基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接技術(shù)探討瓜萎白半夏湯“異病同治”冠狀動脈微血管疾病和高脂血癥的作用機(jī)制

TheMechanismGualouXiebaiBanxiaDecoctionforTreatingCoronary MicrovascularDiseaseHyperidemiabyTreating Different Diseases with Same Method \" Based on Network Pharmacology Molecular Docking JU Tongtong1，HU Jiqiang2

1.BejingUniveitediieninoangspitalnsityfei

100071，China

CorrespondingAuthorHU Jiqiang，E-mail：hujiqiang0923 @ 163.com

AbstractObjective：ToexplorethematerialbasismechanismGualouXiebaiBanxiaDecoctionfortreatingcoronarymicrovascular disease（CMVD）hyperlipidemia（HLP）by\"treatingdiferentdiseaseswithsamemethod\"basedonnetworkpharmacology moleculardockingtechnologyMethods：TheactiveingredientstargetsGualouXiebaiBanxiaDecoctionwereobtainedusingthe TraditionalChinese SystemPharmacologyDatabaseAnalysisPlatfom（TCMSP）Query therelevantargetsCMVD HLPwerescreened by GeneCardsOMIMdatabases.The Vennmapwasconstructed toobtain tecommon targetsGualou Xiebai BanxiaDcoctionwithCMVDHLP.Thenetworkdiagram\"GualouXiebaiBanxiaDecoction-activeingredients-commontargets\" wasdranbyCytoscape3.10.0starethecoreactiveingredientswerescreened.TheSTRINGdatabasewasusedtoconstruct theprotein-proteininteraction（PPl）networktoscreenthecoretargets.TheDAVIDdatabasewasusedtoconductgeneontology（G） functionalenrichmentanalysisKyoto EncyclopediaGenesGenomes（KEGG）pathwayenrichmentanalysisoncommongenes. ThecoreactiveingredientswereanalyzedformoleculardockingwiththecoretargetsusingtheAutoDockVina1.5.7stwareResults：A tota35mainctiveingredientsalouebaiBniacoctioereainednd3orectieingredientsuchssteol quercetin，baicaleinnaringeninwerescreenedoutAmongthe83commontargets，32coretargetswerescreenedout，mainly involvingoti）i）ibc （CASP3）.nGalysisteogicalproeemainlyncudedtesposetoonwaeutraviletUV-）tegulatifac contraciltyasosoiftitoiaid metabolismprocesses.Tecellarcomponentsainlyudedserinepeptidasecomplexes，tyrosineinasereceptorcomplexserie proteaseinibiompe，transcritionfactorctitingprotei--omplexesndfamilyproteinomplees.olular functionsmainlydednitricoidestaeactityetradrobopterinstrogesoseementingdealgothctor receptor3（ErbB-3）receptorbinding，nitricoxidesynthasemodulatoractiy.TheKEGGenrichmentpathwaymainlyincludedtothe cancersignalingpathayteoletedvancedgycationndroductadvancedgcationndproductreceptorAGERAGE）iling pathwayidiabticomplicatios，teguatioboodflowarfoceinethrosleroticigalingpathaytercosi factorsiglipttiddroleoticaipdoiuictorp resultsmoleculardockingsoedthattheindingactietecoreactiveingredientstheoretargetproteiswerebe theactiveingredientsshowedsomestrongbindingactivitywiththetargetproteins.Conclusion：GualouXiebaiBanxia Decoctionmightplay therapeutic effects on CMVD HLP through multiple targets multiple pathways.

Keywordscoronarymicrovasculardisease;hyperlpidemia;GualouXiebaiBanxiaDecoction;networkpharmacolog;treatigiferent diseaseswithsamemethod;moleculardocking;mechanism

瓜萎薤白半夏湯出自《金匱要略·胸痹心痛短氣篇》，在《金匱要略》中治療胸痹近半數(shù)均應(yīng)用了瓜萎薤白白酒湯，此方由瓜萎、薤白和半夏三味藥組成，藥味精簡且配伍嚴(yán)謹(jǐn)，臨床效果極佳，目前臨床廣泛應(yīng)用于心血管疾病和其他疾病的治療。

冠狀動脈微血管疾病（coronarymicrovasculardisease，CMVD）指在動脈粥樣硬化和非動脈粥樣硬化性致病因素的作用下，冠狀前小動脈（內(nèi)徑 0.1～0.5 mm）小動脈（內(nèi)徑 lt;0.1mm ）和毛細(xì)血管的結(jié)構(gòu)和功能異常所致的急性、慢性心肌缺血的臨床綜合征[1]。CMVD又稱為X綜合征、微血管性心臟病等，是引起心絞痛的原因之一。目前，CMVD的發(fā)病機(jī)制尚未明確，可能與冠狀動脈結(jié)構(gòu)和功能、冠狀動脈血流調(diào)節(jié)機(jī)制、冠狀動脈微血管的結(jié)構(gòu)異常、冠狀動脈微血管阻塞、冠狀動脈微血管功能異常有關(guān)。西醫(yī)治療主要以緩解癥狀為主，包括改善生活方式、抗動脈粥樣硬化和抗血小板聚集；藥物治療以β受體阻滯劑、鈣通道阻滯劑、他汀類藥物和阿司匹林為主，常用的中成藥包括通心絡(luò)膠囊和麝香保心丸等，但臨床療效不佳。中醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，CMVD并無相關(guān)古籍中的記載，中醫(yī)的診治一般以“胸痹\"\"心痛\"治療。張仲景《金匱要略》中明確提出了“胸痹\"這一病名，提出“陽微陰弦”是其病機(jī)，“胸痹不得臥，心痛徹背”描寫的癥狀與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)所說的冠狀動脈微血管疾病相似。相較于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，中醫(yī)學(xué)具有辨證論治的優(yōu)勢，對CMVD的辨證可為論治提供思路。陳佳萍等2研究顯示，瓜萎白半夏湯在CMVD病人中藥湯劑的治療中使用頻率為 9.09% ，具有較好的治療效果。

