氧化氫 （H₂O₂） 、MDA含量及POD和APX等氧化酶活性，以期為進一步研究NtMYC2轉錄因子在調控多酚物質合成和鹽脅迫抗性方面的功能，以及煙草品質育種研究提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑

普通煙草紅花大金元（HD）種子由國家煙草種質資源中期庫（青島）提供，HD幼苗培養于中國農業科學院煙草研究所遺傳育種中心溫室中。ChamQTM SYBR Color Qpcr Master Mix（Q411-01）、FastPure Plasmid Mini Kit（DC201）、HiScript?Ⅱ 1stStrand cDNA SynthesisKit（+gDNAwiper）、Clon-Express II One Step Cloning Kit（C112-02）、RNATrizol購自南京諾唯贊生物科技有限公司，大腸桿菌Trans-T1、農桿菌EHA105購自全式金生物技術有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1NtMYC2基因的克隆使用RNATrizol法提取煙草葉片總RNA，反轉錄成cDNA。以cDNA為模板，使用PrimeSTARMax高保真酶及引物對NtMYC2-F： 5^′ -ATGACGGACTATAGAATACC-3'和 NtMYC2-R： 5^′ -TCATCGCGATTCAGCAATTCTG-3'進行PCR擴增反應，擴增NtMYC2基因。反應條件： 95°C 預變性 3min ； 95°C 變性15s ， 52°C 退火 20s ， 72^°C 延伸 50s ，32次循環；72^°C 延伸 10min 。通過 1% （質量分數）瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴增產物，隨后將獲得的PCR產物分別與Blunt載體（南京諾唯贊生物技術有限公司）進行連接、轉化，挑選陽性克隆測序。

1.2.2NtMYC2轉錄因子亞細胞定位通過引物對NtMYC2-YFP-F： 5^′? -ATCTCGAGCTCAAGCTTCGAAATGACGGACTATAGAATACC-3'和INtMYC2-YFP-R： 5^′ -GTACCGTCGACTGCAGAATTCCTCATCGCGATTCAGCAATTCTG-3將NtMYC2基因的CDS全長序列引入帶有BamHI酶切位點的CPB載體接頭序列。根據Chen等[9提供的亞細胞定位載體構建方法及處理方法，進行亞細胞定位分析。

1.2.3NtMYC2 轉錄活性分析

（1）GAL4-GUS瞬時激活/抑制驗證系統。利用GAL4-GUS系統分析NtMYC2的轉錄活性。首先，利用NtMYC2BD-F：5^′. -CCGAATTCCCGGGGATCATGACGGACTATAGAATACC-3'和 NtMYC2BD-R：5'-CGCTGCAGGTCGACGGATCTCATCGCGATTCAGCAATTCTG-3將NtMYC2基因的CDS全長序列引入帶有BamHI酶切位點的pGBKT7載體接頭序列，獲得NtMYC2-BD質粒。隨后，利用GAL4-BDF 5^′ -CTCGACTCTAGAGGATCCATGAAGCTACTGTCTTCTATCG-3'和 pMDC32-NtMYC2R：5'-ATCGGGGAAATTCGAGCTCTCATCGCGATTCAGCAATTCTG-3'從NtMYC2-BD質粒上擴增獲得GAL4-NtMY-C2序列。利用同源重組法將GAL4-NtMYC2序列連接到pMDC32載體，獲得pMDC32載體-GAL4-NtMYC2質粒。根據Liu等[0]提供的GAL4-GUS瞬時激活/抑制驗證系統方法，進行NtMYC2的瞬時激活/抑制活性分析。

（2）轉錄激活/抑制試驗。為分析NtMYC2基因對其候選靶基因NtCHS1基因啟動子的轉錄激活/抑制作用，本研究利用引物對NtCHS1-PM-F：5-CGACTCACTATAGGGCGAATTCCATTTTTAAAAAGTTCATTATACA-3'和 NtCHS1-PM-R： 5^′ -TAGTGGATCCACGCGTGAGCTCTTTCGCCGGAAAAAATGATGGAC-3擴增長度為 1500bp 的NtCHS1基因的啟動子序列CHS-pro，通過酶切連接法將CHS-pro 的序列結合到轉錄激活載體pGreen（Rep-orter質粒），與psoup（輔助質粒）共轉到農桿菌中，挑取陽性克隆。將NtMYC2基因連接到過表達載體pMDC32（Effector質粒），轉入農桿菌，同時將pMDC32空載體、P19分別轉入農桿菌并挑取陽性克隆。將上述轉化成功的陽性農桿菌單克隆活化培養至OD值為1.0左右時，按照V（Reporter）：V（Effector）：V（Pl9）=3：3：1 配制農桿菌混合液，注射本氏煙葉片。隨后采用熒光素酶報告系統檢測熒光強度。

