采收成熟度對烤煙上部葉品質形成機制的影響

中圖分類號：S572.04 文獻標志碼：A 文章編號：1002-1302（2025）11-0179-10

成熟度是烤煙國標中的第一品質要素，煙葉的成熟度分為采收成熟度、分級成熟度和復烤成熟度等，其中最重要的是形成煙葉“色、香、味”基礎的田間成熟度[1]。田間成熟采收是獲得優(yōu)質煙葉的前提和基礎。煙葉的成熟過程也是其衰老的過程，伴隨著生理、信號轉導、轉錄因子和激素等方面的變化，引發(fā)多種基因表達的相互作用變化。劉芳等研究了不同成熟階段烤煙萜類化合物含量及相關基因表達情況，以探明中煙100的適宜采收期2；范寧波等對不同成熟期烤煙主脈中活性氧物質含量和衰老相關基因NtCP1、NtCP2的表達水平進行了比較，從葉脈角度探討了煙葉成熟衰老的機制[3]。此外，調控乙烯、脫落酸（ABA）和茉莉酸合成的NtEFE26NtNCED1和NtPR1b也被驗證參與煙葉的衰老進程[4]?？緹煹纳喜咳~包括頂葉和上二棚在內，通常由5＼～6張葉片組成，在煙葉生產中具有重要地位，優(yōu)質的上部葉是生產高檔卷煙的重要原料[5]。云煙87是我國各大煙區(qū)主栽品種之一，具有優(yōu)質、穩(wěn)產、易烘烤、抗逆強等特點。然而，在采收時由于受氣候或人為因素的影響，其上部葉常存在因成熟度不足而導致化學成分不協(xié)調、刺激性大、香氣量不足等問題。因此，研究適宜成熟度對云煙87上部葉品質的提升具有重要意義。目前，針對云煙87不同成熟度上部葉鮮煙葉素質、烤后質量和烘烤工藝等方面的研究較多[6-7]，而有關煙葉成熟的機理研究較少。因此，本研究通過生理生化技術和轉錄組技術探究不同采收成熟度下云煙87上部葉內在化學成分和基因表達的變化，結合超微結構的變化特征開展對比分析，以期確定適宜的采收成熟度，進而為提高云煙87上部煙葉可用性及深人研究煙葉成熟的分子機制提供參考。

1材料與方法

1.1栽培管理

田間試驗于2022年在云南省大理白族自治州祥云縣煙區(qū) （25^°47^′N，100^°48^′E） 進行，供試品種為云煙87，煙株一摘除3張腳葉，留葉數(shù)20張。試驗田地勢平坦，灌排方便，土壤為紅壤沙壤土，行株距 120cm×55cm ，四周栽種保護行，試驗田面積為6670m² ，栽培管理按照當?shù)貎?yōu)質煙葉栽培規(guī)范進行實施。

1.2 試驗設計

采用隨機區(qū)組設計，小區(qū)面積為 330m² ，分別在煙葉欠熟（QS）、適熟（SS）、過熟（GS）階段采收，采收時按照表1的鮮煙葉外觀特征，選取打頂后煙株上部葉第17葉位葉片。每個處理3次重復，一次性采收并進行標記后編竿烘烤。

1.3 測定指標及方法

1.3.1農藝性狀在煙葉欠熟（QS）適熟（SS）和過熟期（GS）分別選取每個處理中具有代表性的3株煙株，按照《煙草農藝性狀調查方法》（YC/T142—2010）[8]測定煙株的農藝性狀。

1.3.2葉片葉綠體超微結構選取上部葉第17葉位、位于右側第7、8支脈之間的葉片，將距離主脈3～5cm 處的葉肉組織（約 5mm×5mm ）手工切片，并在 4°C 下保存在 2.5% 戊二醛緩沖溶液（pH值 =7.4 ）中固定，使用注射器抽出固定瓶中的空氣，使葉片沉底或懸浮在溶液中。再用磷酸緩沖液（ ΔpH 值 =7.2 洗滌3次，將樣品在 4‰ 的 1% 俄酸中固定，然后將樣品不同梯度乙醇脫水，隨后用環(huán)氧樹脂包埋劑（Epon812）包埋樣品，用超薄切片機（LeicaUC7，德國）切片，并收集用于微觀結構分析，最后用 3% 醋酸和 2.7% 檸檬酸鉛復染，使用透射電鏡（JEM-1011，日本）觀察樣品。