高脂血癥（hyperlipidemia，HLP）也稱為高血脂或血脂異常，通常指血漿三酰甘油和（或）總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇升高，高密度脂蛋白膽固醇降低，該病呈年輕化趨勢。中醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，并無血脂一詞，與“膏脂”“血濁\"等概念相似，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)在“膏脂\"基礎(chǔ)上結(jié)合各家學(xué)說，認(rèn)為HLP的本質(zhì)是本虛標(biāo)實(shí)，以脾虛為本，痰濁、瘀血為標(biāo)，治療以活血化瘀、健脾祛濕、化濁降脂為主要治則。中醫(yī)藥治療HLP有一定的優(yōu)勢，王宇卿等3動物實(shí)驗(yàn)顯示，瓜萎薤白半夏湯通過調(diào)節(jié)血脂水平、抑制脂質(zhì)積累，發(fā)揮抗HLP的藥理作用。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接技術(shù)，分析瓜萎薤白半夏湯中的有效成分和靶點(diǎn)，探討瓜萎白半夏湯治療CMVD和HLP的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制，闡明“異病同治\"的觀點(diǎn)，以期為深人研究瓜萎薤白半夏湯的藥理作用和“異病同治\"提供新思路、新方向。

1資料與方法

檢索中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫和分析平臺（TCMSP，https：//old.tcmsp-e.com/tcmsp.php），以口服生物利用度（oralbioavailability，OB） 、類藥性（drug likeness， DL）?0.18 為條件，篩選瓜萎白半夏湯的活性成分及對應(yīng)的蛋白靶點(diǎn)。使用UniProt數(shù)據(jù)庫（https：//www.uniprot.org）對蛋白靶點(diǎn)的名稱進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理。

1.2 CMVD和HLP相關(guān)靶點(diǎn)篩選

以“coronarymicrovasculardisease”和“hyperlipidemia'為關(guān)鍵詞檢索GeneCards（https：//www.genecards.org/）和在線人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫（OMIM，https：//www.omim.org/）獲取CMVD和HLP的相關(guān)靶點(diǎn)。在GeneCards數(shù)據(jù)庫中將收集到的基因數(shù)據(jù)進(jìn)一步依據(jù)相關(guān)性得分中的中位值進(jìn)行篩選，得到基因靶點(diǎn)。合并數(shù)據(jù)庫中的相關(guān)靶點(diǎn)，剔除重復(fù)值，最終得到CMVD與HLP的相關(guān)靶點(diǎn)數(shù)據(jù)。

1.3瓜萎薤白半夏湯治療CMVD和HLP的潛在靶點(diǎn) 獲取

使用微生信平臺（http：//www.bioinformatics.com.cn/）構(gòu)建Venn圖，分別得到共有靶點(diǎn)，即瓜萎薤白半夏湯與CMVD、瓜萎白半夏湯與HLP的潛在作用靶點(diǎn)。再將兩組共有靶點(diǎn)取交集，最終得到瓜萎薤白半夏湯治療CMVD和HLP的共同靶點(diǎn)基因信息。將中藥、活性成分、共同靶點(diǎn)基因等數(shù)據(jù)導(dǎo)人Cytoscape3.10.0平臺，構(gòu)建“中藥-活性成分-共同靶點(diǎn)\"網(wǎng)絡(luò)圖。

1.4蛋白-蛋白互作（PPI）網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

將1.3中得到的共同靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫（https：//cn.string-db.org/）中，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)圖。將數(shù)據(jù)導(dǎo)人Cytoscape3.10.0進(jìn)行可視化分析。運(yùn)用Cytoscape中的CytoHubba插件進(jìn)行拓?fù)浞治觥?/p>

1.5基因本體（GO）功能富集分析、京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路富集分析

將交集靶點(diǎn)導(dǎo)人DAVID數(shù)據(jù)庫（https：//david.ncifcrf.gov/），種屬限定為“Homosapiens”，得到GO、KEGG富集分析結(jié)果，輸入微生信網(wǎng)站（http：//wwwbioinformatics.com.cn/）制圖。對共有疾病交集靶點(diǎn)生物過程（BP）細(xì)胞組分（CC）分子功能（MF）進(jìn)行分析。