1.2.4過表達NtMYC2對多酚物質及其合成主要結構基因的影響分析

（1）NtMYC2過表達載體構建及遺傳轉化。在擴增NtMYC2基因的上游和下游引物序列中分別引入限制性酶切位點XbaI（TCTAGA）和SacI（GAGCTC），以便構建過表達載體。將擴增獲得的NtMYC2基因序列與經過XbaI和SacI酶切的pCHF1載體連接，獲得pCHF1-NtMYC2載體。

將煙草種子用 10% 過氧化氫消毒處理 5min 之后用無菌水沖洗3＼～5次，吸干水分后，點種于MS培養基中，待無菌苗長至4＼～5葉期，取無菌葉片用于葉盤法轉化。將含有目的基因的過表達載體導入煙草葉片中，經組織培養和抗生素抗性篩選，獲得陽性轉基因植株。

（2）NtMYC2轉錄水平表達量檢測。利用Perlprimer軟件設計NtMYC2基因的特異擴增引物qNtMYC2-F： 5^′ -ATACACCAACTCCACGGAGTTC-3'和qNtMYC2-R： 5^′ -TCCACGCTTCGCGAGCCCCG-3^′ 。以NtMYC2過表達轉基因株系葉片cDNA為模板，煙草Tob103基因（GenBank登錄號為U60495）作為內參基因，檢測轉基因植株體內NtMYC2基因的表達量；利用Takara公司SYBR？PremixExTaqTM（TliRNaseHPlus）（RR420A）熒光定量試劑盒的說明配制qPCR反應體系。反應程序為： 95^°C 30s ，（ 95°15s ， 58°34s）×40 個循環。qPCR上機操作方法參照ABI7500FastReal-TimePCRSystem的操作說明書進行。每個反應樣品3次生物學重復。根據檢測結果選擇MYC2OE-99、MYC2OE-100、MYC2OE-122三個株系做為后續試驗用植株。

（3）NtMYC2過表達植株多酚類物質合成主要結構基因測定。多酚物質合成主要結構基因（包括PAL、4CL、CHS、CHI、DFR、FLS、ANS和ANR）的熒光定量引物序列參照Chen等[提供的引物序列，以MYC2OE-99、MYC2OE-100、MYC2OE-122三個株系的cDNA為模版，檢測轉基因株系及野生型株系體內結構酶基因的表達量，反應體系及分析方法同“NtMYC2轉錄水平表達量檢測”所述方法。

（4）NtMYC2過表達對煙葉多酚類物質合成的影響。野生HD及NtMYC2過表達的T3代轉基因株系在人工氣候室條件下培養至5＼～6葉期，取第3＼～4葉位的葉片用于測定其綠原酸、新綠原酸、蕓香昔等多酚類物質含量。

測定方法：準確稱取煙草葉片樣品 0.05g 于2mLEP管中，用 1mL1% 鹽酸甲醇溶液提取，每 15min 振蕩1次。 4^°C 下 10000r/min 離心 2min ，上清液通過 0.2μm 濾膜過濾到樣品瓶中。吸取10μL 濾液用HPLC（Chromaster5430，日立公司）進行分析。HPLC分析程序如下：流動相A為水（含 0.2% 乙酸），B為乙腈。梯度洗脫程序： 0～ 2min ， 95%A ； 2～17min ， 95%A～80%A ； 17～ 27min ， 80%A50%A ： 27～7min ， 50%A35%A ：37～42min ， 35%A?5%A ; 42～48min ， 5%A ； 48～ 49min ， 5%A95%A ； 49～57min ， 95%A （平衡）。洗脫柱（型號為UltimateXB-C18，規格為 4.6mm× 250mm ， 5μm 溫度 30^°C ，進樣量 10μL ，流速1mL/min ，檢測波長 354nm 。每個樣品3次生物學重復。

標準曲線制作：多酚類物質標準曲線的制作參照標準YC/T202—2006《煙草及煙草制品多酚類化合物綠原酸、茛蓉亭和蕓香苷的測定》。

1.2.5NtMYC2對煙草耐鹽脅迫抗性的影響

（1）NtMYC2鹽脅迫處理下種子發芽率統計。在一次性無菌培養皿中鋪兩張滅菌濾紙，鹽脅迫處理用3mL 滅菌的 100mmol/LNaCl 溶液將濾紙完全打濕，對照處理用 3mL 無菌水將濾紙完全打濕。將NtMYC2過表達轉基因株系種子與野生型對照種子分別點種于培養皿中，每個培養皿中點種50粒，每個處理3次重復。以露白作為發芽標準，從點種后第4天開始每天統計發芽率，并于第10天拍照采集圖像。