1.3.3煙葉品質測定外觀質量分析：參考《烤煙》（GB2635—1992）中烤煙分級標準對烤煙外觀質量指標進行評價?？竞鬅熑~物理特性檢測：用平衡水分稱重法[10]測單葉重;用稱重法[0]測定含梗率;參照郭建華等的方法[測定拉力;打孔鋁盒稱重法測定葉質重?；瘜W成分檢測：參照張建平等的方法[12]，利用傅里葉變換近紅外光譜儀（MPA，德國Bruker公司）測定煙葉化學成分含量。參照《煙草及煙草制品多酚類化合物綠原酸、茛蓉亭和蕓香苷的測定》（YC/T202—2006）測定煙草多酚類化合物含量。采用氣相色譜質譜聯(lián)用儀（GC/MS）（鉑金埃爾默股份有限公司）13測定煙葉有機酸含量。參照過偉民等的方法[14]測定煙葉氨基酸含量，參照王寶林等的方法[15-16]測定煙葉 Amadori化合物含量。

感官評吸：采用《烤煙》（GB2635—1992），將每個樣品卷制成標準規(guī)格煙支（長 84.0mm 、圓周長24.2mm ），經過挑選、平衡水分后，由專業(yè)評吸人員評吸。

1.3.4轉錄組學取樣與測序在欠熟、適熟和過熟3個時期各選擇3株煙的第17葉位，剪取第7、8支脈之間的葉片組織，并混為1個樣本，設置3次重復，用于RNA提取。收集后的葉片用錫箔紙包裹后迅速置于液氮中速凍， -80°C 保存?zhèn)溆谩?/p>

使用TRIzol試劑[英濰捷基（上海）貿易有限公司]提取煙葉總RNA，再使用分光光度計測量260nm/280nm 和 260nm/230nm 處的相對吸光度，確定RNA樣品的質量和數(shù)量。RNA-Seq測序采用北京諾禾致源生物科技股份有限公司使用Illumina HiSeqTM 2000 測序平臺進行。去除低質量序列讀取（reads），得到高質量的潔凈數(shù)據(jù)（cleandata）。使用HISAT2軟件將原始數(shù)據(jù)過濾后的序列讀取數(shù)（cleanreads）映射到公開發(fā)表的煙草參考基因組上。利用HTSEQ－count軟件獲得每個基因的讀取計數(shù)（readcounts），基因表達水平使用Cufflinks軟件計算每1000堿基轉錄本每100萬比對度數(shù)片段數(shù)（FPKM值）。利用DESeq2軟件，以 |log₂FC （變化倍數(shù)） I?I 且 P_adj （校正后的顯著性概率） ?0.05 作為判斷差異基因表達顯著性的閾值。通過ClusterProfiler3.8.1實現(xiàn)表達基因的GO富集分析和KEGG通路中差異表達基因的統(tǒng)計富集。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

利用MicrosoftExcel201O和IBMSPSSStatistics27.0對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，采用最小顯著差數(shù)（LSD）法分析數(shù)據(jù)間的顯著性，利用Origin2018和AdobeIllustrator2021進行作圖。

2 結果與分析

2.1不同采收成熟度煙株的田間農藝性狀隨著成熟度的增加，煙株的株高、莖圍、最大葉

長、最大葉寬和葉面積都呈逐漸增加的趨勢，且欠熟處理與過熟處理差異顯著，可見提高成熟度有利于煙株進一步生長（表2）。

2.2烤后煙葉質量評價

2.2.1外觀質量隨著成熟度的增加，上部葉的葉片結構身份逐漸變薄，油分較足且差異較小，適熟葉片組織結構疏松，欠熟與過熟煙葉結構尚疏松，適熟與過熟煙葉色度強，欠熟煙葉稍帶青?？梢?，適熟采收處理上部葉外觀質量更佳（表3）。