1.6 分子對接

從PubChem數(shù)據(jù)庫獲取核心靶點(diǎn)對應(yīng)活性成分的SDF格式，導(dǎo)人Chemdraw3D中，利用MM2模塊進(jìn)行能量最小化，獲得能量最低的優(yōu)勢構(gòu)象并保存為MOL2，經(jīng)AutoDockTools1.5.7加氫、加電荷，檢測配體的root，進(jìn)行可旋轉(zhuǎn)鍵的搜尋與定義，并保存為pdbqt文件。首先從UniProt數(shù)據(jù)庫中找到核心靶點(diǎn)的Entry編號，再利用Entry編號從PDB數(shù)據(jù)庫獲取核心靶點(diǎn)蛋白的三維結(jié)構(gòu)，利用PyMOL軟件對蛋白進(jìn)行去水分子、去小分子，再通過AutoDockTools1.5.7軟件添加氫原子、計(jì)算Gasteiger電荷，將其定義為受體并保存成pdbqt文件。為了實(shí)施精確的分子對接計(jì)算，預(yù)先設(shè)置了合適的對接Box，使用AutoDockVina1.1.2軟件將配體與受體進(jìn)行對接，PyMOL軟件分析結(jié)合模式并進(jìn)行可視化分析。

2結(jié)果

2.1瓜萎白半夏湯活性成分及作用靶點(diǎn)收集

通過TCMSP數(shù)據(jù)庫檢索獲得瓜萎、薤白、半夏的化學(xué)成分，以 OB≥30% 、 DL≥0.18 為條件篩選出活性成分35個，其中11個來自瓜萎，11個來自薤白，13個來自半夏。最終得到瓜萎薤白半夏湯活性成分35個，通過UniProt數(shù)據(jù)庫查找到有效成分的相關(guān)靶點(diǎn)476個，刪除重復(fù)靶點(diǎn)后剩余376個靶點(diǎn)。

2.2 CMVD和HLP相關(guān)靶點(diǎn)篩選

共得到CMVD相關(guān)靶點(diǎn)544個，HLP相關(guān)靶點(diǎn)1788個。2.3瓜萎白半夏湯治療CMVD及HLP的共有靶點(diǎn)將瓜萎白半夏湯相關(guān)靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)數(shù)據(jù)輸入至微生信平臺，獲得瓜萎白半夏湯與CMVD及HLP的交集靶點(diǎn)分別為109、105個。將上述靶點(diǎn)取交集獲得瓜萎白半夏湯治療CMVD與HLP的共有靶點(diǎn)83個。詳見圖1。

圖1瓜萎白半夏湯治療CMVD與HLP的交集靶點(diǎn)韋恩圖

2.4“中藥-活性成分-共同靶點(diǎn)\"網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

根據(jù)83個中藥與疾病的共有靶點(diǎn)基因反向篩選對應(yīng)的瓜萎薤白半夏湯活性成分，其中瓜萎9個、薤白11個、半夏9個，共有活性成分1個。應(yīng)用Cytoscape3.10.0軟件構(gòu)建“中藥-活性成分-共同靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖。詳見圖2。圖中黃色代表中藥；節(jié)點(diǎn)中央餅狀圖淺綠色代表瓜萎的有效成分，淺黃色代表白的有效成分，紫色代表半夏的有效成分，兩種顏色表示共同的有效成分；藍(lán)色節(jié)點(diǎn)代表中藥與疾病的共同靶點(diǎn)。

利用CytoHubba插件進(jìn)行拓?fù)浞治觯?jié)點(diǎn)度值（Degree值）排名前4位的藥物活性成分依次是豆甾醇（stigmasterol）、槲皮素（quercetin）、黃芩苷（baicalein）、柚皮素（naringenin），上述活性成分可能是瓜萎薤白半夏湯治療CMVD和HLP的關(guān)鍵活性成分。

圖2瓜萎白半夏湯\"異病同治\"CMVD與HLP的\"中藥-活性成分-共同靶點(diǎn)\"網(wǎng)絡(luò)圖

2.5核心靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

將PPl數(shù)據(jù)導(dǎo)人Cytoscape3.10.0，通過插件CytoNCA篩選出參數(shù)大于中位數(shù)的靶點(diǎn)基因，即Degree值 gt;80 、局部平均連通性（ .∠AC）gt;62.1 、介數(shù)中心性 接近中心性 （CC）gt;0.661 、特征向量中心性 （EC）gt;0.108 、網(wǎng)絡(luò)中心性 ，最終得到核心基因32個。詳見表1。將83個中藥疾病共同靶點(diǎn)基因?qū)薙TRING平臺，選定“Homosapiens”，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)圖，詳見圖3。瓜萎薤白半夏湯“異病同治”CMVD及HLP的核心靶點(diǎn)見圖4。圖中Degree值越大，顏色越深代表節(jié)點(diǎn)越大。Degree值排名居前5位分別是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（RAC-alphaserine/threonine-proteinkinase，AKT1）、白細(xì)胞介素6（interleukin6，IL6）、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1beta，IL1B）、缺氧誘導(dǎo)因子 -1a （hypoxia-induciblefactor1-alpha，HIF1A）胱天蛋白酶3（Caspase-3，CASP3）。