（2）鹽脅迫下NtMYC2基因的表達模式及抗性生理指標測定。以溫室中長至3＼～4片真葉的煙草幼苗作為試驗材料，利用 200mmol/L 的NaCl溶液澆灌處理，于處理后0、1、 12h 取第二葉位幼嫩葉片樣品，提取RNA，用于分析鹽脅迫處理下NtMYC2基因的表達模式；于0、24、 48h 取第三葉位葉片樣品，用于檢測過氧化氫 （H₂O₂） ）、MDA、POD和APX含量。每個樣品3次生物學重復。

H₂O₂ 、MDA、POD和APX等生理指標的含量測定采用可見分光光度計參照蘇州科銘生物技術有限公司提供的相應測試盒說明書進行。

1.3 數據統計與分析

采用Excel整理與統計數據，顯著性水平采用t-test統計方法。

2結果

2.1NtMYC2轉錄因子的克隆、亞細胞定位及轉錄活性分析

以紅花大金元（HD）的cDNA為模板，使用特異性引物進行高保真PCR擴增，獲得全長為1977bp的NtMYC2基因的CDS序列。亞細胞定位結果顯示，NtMYC2轉錄因子定位于細胞核內（圖1A）。瞬時表達NtMYC2基因能夠顯著提高GAL4-GUS瞬時轉錄激活/抑制系統的GUS基因的表達，推測煙草NtMYC2為正向調控轉錄因子（圖1B）。為進一步分析NtMYC2轉錄因子對類黃酮合成限速酶基因NtCHS1的調控模式，開展了瞬時轉錄激活/抑制試驗。結果顯示，連接有NtMYC2的Effector與空載Effector相比，Luc熒光強度上升了2.5倍（圖1C），說明NtMYC2能夠顯著激活NtCHS1基因啟動子的轉錄活性。綜合上述研究結果表明NtMYC2可能作為正向調控因子調控NtCHS1基因的轉錄活性。

注：A為亞細胞定位結果；B為USA/GAL4-GUS系統檢測轉錄活性結果；C為雙熒光素酶報告系統檢測瞬時轉錄激活水平結果。**代表 plt;0.01 下同。

2.2NtMYC2過表達對多酚物質合成相關酶基因表達的影響

通過篩選獲得3個表達量較高的轉基因株系MYC2OE-99、MYC2OE-100和 MYC2OE-122，其NtMYC2表達量較野生型提高17＼～146倍不等（圖2）。以上3個轉基因株系作為后續功能研究分析的轉基因材料。為檢測NtMYC2是否調控煙草多酚類物質合成途徑結構酶基因，利用實時熒光定量PCR（qPCR）技術對NtMYC2過表達轉基因株系的苯內烷代謝途徑和類黃酮代謝途徑主要結構基因的表達量進行檢測。結果表明：與野生型煙草相比，在NtMYC2過表達煙草株系中，除部分株系DFR基因表達量下調外，其他主要結構基因 ?_PAL 、 4CL 、CHS、CHI、FLS、ANS、ANR）的表達量均有提高，其中以CHS基因的表達量上調最為顯著，上調了5＼～8倍（圖3）。因此NtMYC2轉錄因子可能通過上調多酚類物質合成途徑的關鍵酶基因的表達，在多酚類物質生物合成調控中發揮作用。

2.3NtMYC2過表達對煙草多酚類物質的影響

由圖4可以看出，3個NtMYC2過表達株系的新綠原酸、綠原酸和蕓香昔含量均顯著升高。相較于野生型，MYC2OE-99、MYC2OE-100和MYC2OE-122新綠原酸含量分別提高了0.57、1.17、1.17倍；綠原酸分別提高了3.62、10.04、1.8倍；蕓香苷含量分別提高了1.402、8.505、0.98倍。試驗結果表明NtMYC2轉錄因子在煙草多酚物質合成中發揮重要作用。