2.2.2物理性狀由表4可知，煙葉過熟采烤后葉長、葉寬最大，適熟葉片的單葉重、葉片厚度和拉力較大，但與其他處理均無顯著差異（ Pgt;0.05 ），葉質重隨著成熟度的增大而降低。

2.2.3化學成分由表5可知，隨著采收成熟度的提高，淀粉含量先增加后減少，且差異顯著（ Plt; 0.05）；適熟采烤葉片總糖、還原糖含量較高，總氮、煙堿含量處于適宜范圍[15]，且糖堿比顯著大于其他處理，可見適熟采烤葉片有利于提高煙葉的香氣質與香氣量;適熟與過熟處理的鉀氯比均大于4，說明其燃燒性較好。綜合來看，適熟采收葉片的化學成分較均衡。

由表6可知，隨著采收成熟度的提高，葉片中的綠原酸、蘋果酸和乙二酸含量先升高后降低，且差異顯著；亞油酸、油酸 + 亞麻酸含量也是先升高后降低；檸檬酸含量逐漸升高。各采收成熟度處理之間蕓香昔與茛蓉亭含量無顯著差異。

由表7可知，不同處理游離氨基酸含量以脯氨酸含量最高，且各處理之間無顯著差異（ Pgt;0.05） ;各處理之間賴氨酸、纈氨酸和精氨酸含量差異顯著?？傮w來看，適熟葉片游離氨基酸含量最低，脯氨酸含量較高，堿性氨基酸含量較低，可見適熟采收煙葉有利于提高煙葉香氣品質。

由表8可知，不同處理以適熟和過熟葉片的Amadori化合物含量較多，其中1-脫氧-1-L-氨基丁酸 -D- 果糖、1-脫氧-1-L-脯氨酸-D-果糖、1-脫氧-1-L-氨酸-D-果糖等含量顯著大于欠熟葉片（ ?Plt;0.05） ，這可能是由于適熟和過熟葉片中與Amadori化合物合成相關的氨基酸轉化較多。2.2.4感官質量從結果來看，適熟處理煙葉的感官品質綜合評價表現(xiàn)相對較好（表9）。

2.3不同采收成熟度煙葉的透射電鏡分析

欠熟葉片（圖1-I、圖1-V）中，葉綠體結構完整且沿質膜邊緣緊密排列，淀粉粒、嗜鋨顆粒、基粒片層和基質片層被完整包裹在葉綠體被膜中，葉綠體中所含淀粉粒較少，基粒片層結構較規(guī)則、清晰，且與基質片層區(qū)分明顯。適熟葉片（圖1－Ⅱ、圖1-V）較欠熟葉片，嗜俄顆粒數(shù)增加，葉綠體體積增大，淀粉顆粒數(shù)目增多，體積膨大，此時淀粉粒積累最多，基粒片層和基質片層雖然可以觀察到，但是淀粉粒的擠壓導致片層結構變得疏松、不清晰，形狀也變?yōu)殚L條形，少數(shù)葉綠體膜破裂。過熟葉片（圖1-Ⅲ、圖1-VI）葉綠體呈不規(guī)則形狀，淀粉顆粒與嗜俄顆粒占據(jù)了絕大部分面積，淀粉粒也開始發(fā)生降解，基粒片層被擠壓成線形且不清晰，基質片層幾乎不可見，部分葉綠體被膜破損。

2.4不同采收成熟度煙葉的差異表達基因及信號通路分析

2.4.1測序質量分析由表10可知，所有樣本的Q20、Q30、GC的含量分別在 97%93%42% 以上，說明樣本質量較好，可用于后續(xù)分析。

注：rawreads表示原始數(shù)據(jù)中的reads數(shù);Q20含量表示Phred數(shù)值大于20的堿基占總堿基的百分比；Q30含量表示Phred數(shù)值大于30的堿基占總堿基的百分比；GC含量表示cleanreads中G與C占4種堿基的百分比。