表1篩選的核心基因

（續(xù)表）

圖3瓜萎白半夏湯“異病同治\"CMVD及HLP的“活性成分-疾病\"共同靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)圖

圖4瓜萎薤白半夏湯“異病同治\"CMVD及HLP的核心靶點(diǎn)

2.6 GO功能富集分析及KEGG通路富集分析

為進(jìn)一步分析中藥疾病共同靶點(diǎn)在CMVD及HLP中的可能作用，利用DAVID數(shù)據(jù)庫進(jìn)行GO功能富集分析及KEGG通路富集分析。GO富集條目包括BP505條，CC52個，MF93種；137條KEGG通路。將得出的數(shù)據(jù)信息根據(jù)Count值排序并滿足校正后 P? 0.05，分別選取GO功能富集分析及KEGG通路富集分析排名居前10位的條目導(dǎo)入微生信平臺，分別以三合一柱狀圖及氣泡圖方式展現(xiàn)。詳見圖5和圖6。其中涉及的BP主要包括對長波紫外線（UV-A）的反應(yīng)、化學(xué)信號對心臟收縮力的調(diào)節(jié)、平滑肌增生、氮利用調(diào)控和脂肪酸代謝過程的正向調(diào)節(jié)等；CC主要包括絲氨酸型肽酶復(fù)合物、酪氨酸激酶受體復(fù)合物、絲氨酸蛋白酶抑制劑復(fù)合物、轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白-1（AP-1）復(fù)合體和Bc-2家族蛋白復(fù)合物等；MF主要包括一氧化氮合酶活性、四氫生物蝶呤、雌激素反應(yīng)元件結(jié)合、表皮生長因子受體3（ErbB-3）類受體結(jié)合和一氧化氮合酶調(diào)節(jié)劑活性等。KEGG富集通路主要涉及癌癥信號通路、晚期糖化終產(chǎn)物-晚期糖化終產(chǎn)物受體（AGE-RAGE）信號通路在糖尿病并發(fā)癥中的作用、血流剪切力調(diào)控動脈粥樣硬化信號通路、腫瘤壞死因子信號通路、脂質(zhì)與動脈粥樣硬化信號通路和缺氧誘導(dǎo)因子-1（hypoxia-induciblefactor1，HIF-1）信號通路等。

2.7 分子對接

選取PPI網(wǎng)絡(luò)中Degree值排名居前5位的靶點(diǎn)，即AKT1、IL6、IL1B、HIF1A、CASP3，并以Degree值排名居前4位的核心成分豆甾醇（stigmasterol）、槲皮素（quercetin）、黃芩苷（baicalein）、柚皮素（naringenin）分別進(jìn)行分子對接，獲取最低結(jié)合能。通常認(rèn)為配體和受體結(jié)合能數(shù)值越低提示對接能力越好，評估結(jié)合性良好一般以結(jié)合能 lt;-5.0kJ/mol（-1.2kcal/mol） 為標(biāo)準(zhǔn)。瓜萎白半夏湯的關(guān)鍵活性成分與核心靶點(diǎn)分子的結(jié)合能均 lt;-5.0kJ/mol ，詳見表2。根據(jù)結(jié)合能選取結(jié)合最好的3組進(jìn)行對接模式分析作圖，詳見圖7～圖9。

圖5預(yù)測靶點(diǎn)基因的GO功能富集圖

圖6預(yù)測靶點(diǎn)信號的KEGG通路富集圖

表2瓜萎白半夏湯關(guān)鍵活性成分與核心靶點(diǎn)的對接結(jié)合能 單位：kJ/mol

圖7CASP3和黃芩苷的對接模式分析結(jié)構(gòu)圖

圖8CASP3和豆甾醇的對接模式分析結(jié)構(gòu)圖

圖9CASP3和槲皮素的對接模式分析結(jié)構(gòu)圖

3討論

脂質(zhì)代謝異常是動脈粥樣硬化重要的危險(xiǎn)因素，CMVD是冠狀動脈微血管疾病，受到動脈粥樣硬化性致病因素的影響，從而導(dǎo)致冠狀前小動脈、小動脈和毛細(xì)血管的結(jié)構(gòu)和功能異常，引起急性和慢性心肌缺血。臨床上CMVD與HLP常交互存在，相互影響，關(guān)聯(lián)密切。因此，從網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接的角度出發(fā)，結(jié)合中醫(yī)學(xué)“異病同治”的理論，探討瓜萎薤白半夏湯“異病同治”CMVD和HLP的作用機(jī)制具有一定的臨床意義。