2.4NtMYC2在鹽脅迫抗性中的功能分析

研究發現NtMYC2的表達量在200mmol/LNaC1處理后顯著上調（圖5A），說明NtMYC2轉錄因子可能在煙草抵御鹽脅迫中發揮一定的作用。為明確NtMYC2在鹽脅迫抗性中的功能，本研究將NtMYC2過表達煙草株系和野生型煙草進行鹽脅迫下種子發芽率試驗。結果顯示， 100mmol/L NaC1處理能夠降低野生型煙草和NtMYC2過表達煙草株系種子的發芽率（圖5B）。在清水發芽試驗中，煙草NtMYC2過表達株系種子的萌發時間與野生型對照相比提前了2d（圖 5C）。在 100mmol/L NaC1處理下，煙草NtMYC2過表達株系種子的萌發時間由2d延長至4d，而野生型對照由4d延長至7d；與野生型煙草種子相比，NtMYC2過表達株系種子的萌發時間提前了約3d（圖5D）。在鹽脅迫處理下，煙草NtMYC2過表達株系的發芽率為71%～84% ，而野生型煙草的發芽率僅為 18% 。

圖6示出，經200mmol/LNaC1處理 24h 后，NtMYC2過表達株系的MDA含量顯著低于野生型對照； H₂O₂ 含量有所降低，但MYC2OE-100、MYC2OE-122兩個株系的含量與對照相比未達到顯著水平；POD活性沒有顯著變化；APX活性升高，但MYC2OE-100株系的含量與對照相比未達到顯著水平。 200mmol/LNaCl 處理 48h 后，過表達株系體內 H₂O₂ 含量和MDA含量顯著低于野生型對照，POD和APX活性高于野生型對照，但MYC2OE-99與對照差異不顯著。說明NtMYC2過表達植株與野生型相比，具有較好的抗氧化能力。

3討論

MYC2轉錄因子在調控多酚類物質合成方面發揮重要作用。研究發現，MdMYC2通過正調控花青素合成關鍵基因MdDFR、MdUF3GT、MdF3H、MdCHS而促進蘋果的花青素積累[11]。丹參SmMYC2通過與SmbHLH60競爭來調控多酚與花青素生物合成[12]。水稻OsMYC2顯著增強櫻花素合成關鍵基因OsNOMT的表達活性，在JA介導的櫻花素生物合成中發揮重要作用[13]。本研究在煙草中克隆獲得NtMYC2轉錄因子，通過亞細胞定位、瞬時轉錄激活等試驗，發現NtMYC2為正向調控因子。進一步分析發現NtMYC2基因過表達后，轉基因煙草葉片中多酚合成代謝主要結構酶基因，如NtPAL、Nt4CL、NtCHS、NtCHI、NtFLS等轉錄水平的表達量顯著上調，且新綠原酸、綠原酸、蕓香苷等多酚化合物含量顯著增加，說明NtMYC2作為正向調控因子，參與煙草多酚物質的合成調控。

MYC2在植物抵御非生物脅迫抗性中發揮重要作用。MYC2可能通過增強類黃酮生物合成和抗壞血酸氧化還原循環，正調節JA介導的抗蟲性和對氧化脅迫的耐受性[14]。研究發現，擬南芥WRKY46與MYC2結合形成WRKY46-MYC2復合體正向調控TT4基因和CHIL基因，從而引起類黃酮物質，特別是柚皮素的積累，并在植物抗蟲方面發揮重要作用[15]。有研究發現，綠原酸、黃酮醇、花青素等多酚類物質可能是通過其清除活性氧的能力維持鹽脅迫下植物體內活性氧的平衡，使植物細胞免受活性氧的毒害，在鹽脅迫下正常生長[16-18]。本研究發現NtMYC2過表達煙草株系在鹽脅迫條件下發芽率顯著高于野生型對照，且具有較高的氧化酶活性和較低的活性氧水平，推測NtMYC2可能通過增強對氧化脅迫的耐受性，提高了植株的鹽脅迫抗性。

4結論

本研究通過同源克隆法，成功克隆到NtMYC2轉錄因子。經分析發現，NtMYC2轉錄因子定位于細胞核內，能夠激活NtCHS1基因啟動子的轉錄活性，正向調控多數多酚生物合成途徑關鍵酶基因，增強新綠原酸、綠原酸、蕓香苷等多酚類物質生物合成。在 100mmol/LNaCl 處理下，NtMYC2基因過表達株系的發芽率顯著高于野生型對照；在200mmol/LNaCl 處理 48h 后，過表達株系體內H₂O₂ 含量和MDA含量顯著低于野生型對照，POD和APX活性高于野生型對照。綜上，NtMYC2能夠正向調控NtCHS1基因等結構基因的表達，引起轉基因煙草體內多酚類物質的顯著積累，并在煙草鹽脅迫抗性中發揮重要作用。

參考文獻

[] DONG N Q，LIN HX.Contributionof phenylpropanoid metabolism toplant development and plant-environment interactions[J].Journal ofIntegrative PlantBiology，2021， 63（1）：180-209.