2.4.2表達量差異分析及基因集篩選由圖2可知，隨著葉片進入衰老階段，差異表達基因的數(shù)量先增加后減少，適熟葉片較欠熟葉片有4244個下調基因，而過熟葉片較適熟葉片下調3525個基因，3個處理共有的差異表達基因有3423個，說明部分基因的表達在衰老過程中會發(fā)生變化，且有一部分基因持續(xù)參與了葉片的衰老應答過程。

2.4.3差異表達基因GO分析對欠熟、適熟和過熟煙葉的差異表達基因進行GO功能注釋。在細胞組分方面，QSvsSS的差異表達基因主要富集在植物細胞皮層（cellcortex）和細胞質（cytoplasmicregion）條目，GSvsSS差異表達基因主要富集在光系統(tǒng)I反應中心（photosystemI reactioncenter）。在分子功能方面，QSvsSS和GSvsSS中差異表達基因主要富集到鐵離子結合（ironionbinding）和氧化還原酶的活性（oxidoreductaseactivity）等條目（圖3）。2.4.4 KEGG富集分析對QS vs SS 和GSvs SS的差異表達基因進行KEGG功能注釋，圖4－A和4-B為富集最顯著的20條通路，QSvsSS中的差異表達基因主要富集在MAPK信號通路（MAPKsignalingpathway），氮代謝（nitrogenmetabolism），酪氨酸（tyrosinemetabolism）丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸代謝（alanine，aspartateand glutamate metabolism）和光合作用－天線蛋白（photosynthesis－antennaproteins）等途徑。GSvs SS中的差異表達基因主要富集在光合作用－天線蛋白（photosynthesis-antenna proteins）、MAPK信號通路（MAPK signalingpathway）和苯丙烷生物合成（phenylpropanoidbiosynthesis）途徑。

2.4.5乙烯合成和信號轉導途徑相關差異基因表

2.4.6光合天線蛋白途徑相關差異基因表達水平的比較葉綠素是植物進行光合作用的主要色素，植物中的葉綠素含量與Lhcb基因家族密切相關。本研究基于KEGG基因庫篩選到不同比較組在光合天線蛋白中PSII的差異顯著基因數(shù)（DEG）（圖6），與欠熟葉片相比，適熟葉片中有12個Lhcb1基因下調表達，3個Lhcb2基因上調表達；過熟相較于適熟處理，有12個Lhcb1和1個Lhcb2基因下調表達。Lhcb1與Lhcb2參與葉綠素a-b結合蛋白的合成，這些基因的下調表達可能會影響類囊體基粒的堆疊以及煙草在成熟過程中顏色的變化。

3結論與討論

煙葉成熟度是其產量和品質形成的中心要素。田間農藝性狀測定結果表明，提高煙葉田間成熟度有利于增加葉面積，從而提高產量。觀察烘烤后煙葉外觀質量，欠熟采烤的煙葉顏色呈橘黃或檸檬黃，葉片結構尚疏松，身份稍厚，煙葉的生產潛力尚未充分挖掘；過熟采烤的煙葉身份稍薄，品質也有所下降，這與鄧云龍等的研究結果[18-19]一致。因此，適熟采收有利于提高煙葉的外觀質量，并能提高煙葉的感官品質，這與韓富根等的研究結果[20 -21]一致。

3.1不同采收成熟度烤后煙葉質量評價

煙葉成熟度對煙葉的物理特性、化學成分、產品風格以及可加工性有著重要的影響。趙銘欽等研究發(fā)現(xiàn)，適熟采收煙葉的物理特性優(yōu)于欠熟或過熟煙葉[22]。隨著采收成熟度的增加，烤煙的葉厚和單葉重先增加后減少，這可能是煙葉內的干物質積累量在適熟期達到最大值，隨后由于淀粉等物質分解，葉片變薄。拉力在一定程度上能夠反映煙葉的抗張強度，煙葉能承受的拉力越大，說明其彈性越好，抗張強度也越高[23]，因此適熟采收煙葉彈性最好。