根據(jù)CMVD臨床表現(xiàn)歸屬于中醫(yī)學(xué)“胸痹”范疇，病位在心，心為君主之官，在五臟六腑中居于首要地位，心主血脈，心脈以通暢為本。HLP多歸屬于中醫(yī)學(xué)“膏脂”“血濁”和“脂濁\"范疇，導(dǎo)致此病之標(biāo)主要是膏脂堆積，可兼見水濕痰濁壅塞、瘀血久滯堆積、氣郁運(yùn)化失司，病位以脾胃為主，涉及五臟，病因多在于脾虛失運(yùn)、腎氣不足等。脾胃功能受損，體內(nèi)膏脂代謝失常，膏脂精微腐敗積聚而成濁；膏脂精微無以氣化呈液態(tài)運(yùn)行于脈道，而成固態(tài)之“脂\"凝結(jié)于脈道，化為脂濁。脂濁壅滯脈道，內(nèi)生痰濕亦積于脈道，二者均阻礙氣血運(yùn)行，血行滯澀則內(nèi)生瘀血，淤血阻滯，則新血難生，臟腑失于濡養(yǎng)，功能失調(diào)，致體內(nèi)津液不能正常輸布代謝，聚而為痰；同時(shí)脾失運(yùn)化，精微難化，而成痰濁[4]。心氣心陽主要推動血液運(yùn)行，這是心主血脈的基礎(chǔ)，心以陽氣為用，痰、、濁的阻滯導(dǎo)致心之氣血陰陽的虧損，痰、、濁等邪痹阻心脈，胸陽不展，則為胸痹。因此，兩種疾病在發(fā)病和轉(zhuǎn)歸方面存在著密切聯(lián)系，治療從祛痰行氣、通陽散結(jié)入手，故瓜萎白半夏湯可從病因上整體治療，發(fā)揮“異病同治\"的作用。

從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的角度分析，在血管系統(tǒng)中，血脂代謝異常導(dǎo)致動脈壁內(nèi)過量膽固醇分子的積累，泛血管疾病的發(fā)生[5]。低密度脂蛋白膽固醇主要通過增加氧化應(yīng)激反應(yīng)、炎癥、線粒體功能障礙，減少一氧化氮生物利用度導(dǎo)致泛血管疾病的發(fā)生，可一定程度從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)病因的角度解釋這兩種疾病的聯(lián)系。

本研究經(jīng)篩選后的瓜萎白半夏湯的主要活性成分是豆甾醇（stigmasterol）、槲皮素（quercetin）黃芩苷（baicalein）、柚皮素（naringenin）。豆甾醇是一種甾醇化合物，是較多天然藥物中的活性成分，具有維持細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和生理功能的重要作用，對多種類型的腫瘤有一定的治療作用，通過降低促炎細(xì)胞因子水平和小膠質(zhì)細(xì)胞活化，抑制神經(jīng)炎癥[7。豆甾醇具有降低血液膽固醇、抗糖尿病、鎮(zhèn)痛等多種藥理作用[8。槲皮素可抗氧化[9-10]、抗炎[11]和調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝[12-13]的功能，具有促進(jìn)膽固醇從巨噬細(xì)胞中流出的作用4，抑制血管平滑肌細(xì)胞凋亡[15]。槲皮素是一種有效的抗氧化劑，補(bǔ)充槲皮素可預(yù)防和治療心血管疾病等多種慢性疾病[1。黃芩苷是從黃芩根部提取的一種天然黃酮類化合物，具有多種藥理活性，有研究表明，黃芩苷通過抑制氧化應(yīng)激、激活心肌細(xì)胞自噬，減輕心肌肥厚]。黃芩苷不僅有強(qiáng)大的抗炎和抗腫瘤作用，而且是一種強(qiáng)大的自由基清除劑和黃嘌呤氧化酶抑制劑，可改善內(nèi)皮功能，對氧化應(yīng)激引起的細(xì)胞損傷發(fā)揮心血管保護(hù)作用。黃芩昔可在腎素依賴性高血壓中降低血壓，體內(nèi)的降壓作用可能部分歸因于對脂氧合酶的抑制，進(jìn)而減少了花生四烯酸衍生的血管收縮產(chǎn)物合成和釋放。黃芩根和黃芩苷的抗血栓、抗增殖和抗有絲分裂作用有報(bào)道。黃芩苷可抑制凝血酶誘導(dǎo)的血漿型纖溶酶原激活物抑制劑-1產(chǎn)生，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞由白細(xì)胞介素-1β和腫瘤壞死因子 -α 誘導(dǎo)的黏附分子表達(dá)。這些藥理學(xué)發(fā)現(xiàn)利用植物來源的黃芩昔及其類似物治療動脈粥樣硬化和高血壓的潛力。黃芩苷可下調(diào)轉(zhuǎn)錄因子（TF）啟動子活性和蛋白表達(dá)，以劑量依賴性方式發(fā)揮抗凝作用[19]，黃芩苷通過上調(diào)腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）和過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPAR- ?γ 調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，廣泛應(yīng)用于代謝綜合征的預(yù)防和治療[20]。柚皮素是一種具有較強(qiáng)抗炎活性和抗感染特性的黃酮類化合物[21]。柚皮素通過抗氧化、抗炎和抗凋亡作用在多種疾病中發(fā)揮顯著的治療潛力。一項(xiàng)相關(guān)研究顯示，柚皮素在異丙腎上腺素誘導(dǎo)的Wistar大鼠心肌梗死中的有益作用及其改變脂蛋白、脂質(zhì)和脂質(zhì)代謝酶的潛力，血清、心臟中總膽固醇和游離膽固醇、游離脂肪酸、膽固醇酯和三酰甘油水平顯著降低，心臟中的磷脂水平升高；柚皮素預(yù)處理可抑制3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A（HMG-CoA）還原酶的活性，具有降低膽固醇的作用，證實(shí)了柚皮素可保護(hù)心肌免受脂質(zhì)蓄積的影響[22]。Meng等[23]報(bào)道了采用柚皮素 處理的I/R大鼠心臟通過激活 K_ATP 通道，在左心室功能恢復(fù)方面有改善。柚皮素可降低冠狀動脈流出液中的乳酸脫氫酶（LDH），提高心肌的抗氧化能力[24]。

