DNA錯配修復(fù)蛋白在早期胃腺癌中的表達(dá)及臨床意義

DOI：10.16424/j.cnki.cn32-1807/r.2025.04.014

[關(guān)鍵詞]早期胃腺癌;DNA錯配修復(fù)蛋白;錯配修復(fù)缺陷 [中圖分類號]R735.2 [文獻標(biāo)志碼]A [文章編號] 1674-7887（2025）04-0379-05

Expression and clinical significance of DNA mismatch repair protein in earlygastricadenocarcinoma*

SONG Li^?* ，ZHANGXunlei，PANGuanwen2，MIAOXiaobing*** （'Departmentof Oncology，Affiliated TumorHospital of NantongUniversityNantongTumorHospital，Jiangsu226361;SchoolofMedicine，NantongUniversity;Departmentof Pathology，Affiliated Tumor Hospital ofNantongUniversity，Nantong Tumor Hospital）

[Abstract]Objective：To analyzeexpresionand clinical significanceofDNA mismatchrepair（MMR）protein inearlygastric adenocarcinoma.Methods：Theexpressonof thefourMMR（MLH1，MSH2，MSH6，andPMS2）wereexaminedbyimmunohisto chemistry in172 casesof early gastricadenocarcinomaspecimens.Therelationship between defective mismatchrepair （dMMR）andpathologicalcharacteristicsandprognosiswerealsoanalyzed.Results：Ofthe172casesofearlygastricadenocarcinoma patients， 124（72.1%） patients had proficientmismatch repair（pMMR），while48（27.9 % ）patientsdisplayeddMMR. Among patients with dMMR， 15（8.7%） patients displayed loss of one MMR protein，33（19.2 % ）patients showed loss of at least twoMMR proteins.Statistical analysisrevealed a significantcorrelation between MMR status andpatients’gender（ P lt;0.001）， infiltration depth（ P =0.001），tumor diameter（ P =0.006）and TNM staging（ P =0.001），whereas no significant correlation was observedbetween MMRstatusandage，lymphnodemetastasis，Laurenclasification，tumordiffrentiationandotherclinico pathologicalcharacteristics.Kaplan-Meiersurvivalanalysisdemonstratedthattherewasnostatisticallsignificantdiference in overall survival（OS） between the dMMR group and pMMR group（ P =0.982）.Further analysis revealed that patientswith pMMR tumorsreceiving postoperative chemotherapy hadsignificantly beterOS than thosenot receiving postoperative chemotherapy group（ P =0.007）.However，in patients with dMMR tumors，there was no significant diffrence in OS between the postoperative chemotherapy group and the non-chemotherapy group（ P =0.746）.Univariate and multivariate Cox regression analysis showed that postoperativechemotherapywasaprognostic factor inearly gastric adenocarcinoma patients with pMMR tumors.Conclusion：Earlygastricadenocarcinomapatients withpMMRtumors havedistinctiveclinicopathologicalcharacteristics，includingfemalepredominance，lowerTstage，andsmalltumorlesions.Postoperativechemotherapysignificantlymproves thesurvivaloutcomesof earlygastricadenocarcinoma patients withpMMR tumors.However，postoperativechemotherapydid not affect the prognosis of EGC patients with dMMR tumors. [Key words] early gastric adenocarcinoma; DNA mismatch repair protein; defective mismatch repair

胃癌是常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率均較高[I-2。根據(jù)2022年中國惡性腫瘤流行情況分析，胃癌新發(fā)病例35.87萬例，死亡26.04萬例。胃癌的發(fā)生機制復(fù)雜，除了環(huán)境和遺傳因素外，分子亞型的研究逐漸揭示了其異質(zhì)性。隨著精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，2014年TCGA數(shù)據(jù)庫分析結(jié)果將胃癌分為4種亞型：EB病毒陽性型、微衛(wèi)星不穩(wěn)定（microsatelliteinsta-bility，MSI）型、基因組穩(wěn)定型和染色體不穩(wěn)定型4。

MSI型是由于錯配修復(fù)缺陷（defectivemismatchrepair，dMMR）導(dǎo)致微衛(wèi)星區(qū)域出現(xiàn)堿基插人或丟失，進而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。研究[5-7顯示，MSI型胃癌與微衛(wèi)星穩(wěn)定（microsatellite stability，MSS）型相比，具有不同的臨床病理特征及化療反應(yīng)性，且與患者預(yù)后相關(guān)。本研究通過免疫組化檢測172例早期胃腺癌組織中DNA 錯配修復(fù)（mismatch repair，MMR）蛋白的表達(dá)情況，分析其在早期胃腺癌中的臨床意義。