本研究結果證實，適熟和過熟處理烤煙中的兩糖比接近0.8，接近最佳值[24]。3個處理總氮與煙堿含量均處在適宜范圍[25]，欠熟與適熟處理煙葉鉀氯比 gt;4 ，抽吸燃燒性較好。煙葉中綠原酸、蕓香苷等多酚物質在燃吸時能夠產生酸性反應，中和部分堿性物質使吃味醇和。綠原酸通常是煙葉中含量最高的多酚，不同處理以適熟采收葉片綠原酸含量最高，且顯著大于其他處理；茛榮亭與蕓香苷含量無顯著差異。非揮發(fā)性有機酸主要起調節(jié)游離煙堿比例、pH值等，平衡煙氣的作用[26]。一般認為，蘋果酸含量較高、檸檬酸含量較低的煙葉品質較好。本研究不同處理以適熟煙葉蘋果酸含量最高，且欠熟與適熟處理檸檬酸含量顯著低于過熟處理。

氨基酸和還原糖能縮合形成Amadori化合物，而Amadori化合物是美拉德反應中的重要香氣前體，其在燃吸時裂解可以產生醛酮類、吡咯類、吡嗪類和呋喃酮等煙草香味成分[27]。本研究適熟與過熟采收烤后煙葉的1-脫氧-1-L-谷氨酸-D-果糖、1-脫氧-1-L-脯氨酸-D-果糖、1-脫氧-1-L-氨酸-D-果糖等大部分Amadori化合物含量大于欠熟采收葉片，但適熟葉片中與Amadori化合物合成有關的游離氨基酸含量較低，這可能是由于烘烤過程中合成了其他致香物質[28]。有研究發(fā)現(xiàn)，提高脯氨酸并減少其他氨基酸特別是游離氨基酸中堿性氨基酸的占比對煙葉的顏色、油分等外觀質量和香氣、口感等感官評吸品質較好[29-30]。本研究3個處理脯氨酸含量無顯著差異，但適熟處理的堿性氨基酸如賴氨酸、精氨酸和組氨酸含量最低，脯氨酸含量相對較高。由于煙草香氣物質由上千種化合物組成，煙草生產追求化學物質協(xié)調，最終才能獲得較高的感官評吸品質[31]。因此，適熟采收在正常生長條件下最利于煙葉內在品質的提升。

3.2不同采收成熟度鮮煙葉超微結構變化

葉綠體不僅是煙葉進行光合作用的中心，也是煙葉光合產物合成和儲存的主要場所，并與煙葉生長發(fā)育和烤煙內在品質的形成密切相關[32]。隨著采收葉片成熟度提高，葉綠體基粒片層結構逐漸解體是植物細胞進入衰老期后最早且最明顯的現(xiàn)象[33]，之后葉綠體結構從完整到逐漸發(fā)生破損，基粒片層結構由緊密變得疏松，垛疊程度越來越小，逐漸變?yōu)闂l狀且紊亂無序，過熟時期變得幾乎不可見。隨著煙葉進一步發(fā)育，淀粉含量逐漸增加，在適熟期達到最高，隨后開始降低，嗜俄顆粒數(shù)在適熟與過熟階段無明顯增加。嗜俄顆粒是由俄酸與類囊體膜分解后形成的脂質結合物，其主要成分是親脂性的醌類物質，在形成煙葉的香氣和油分過程中發(fā)揮重要作用[34]。當煙葉處于適熟階段時，葉綠體基粒片層數(shù)減少，淀粉粒和嗜俄顆粒充實細胞內部，有利于提高煙葉的產質量[35]

3.3不同采收成熟度煙葉差異基因的GO分析

GO分析結果表明，QSvsSS的差異表達基因主要富集在細胞皮層和細胞質相關的細胞部分，這可能與葉片衰老進程中細胞壁與細胞內物質狀態(tài)的變化有關。GSvsSS中差異表達基因主要富集在光系統(tǒng)I反應中心的細胞組分，這可能與葉片衰老伴隨著光系統(tǒng)I活性的下降有關[36]，從而影響葉片的光合作用。此外，2個比較組的差異表達基因還同時富集在氧化還原酶活性分子功能條目，這可能是由于在葉片衰老進程中細胞內會產生活性氧，而抗氧化酶在清除這些活性氧過程中發(fā)揮了重要作用。