本研究PPI網(wǎng)絡(luò)分析表明，AKT1、IL6、IL1B、HIF1A、CASP3等是瓜萎白半夏湯“異病同治”CMVD和HLP的核心作用靶點(diǎn)。AKT1作為與絲氨酸/蘇氨酸蛋白密切相關(guān)的基因之一，可調(diào)節(jié)多種細(xì)胞功能，如細(xì)胞增殖、存活、新陳代謝及血管生成[25]。IL6是重要的炎癥調(diào)控因子，可激活信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子3（STAT3）信號，繼而引發(fā)一系列炎性反應(yīng)[26]。

STAT3信號通路激活，并加劇血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的心臟損傷過程[27]。IL1B是IL-1家族的兩種激動劑之一，參與冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的進(jìn)展，包括局部病變形成、血管炎癥反應(yīng)和易損斑塊破裂[28]。IL1B等細(xì)胞因子可影響動脈粥樣硬化的進(jìn)展[29]，IL1B信號通路與動脈粥樣硬化相關(guān)，IL1B抑制劑顯著降低了心肌梗死病人的心血管事件發(fā)生率[30]。HIF-1α轉(zhuǎn)錄因子是細(xì)胞對缺氧反應(yīng)的主要調(diào)節(jié)因子，膽固醇的積累是動脈粥樣硬化過程的主要驅(qū)動因素，HIF-1α證實(shí)可影響巨噬細(xì)胞中的脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)并促進(jìn)膽固醇積累[31]CASP3可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，引起相關(guān)免疫反應(yīng)[32]CASP3與細(xì)胞的自噬和凋亡有關(guān)，CASP3等蛋白表達(dá)水平上調(diào)后可能激活外源性Caspase依賴信號通路，增強(qiáng)癌細(xì)胞的自噬作用[33-35]。

本研究GO功能顯示，瓜萎薤白半夏湯“異病同治\"CMVD和HLP涉及的BP主要包括對UV-A的反應(yīng)、化學(xué)信號對心臟收縮力的調(diào)節(jié)、平滑肌增生、氮利用調(diào)控和脂肪酸代謝過程的正向調(diào)節(jié)等；KEGG富集通路主要涉及癌癥信號通路、AGE-RAGE信號通路在糖尿病并發(fā)癥中的作用、血流剪切力調(diào)控動脈粥樣硬化信號通路、腫瘤壞死因子信號通路、脂質(zhì)與動脈粥樣硬化信號通路和HIF-1信號通路等。AGE-RAGE相互作用可破壞微血管內(nèi)皮細(xì)胞[3]，通過激活巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)[37]。血流剪切力調(diào)控動脈粥樣硬化信號通路在斑塊形成過程中，低剪切力和振蕩剪切力認(rèn)為可致動脈粥樣硬化，高剪切力是受動脈粥樣硬化保護(hù)的[38]。HIF-1信號通路在心肌梗死過程中發(fā)揮著重要作用，由于心臟消耗大量氧以產(chǎn)生泵血所需的能量，可維持氧的內(nèi)穩(wěn)態(tài)，這種內(nèi)穩(wěn)態(tài)的破壞導(dǎo)致心血管疾病，心肌梗死的嚙齒動物模型中，心肌細(xì)胞中HIF-1α過表達(dá)通過增加血管密度，減小梗死面積，改善心臟功能[9]，心肌細(xì)胞中的HIF-1α可直接抑制缺血時(shí)心肌細(xì)胞死亡。根據(jù)動脈粥樣硬化的反應(yīng)-滯留模型，含載脂蛋白B的脂蛋白顆粒在內(nèi)膜下動脈壁沉積引起復(fù)雜的、適應(yīng)不良的炎癥過程，導(dǎo)致動脈粥樣硬化發(fā)生[40]。隨著時(shí)間的推移，額外的脂蛋白顆粒保留在動脈壁中，新生粥樣硬化逐漸擴(kuò)大，導(dǎo)致面積越大，形成復(fù)雜的動脈粥樣硬化斑塊。