[2] 周小紅，劉國順，賈方方，等.不同香型和基因型烤煙多酚類物 質含量分布研究[J].西南農業學報，2015，28（3）：1328-1333. ZHOUXH，LIUGS，JIAFF，etal.Studyonpolyphenols distribution in flue-cured tobacco of different flavorsand genotypes[J].Southwest China Journal of Agricultural Sciences， 2015，28（3）：1328-1333.

[3] LIUWX，FENGY，YUSH，etal.Theflavonoidbiosynthesis network in plants[J].International JournalofMolecular Sciences， 2021，22（23）： 12824.

[4] ZHANGJN，ZHAOHQ，CHENL，etal.Multifacetedrolesof WRKYtranscription factorsin abioticstress andflavonoid biosynthesis[J].FrontiersinPlantScience，2023，14：1303667.

[5] WANGZ，WANGSB，LIUPP，etal.Molecularcloningand functional characterizationofNtWRKY4la inthe biosynthesisof phenylpropanoidsinNicotiana tabacum[J].PlantScience，2022，315： 111154.

[6] CHENWQ，PROVARTNJ，GLAZEBROOKJ，etal.Expression profile matrixof Arabidopsis transcription factor genes suggests their putative functionsin response to environmental stresses[J].ThePlant Cell，2002，14（3）： 559-574.

[7] CHENS，WUFY，LIYT，etal.NtMYB4andNtCHS1arecritical factorsintheregulationofflavonoidbiosynthesisand are involved in salinityresponsiveness[J].Frontiers inPlant Science，2019，10：178.

[8] 鄭嘉瑞，楊曉燕，葉家保，等.MYC2轉錄因子在植物中的功能 研究進展[J].園藝學報，2023，50（4）：896-908. ZHENGJR，YANGXY，YEJB，etal.Advancesinthefunctional studiesofMYC2 transcription factor in plants[J].Acta Horticulturae Sinica，2023，50（4）：896-908.

[9] CHENGH，SUNJY，LIUM，etal.SPOROCYTELESSisanovel embryophyte-specifictranscriptionrepressorthat interactswith TPL and TCP proteinsin Arabidopsis[J]. Journal of Geneticsand Genomics，2014， 41（12）： 617-625.

[10] LIULJ，ZHANGYY，TANGSY，etal.An efficientsystemto detect protein ubiquitination byagroinfiltration in Nicotiana benthamiana[J].ThePlantJournal，201o，61（5）： 893-903.

[11] ANJP，LIHH，SONGLQ，etal.The molecularcloning and functional characterization ofMdMYC2，abHLH transcription factor inapple[J].PlantPhysiologyand Biochemistry，2016，108：24-31.

[12]LIU S C，WANG Y， SHI M， et al. SmbHLH60 and SmMYC2 antagonisticallyregulatephenolicacidsandanthocyanins biosynthesis in Salvia miltiorrhiza[J].Journal of Advanced Research， 2022，42：205-219.

[13] OGAWA S，MIYAMOTOK，NEMOTOK，etal.OsMYC2，an essential factor for JA-inductive sakuranetin production in rice， interacts with MYC2-like proteins that enhance its transactivation ability[J].ScientificReports，2017，7：40175.

[14] DOMBRECHT B，XUE G P，SPRAGUE SJ，et al.MYC2 differentially modulates diverse jasmonate-dependent functions in Arabidopsis[J].ThePlantCell，2007，19（7）：2225-2245.

[15]HAOX，WANGSY，FUY，etal.TheWRKY46-MYC2module playsacritical rolein E-2-hexenal-induced anti-herbivore responses bypromoting flavonoid accumulation[J]. Plant Communications， 2024，5（2）：100734.

[16] LIP，LIYJ，ZHANG FJ，etal.The ArabidopsisUDPglycosyltransferasesUGT79B2 and UGT79B3，contribute tocold， salt and drought stress tolerance via modulating anthocyanin accumulation[J]. The Plant Journal，2017，89（1）：85-103.

[17] LIUSH，JUJF，XIAGM.Identification oftheflavonoid _3^° 1 hydroxylaseand flavonoid3'， 5^° -hydroxylasegenesfromAntarctic mossand their regulation during abiotic stress[J].Gene，20l4，543（1）： 145-152.

[18] AGATIG，AZZARELLOE，POLLASTRIS，etal.Flavonoidsas antioxidantsin plants：Location and functional significance[J].Plant Science，2012，196：67-76.