3.4不同采收成熟度煙葉差異基因的KEGG分析

KEGG分析結果表明，QSvsSS的差異表達基因主要富集在氮代謝等途徑。已有研究表明，煙葉在衰老過程中會發(fā)生氮素的再分配和再利用，使得氮代謝產物總氮、蛋白質、氨基酸和生物堿含量發(fā)生變化[37]，與結果中指標變化特征相符。GS vs SS的差異表達基因主要富集在光合作用等途徑，推測受葉綠體降解等因素的影響，葉片光合作用受到影響。在適熟與過熟葉片中，苯丙烷生物合成途徑也發(fā)生了顯著變化，表明苯丙烷類生物代謝途徑中產生次生代謝產物與煙葉成熟過程密切相關。

乙烯作為一種氣態(tài)植物激素，在調節(jié)種子發(fā)芽、果實成熟、葉片衰老和生物防御中有著重要作用[38]。ACS是乙烯生物合成的重要限速酶，直接關系到植物體內的乙烯含量[39]。孫申申等認為，植物內源乙烯合成限速酶ACC合成酶（ACS）能夠調控花瓣的衰老[40]。本研究結果顯示，與欠熟煙葉相比，適熟葉片有7個乙烯合成基因均上調表達，這可能會加速乙烯的合成，刺激葉片成熟。乙烯受體ETR和CTR1在乙烯信號轉導途徑中起負調控作用[40]，下游的EIN3和ERF1/2起正調控作用[41]本研究結果與之相符，與欠熟葉片相比，適熟和過熟葉片負調控乙烯元件ETR和CTR1基因下調表達，正調控元件MPK6和EIN3基因上調表達，說明乙烯信號轉導通路被激活，從而促進葉片成熟。

LHCⅡ作為PSⅡ捕光色素蛋白復合體，由色素蛋白Lhcb1～6、CP43和CP47組成，并含有類囊體膜系統(tǒng)中 50% 的葉綠素[42]，在維持類囊體結構、葉片發(fā)育等功能方面發(fā)揮著重要作用。Lhcb1～6分別由Lhcb1～6基因編碼的蛋白與色素形成[43]，Andersson等研究發(fā)現(xiàn)，Lhcb1、Lhcb2蛋白在調節(jié)植物的光合作用中起著關鍵作用。當缺失Lhcb1和Lhcb2基因時，植物的葉綠素含量減少，使葉片呈現(xiàn)出淡綠色[44]。此外，有研究證明，在煙草中Lhcbl基因的組成性表達增加了基粒的高度[45]。Lhcbl ～ 2的組成性表達使得葉綠體的類囊體膜數(shù)量增加，基粒垛疊增加。本研究中欠熟葉片的Lhcb1～2基因較適熟葉片下調表達，過熟葉片的Lhcb1～2基因較適熟葉片也下調表達，這可能是因為Lhcb基因的轉錄水平在葉片成熟過程中不斷增加，但之后隨葉片衰老而逐漸降低有關4；結合葉片葉綠體超微結構，當葉片成熟后，隨著葉片的衰老，類囊體基粒片層逐漸降解，這可能與 LhcbI～Lhcb2 下調表達有關[47]

本研究結果表明，成熟度的提高有利于煙株進一步生長；適熟期采烤的煙葉結構疏松，有機物積累較好，化學成分較協(xié)調，葉片厚度適中，且評吸結果得分最高。在葉片成熟衰老過程中，煙葉細胞的葉綠體結構由完整到破裂，基粒片層由緊湊變?yōu)槭杷?，且其?shù)目減少；淀粉粒和嗜俄顆粒數(shù)增多，有利于烤后煙香氣物質的形成。本研究證實，不同成熟度采收能通過影響氮代謝，酪氨酸、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝等途徑，有助于上部葉香氣更加豐富協(xié)調，且乙烯的生物合成、信號轉導途徑以及PSⅡ中的色素蛋白參與了葉片的成熟衰老。

參考文獻：

[1]周冀衡，朱小平，王彥亭，等.煙草生理與生物化學[M]．合肥：中國科學技術大學出版社，1996.