綜上所述，瓜萎白半夏湯可能通過豆甾醇、槲皮素、黃芩昔、柚皮素等有效活性成分作用于AGE-RAGE信號通路在糖尿病并發(fā)癥中的作用、血流剪切力調(diào)控動脈粥樣硬化信號通路、腫瘤壞死因子信號通路、動脈粥樣硬化信號通路和HIF-1信號通路等相關(guān)多條通路，發(fā)揮炎癥抑制、引起相關(guān)免疫反應(yīng)、抗氧化反應(yīng)、參與血管炎癥反應(yīng)、細(xì)胞新陳代謝等作用，進(jìn)而治療CMVD及HLP。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)初步探討了瓜萎薤白半夏湯的作用機(jī)制，不僅篩選出瓜萎薤白半夏湯中有治療CMVD和HLP潛力的活性化合物，還提供作用靶點(diǎn)及相關(guān)通路信息，通過分子對接驗(yàn)證，從網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接的角度驗(yàn)證了中醫(yī)學(xué)“異病同治”，以期為臨床中醫(yī)藥治療相關(guān)疾病提供理論支持依據(jù)，也為今后的研究提供參考。

參考文獻(xiàn)：

[1］張運(yùn)，陳韻岱，傅向華，等.冠狀動脈微血管疾病診斷和治療的中 國專家共識[J].中國循環(huán)雜志，2017，32（5）：421-430.

[2]陳佳萍，李享，劉紅旭，等.中醫(yī)藥治療冠狀動脈微血管疾病證治 規(guī)律及作用機(jī)制研究[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22 （6）：961-970. [3］王宇卿，水棟，王曉瑜.基于HepG2細(xì)胞及斑馬魚模型的瓜萎薤 白類方抗高脂血癥藥理作用比較研究[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志， 2022，42（5）：495-500.

[4]楊靜靜，張敬華.從“濁\"論治“脂腦同病\"[J].山西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué) 報(bào)，2024，25（5）：559-562;576.

[5]WANG H H，GARRUTI G，LIU M，et al.Cholesterol lipoprotein metabolism atherosclerosis：recent advancesin reverse cholesterol transport[J].AnnalsHepatology，2017，16：7-42.

[6]周易，王鳳榮，王帥，等.基于“濁氣歸心，淫精于脈\"理論探析脂 質(zhì)穩(wěn)態(tài)與泛血管疾病關(guān)系[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2024，35（3）： 680-682.

[7]JIEF，YANG X，YANGB W，etal.Stigmasterol attenuates inflammatoryresponse microgliavia NF- kB NLRP3 signaling by AMPK activation[J].Biomedicine amp; Pharmacotherapy， 2022，153：113317.

[8]FENGSM，DAIZQ，LIUAB，etal.Intakestigmasterol β -sitosterol alters lipidmetabolism alleviatesNAFLDin mice feda high-fat westerm-style diet[J].Biochimicaet Biophysica Acta（BBA）-Molecular Cell Biology Lipids，2018，1863（10）： 1274-1284.

[9]KLEEMANNR，VERSCHURENL，MORRISONM，etal.Antiinflammatory，anti-proliferativeanti-atheroscleroticefects quercetin in human in vitro in vivo models[J].Atherosclerosis， 2011，218（1）：44-52.

[10]LI C，ZHANG W J，F(xiàn)REI B.Quercetin inhibits LPS-induced adhesionmoleculeexpressionoxidant production in human aorticendothelial celsby p38-mediated Nrf2 activation antioxidant enzyme induction[J].Redox Biology，2016，9：104-113.

[11]LI H X，XIAOL，HE H，etal.Quercetin attenuatesatherosclerotic inflammation by inhibiting galectin-3-NLRP3 signaling pathway[J]. Molecular Nutritionamp; Food Research，2021，65（15）：e2000746.

[12]NIEJ，ZHANGL，ZHAOG，et al.Quercetinreducesatherosclerotic lesionsbyaltering the gutmicrobiota reducing atherogenic lipid metabolites[J].Journal AppliedMicrobiology，2019，127（6）： 1824-1834.

[13]GARELNABI M，MAHINI H，WILSON T.Quercetin intake with exercisemodulateslipoproteinmetabolismreduces atherosclerosis plaque formation[J].Journal the International SocietySportsNutrition，2014，11：22.

[14]CHANG YC，LEE TS，CHIANG A N.Quercetin enhances ABCA1 expression cholesterol efflux through a p38-dependent pathway inmacrophages[J].Joumal Lipid Research，2012，53 （9）：1840-1850.

[15]LU X L，ZHAO C H，YAO X L，et al Quercetin atenuates high fructose feeding-induced atherosclerosis by suppressing inflammation apoptosis via ROS-regulated Pl3K/AKT signaling pathway[J]. Biomedicine amp; Pharmacotherapy，2017，85：658-671.

[16]Deepika，MAURYA P K.Health benefits quercetin in age-related diseases[J].Molecules，2022，27（8）：2498.

[17]LIUB Y，LI L，LIU GL，et al. Baicalein attenuates cardiac hypertrophy inmicevia suppressing oxidative stress activating autophagy incardiomyocytes[J].Acta Pharmacologica Sinica， 2021，42（5）：701-714.

[18]HUANG Y，TSANG S Y，YAO X Q，et al.Biological properties baicaleinincardiovascular system[J].Current Drug Targets Cardiovascularamp; HaematologicalDisorders，20o5，5（2）：177-184.

[19]WU Y H，CHUANGLP，YU CL，et al.Anticoagulant effect wogoninagainst tissuefactorexpression[J].EuropeanJournal Pharmacology，2019，859：172517.