1資料和方法

1.1臨床資料選取2007年1月—2015年12月在南通大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院進行手術(shù)切除、術(shù)后病理證實為胃腺癌，并按美國癌癥聯(lián)合委員會（AmericanJointCommitteeonCancer，AJCC）胃癌分期標(biāo)準(zhǔn)為I＼～Ⅱ期的患者172例，術(shù)前均未行放、化療和其他抗腫瘤治療。其中男130例，女42例；年齡39＼～80歲，平均 （63.6±9.5） 歲；腫瘤直徑 gt;5cm 37 例， ?5cm135 例；組織學(xué)類型：高/中分化113例，低分化59例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移116例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移56例；TNM分期I期57例，Ⅱ期115例；術(shù)后行輔助化療（方案以氟尿嘧啶類為主）85例，未行輔助化療87例。所有患者均簽署知情同意書并經(jīng)南通大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)（LW2025008）。

1.2免疫組化檢測及結(jié)果判讀免疫組化染色采用EnVision兩步法，一抗MLH1（克隆號ES05，貨號ZM-0154）、MSH2（克隆號RED2，貨號ZA-0622）、MSH6（克隆號EP49，貨號ZA-0541）及PMS2（克隆號EP51，貨號ZA-0542）均購自北京中杉金橋公司，二抗（貨號K5007）及DAB（貨號K3468）購自DAKO公司。用PBS代替一抗作為陰性對照。結(jié)果判讀：MLH1、MSH2、MSH6及PMS2蛋白均定位于細(xì)胞核，核呈黃色或棕褐色判定為陽性，陽性細(xì)胞數(shù) lt;10% 判定為陰性，在腫瘤組織中4個MMR蛋白均陽性表達(dá)，則為錯配修復(fù)正常（proficient mismatch repair，pMMR）型;任1種MMR蛋白缺失即為dMMR型，提示微衛(wèi)星高度不穩(wěn)定（microsatellite instability-high，MSI-H）。所有患者采取電話或門診復(fù)查的方式進行隨訪，截止時間為2020年4月30日，所有患者具有完整的隨訪資料，隨訪生存期超過5年。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法采用 SPSS20.0進行數(shù)據(jù)分析 °χ² 檢驗用于評價dMMR與臨床病理特征的關(guān)系。生存分析用Kaplan-Meier法和Log-rank 檢驗。單因素及多因素Cox比例風(fēng)險回歸進一步分析早期胃腺癌患者臨床病理參數(shù)是否為預(yù)后的影響因素。 Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1早期胃腺癌患者MMR蛋白表達(dá)情況免疫組化結(jié)果顯示，MLH1、MSH2、MSH6、PMS2均定位于腫瘤細(xì)胞核，細(xì)胞核呈棕褐色或黃色，見圖1。在172例早期胃腺癌中，pMMR組124例 （72.1%） ，dMMR組48例 （27.9%） ，其中僅1種MMR蛋白表達(dá)缺失15例（8.7%） ，兩種及以上MMR蛋白同時缺失33例 （19.2%） 。2.2MMR狀態(tài)與早期胃腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系結(jié)果顯示，dMMR與性別 （Plt;0.001） 、浸潤深度_{（P=0.001）} 、腫瘤直徑 _{（P=0.006）} 及TNM分期 （P=0.001） 相關(guān)，與年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Lauren分型、分化程度等臨床病理特征無關(guān) （P50.05） ，見表1。

2.3MMR狀態(tài)與早期胃腺癌患者生存期的關(guān)系生存分析顯示dMMR組患者總體生存期（overallsurvival，OS）與pMMR組差異無統(tǒng)計學(xué)意義 （P=0.982） ，進一步分析顯示，在pMMR組中，術(shù)后進行輔助化療患者的OS明顯優(yōu)于未化療患者 _{（P=0.007）} ，而在dMMR組，術(shù)后輔助化療患者的OS與未化療患者者差異無統(tǒng)計學(xué)意義 （P=0.746） ，見圖2。

2.4早期胃腺癌臨床病理特征對預(yù)后的影響單因素及多因素Cox比例風(fēng)險回歸顯示在172例早期胃腺癌患者中術(shù)后輔助化療是患者預(yù)后的獨立影響因子，見表2。進一步分析發(fā)現(xiàn)，腫瘤直徑和術(shù)后輔助化療是pMMR組患者預(yù)后的獨立影響因子，見表3；然而在dMMR組化療并非影響預(yù)后的獨立影響因子，見表4。

注：A，MLH1;B，MSH2;C，MSH6;D，PMS2。 Bar=50μm （204號

3討論

胃癌是一類高度異質(zhì)性的惡性腫瘤，主要有Lauren分型和WHO分型兩種分型系統(tǒng)。2014年，TCGA研究人員將胃癌分為4個亞型，為指導(dǎo)臨床治療提供一定的依據(jù)，其中MSI型胃癌具有特征性的臨床表現(xiàn)和高度突變、高度甲基化等表觀遺傳學(xué)改變，且具有較好的免疫治療反應(yīng)性。目前，針對胃癌微衛(wèi)星相關(guān)的檢測方法主要有免疫組化（MLH1、MSH2、MSH6、PMS2）、PCR（NR-27、NR-21、BAT-26、BAT-25、NR-24、MONO-27），兩種PCR檢測方法對評估腫瘤的MSI狀態(tài)具有較高的一致性[8-10]。

本研究利用免疫組化檢測了172例早期胃腺癌中MMR蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果顯示pMMR組124例（72.1%） ，dMMR組48例 （27.9%） ，其中僅1種MMR蛋白表達(dá)缺失15例 （8.7%） ，兩種及以上MMR蛋白同時缺失33例 （19.2%） 。與文獻[11]報道 8%～39.5% 的胃癌存在MSI結(jié)果相符。進一步分析結(jié)果顯示，dMMR與性別 （Plt;0.001） 、浸潤深度 _{（P=0.001）} 、腫瘤直徑 _{（P=0.006）} 及TNM分期 （P=0.001） 相關(guān)。D.MAR-RELLI等研究發(fā)現(xiàn)，胃癌患者中MSI-H占 23.5% ，且以老年人、女性，胃竇部、腸型胃癌、分期較早為主，與本研究結(jié)果基本相似，但本研究結(jié)果顯示dMMR與年齡、分化程度、Lauren分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤等臨床病理特征無關(guān)，分析存在的原因可能受人群異質(zhì)性、腫瘤分期或者分子亞型（如幽門螺桿菌感染、EB病毒感染）等混雜因素的影響，未來還需結(jié)合多組學(xué)數(shù)據(jù)（如空間轉(zhuǎn)錄組或單細(xì)胞測序）進一步探索MSI-H胃癌中轉(zhuǎn)移相關(guān)通路的特異性改變。

對于MSI狀態(tài)在胃癌預(yù)后預(yù)測中的作用仍存在爭議[12-13]，有研究[4發(fā)現(xiàn)MSI-H胃癌患者OS優(yōu)于MSI-L及MSS胃癌患者，但對氟尿嘧啶類藥物則不如MSI-L、MSS胃癌患者敏感，化療效果欠佳。本研究顯示dMMR型早期胃腺癌患者的OS與pMMR型差異無統(tǒng)計學(xué)意義，這一結(jié)果可能與樣本量較小有關(guān)，未來需要更大規(guī)模的研究來驗證這一結(jié)論。值得注意的是，在pMMR組中，術(shù)后行輔助化療患者的OS明顯優(yōu)于未行輔助化療患者"_{（P=0.007）}"，提示在臨床診療過程中，MMR蛋白表達(dá)狀態(tài)可能是選擇治療方案的重要依據(jù)。

由于胃癌具有高度異質(zhì)性，是一個多步驟、多階段及多基因參與的過程，即使同一臨床分期，患者的預(yù)后也大相徑庭[15-id]。本研究發(fā)現(xiàn)，dMMR型早期胃腺癌具有獨特的臨床病理表現(xiàn)。生存分析顯示，在pMMR型早期胃腺癌患者中，接受化療患者的預(yù)后顯著優(yōu)于未化療患者，而dMMR型患者的生存結(jié)局與化療干預(yù)無顯著相關(guān)性。因此，檢測MMR蛋白狀態(tài)有助于甄別從化療中獲益的早期胃腺癌人群，對MMR狀態(tài)的精準(zhǔn)評估或可為早期胃腺癌患者的個體化化療決策提供重要參考依據(jù)。由于本實驗收集的早期胃腺癌樣本量較小，還需要后續(xù)更深入的研究和大樣本數(shù)據(jù)驗證。此外，MMR缺失與胃癌的免疫逃逸機制也值得進一步研究。

[參考文獻]

[1] TIRADO-HURTADO I，CARLOS C， LANCHO L，et al. Helicobacterpylori： history and facts in Peru[J].Crit Rev Oncol Hematol，2019，134：22-30.