[20]RAHIMI V B，ASKARI V R，HOSSEINZADEH H.Promising influences Scutellriabaicalensis its twoactive constituents， baicalin， baicalein，against metabolic syndrome：a review[J]. Phytotherapy Research，2021，35（7）：3558-3574.

[21]WANGQY，OUYJ，HUGM，etal.Naringeninattenuatesnonalcoholic fatty liver diseaseby down-regulating the NLRP3/NF-κB pathway inmiceJ].BritishJoumalPharmacology02，77（8）： 1806-1821.

[22]PADMANABHAN M，STANELY MAINZEN PRINCE P. Salylcysteine amelioratesisoproterenol-induced cardiactoxicityin ratsby stabilizing cardiac mitochondrial lysosomal enzymes [J].Life Sciences，2007，80（10）：972-978.

[23]MENG L M，MA H J，GUO H，et al.The cardioprotective effect naringenin against ischemia-reperfusion injury through activation ATP-sensitive potassium channel in rat[J].Canadian Joumal Physiology Pharmacology，2016，94（9）：973-978.

[24]MOGHADDAM R H，SAMIMI Z，MORADI S Z，et al.Naringenin naringin in cardiovascular disease prevention：a preclinical review[J].European Journal Pharmacology，2020，887：173535.

[25]NICHOLSON K M，ANDERSON N G.The protein kinase B/Akt signaling pathway in human malignancy[J].Cellular Signaling， 2002，14（5）：381-395.

[26］李艷偉，崔巍，李玉強(qiáng)，等.IncRNA GAS5與JAK1/STAT3信號通 路對大鼠心肌細(xì)胞缺氧損傷影響[J].錦州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2022， 43（4）：26-32.

[27]CHENDD，LI Z，BAO PQ，et al.Nrf2 deficiency aggravates Angiotensin I-induced cardiac injury by increasing hypertrophy enhancing IL-6/STAT3-dependent inflammation[J].Biochimicaet BiophysicaActa（BBA）-Molecular Basis Disease，2019，1865（6）： 1253-1264.

[28]GALEA J，ARMSTRONG J，GADSDON P，et al. Interleukin-1β in coronary arteries patients with ischemic heart disease[J]. Arteriosclerosis，Thrombosis， VascularBiology，1996，16（8）： 1000-1006.

[29]PAN Q H，HUID，HU C X.A variant IL1B is associated with the riskbloodlipid levelsmyocardial infarctionineastern Chinese individuals[J].Immunological Investigations，2022，51（5）： 1162-1169.

[30]EVERETTBM，MACFADYENJG，THURENT，et al.Inhibition interleukin-1βreductioninatherothromboticcardiovascular eventsintheCANTOStrial[J].Journal theAmericanCollege Cardiology，2020，76（14）：1660-1670.

[31]PARATHATH S，MICKSL，F(xiàn)EIG JE，etal.Hypoxia is present in murineatherosclerotic plaques hasmultipleadverse effectson macrophage lipid metabolism[J].Circulation Research，2011，109 （10）：1141-1152.

[32]WANG YP，GAO WQ，SHI XY，et al.Chemotherapy drugs induce pyroptosis through caspase-3cleavage a gasdermin[J].Nature， 2017，547（7661）：99-103.

[33]JING W，SONG N，LIUYP，et al.DNMT3a promotes proliferation byactivating the STAT3 signalingpathway depressing apoptosisin pancreatic cancer[J].Cancer Management Research，2019，11：6379-6396.

[34]IMRAN M，ASLAM GONDAL T，ATIF M，et al.Apigenin as an anticancer agent [J].Phytotherapy Research，2020，34（8）：1812- 1828.

[35]LIU XF，ZHOU Q，HASSAN R，et alPanbinostat decreases cFLIP enhances killng cancer cells by immunotoxin LMB-100 by stimulating the extrinsic apoptotic pathway[J].Oncotarget，2017，8 （50）：87307-87316.

[36]GUPTA A，TRIPATHI A K，TRIPATHI R L，et al.Advanced glycosylatedend products-mediated activation polymorphonuclear neutrophils in diabetes melitus associated oxidative stress[J]. Indian Journal Biochemistry amp; Biophysics，2007，44（5）：373-378.

[37]BYUN K，YOO Y，SON M， et al.Advanced glycation end-products produced systemically bymacrophages：a common contributor to inflammation degenerative diseases[J].Pharmacologyamp; Therapeutics，2017，177：44-55.

[38]MALEK A M，ALPER SL，IZUMO S.Hemodynamic shear stress its role inatherosclerosis[J].JAMA，1999，282（21） ：2035-2042.

[39]KIDO M，DULL，SULLIVAN C C，et al.Hypoxia-inducible factor1- alphareduces infarction attenuates progression cardiac dysfunction aftermyocardial infarction in the mouse[J].Joumal the American College Cardiology，2005，46（11）：2116-2124.

[40]GOLDSTEIN J L，BROWN M S.A century cholesterol coronaries：from plaques to genes tostatins[J].Cell，2015，161（1）： 161-172. 信口如

（本文編輯 薛妮）