[2] SUNGH，F(xiàn)ERLAYJ，SIEGEL RL，et al.Global cancer statistics 2O2O：GLOBOCAN estimates of incidence and mortalityworldwide for 36 cancers in 185 countries[J].CA Cancer J Clin，2021， 71（3）：209-249.

[3] 鄭榮壽，陳茹，韓水峰，等.2022年中國惡性腫瘤流行情 況分析[J].中華腫瘤雜志，2024，26（3）：221-231.

[4] CHIANY，TANP.Molecular classification of gastric cancer[J]. Ann Oncol，2016，27（5）：763-769.

[5] WUH，MAWY，JIANGCF，etal.Heterogeneityandadju vanttherapeutic approaches in MSI-H/dMMR resectable gastric cancer：emerging trends inimmunotherapy[J].Ann Surg Oncol， 2023，30（13）：8572-8587.

[6] MARRELLI D， POLOM K，PASCALE V，et al. Strong prognostic value of microsatellite instability in intestinal type non-cardia gastric cancer[J].Ann Surg Oncol， 2016， 23（3）：943-950.

[7] SMYTHEC，WOTHERSPOONA，PECKITTC，etal.Mismatchrepairdeficiency，microsatelliteinstability，and survival：an exploratory analysis of themedical research council adjuvantgastric infusional chemotherapy（MAGIC） trial[J].JAMA Oncol，2017，3（9）：1197-1203.

[8]AMIRA A T， MOUNA T，AHLEM B，et al. Immunohistochemical expression pattern of MMR protein can specifically identify patients with colorectal cancer microsatelite instability[J]. Tumour Biol， 2014，35（7）：6283-6291.

[9]GIBSON J， LACY J， MATLOFF E， et al. Microsatellite instability testing in colorectal carcinoma： a practical guide[J]. Clin Gastroenterol Hepatol， 2014， 12（2）：171-176.e1.

[10]周林艷，萬美珍，劉永萍，等.免疫組織化學(xué)與聚合酶鏈 反應(yīng)在結(jié)腸癌微衛(wèi)星狀態(tài)篩選中的比較[J].腫瘤防治 研究，2015，42（12）：1231-1234.

[11]ARAI T，SAKURAI U，SAWABE M，et al.Frequent microsatellite instability in papillary and solid-type，poorly differentiated adenocarcinomas of the stomach[J]. Gastric Cancer， 2013，16（4）：505-512.

[12]HAAG G M， CZINK E， AHADOVA A， et al. Prognostic significance ofmicrosatellite-instabilityingastricand gastroesophageal junction cancer patients undergoing neoadjuvant chemotherapy[J]. Int J Cancer，2019，144（7）：1697- 1703.

[13]ZHU X Q， TIAN X L， SUN T T， et al. GeneExpressScore Signature： a robust prognostic and predictive classifier in gastric cancer[J]. Mol Oncol， 2018，12（11）：1871-1883.

[14]FANG WL， CHANG SC，LAN Y T，et al. Microsatellite instability is associated with a better prognosis for gastric cancer patients after curative surgery[J]. World JSurg， 2012， 36（9）：2131-2138.

[15]BANKS M， GRAHAM D， JANSEN M， et al. British Society of Gastroenterology guidelines on the diagnosis and management of patients at risk of gastric adenocarcinoma[J]. Gut， 2019， 68（9）：1545-1575.

[16]OKINES A C， THOMPSON L C， CUNNINGHAM D， et al. Effect of HER2 on prognosis and benefit from peri-operative chemotherapy in early oesophago-gastric adenocarcinoma in the MAGIC trial[J]. Ann Oncol， 2013，24（5）：1253- 1261. [收稿日期]2025-04-15