[2]劉芳，宋笑龍，馬浩波，等.不同成熟度烤煙萜類物質含量及相關基因研究[J].中國煙草科學，2023，44（4）：79-86.

[3]范寧波，周俊學，江凱，等.不同成熟期烤煙主脈中膜脂過氧化及其與衰老相關基因的關系探究［J].中國農業(yè)科技導報，2021，23（3）：66-72.

[4]魏星，武云杰，闞洪贏，等.不同烤煙品種煙葉衰老特性與內源激素的關系[J]．煙草科技，2020，53（2）：1-7.

[5]劉扣珠，高真真，李建華，等．豫中烤煙上六片煙葉葉長與主要化學成分及感官質量關系[J]．中國煙草科學，2019，40（6）：75-82，88.

[6]劉化冰，尚曉穎，劉建國，等．成熟度、品種及其互作對烤煙多酚類物質的影響[J]．中國煙草科學，2019，40（4）：29-36.

[7]夏春，范寧波，王彬，等.成熟度對云煙87上部煙葉烘烤中失水特性的影響[J]．福建農林大學學報（自然科學版），2020，49（2） ：159 -166.

[8]煙草農藝性狀調查測量方法：YC/T142—2010［S].北京：國家煙草專賣局，2010.

[9]烤煙：GB 2635—1992[S]．北京：國家煙草專賣局，1992.

[10]郭建華，宋紀真，王廣山，等．基于主成分分析和聚類分析的煙葉物理特性區(qū)域歸類[J]．煙草科技，2014，47（8）：14-17.

[11]張建平，謝雯燕，束茹欣，等．煙草化學成分的近紅外快速定量分析研究[J]．煙草科技，1999，32（3）：37-38.

[12]金永明，張明福，劉百戰(zhàn).煙草中多元酸和高級脂肪酸的分析[J].煙草科技，2002，35（4）：21-24.

[13]過偉民，郭建華，董洪旭，等．烤煙游離氨基酸與感官品質的關聯(lián)及烘烤過程的變化規(guī)律研究［J].中國煙草學報，2018，24（6） ：16-25.

[14]王寶林，賈國濤，鄭文超，等．不同生態(tài)區(qū)域烤煙Amadori化合物含量與煙葉品質的關系分析[J]：煙草科技，2022，55（1）：33-40.

[15]招啟柏，王廣志，王宏武，等．烤煙煙堿含量與其他化學成分的相關關系及其閾值的研究[J]．中國煙草學報，2006，12（2）：26-28.

[16]徐磊，劉偉，過偉民，等．烤煙游離氨基酸組分與感官品質的相關分析[J].煙草科技，2020，53（10）：21-31.

[17]Colcombet J， HirtH.Arabidopsis MAPKs： acomplex signallngnetwork involved in multiple biological processes[J].BiochemicalJournal，2008，413（2） ：217-226.

[18]鄧云龍，崔國民，孔光輝，等.品種、部位和成熟度對煙葉淀粉含量及評吸質量的影響[J]．中國煙草科學，2006，27（4）：18-23.

[19]歐明毅，劉素參，馬坤.不同成熟度采收對濃香型烤煙上部煙葉產值及品質的影響[J].作物研究，2018，32（1）：42-46.

[20]韓富根，王校輝，張鳳俠，等.不同成熟度對延邊烤煙主要化學成分和香氣質量的影響[J]．河南農業(yè)大學學報，2009，43（1）：30-34.

[21]趙銘欽，于建春，程玉淵，等．烤煙煙葉成熟度與香氣質量的關系［J]．中國農業(yè)大學學報，2005，10（3）：10-14.

[22]趙銘欽，蘇長濤，姬小明，等．不同成熟度對烤后煙葉物理性狀、化學成分和中性香氣成分的影響[J]．華北農學報，2008，23（3）：146 -150.

[23]匡鵬飛，張洪霏，潘洪，等.不同加工成熟度對烤煙物理特性及化學特性的影響研究［J]．特產研究，2024，46（1）：72－76，80.

［24]陳江華，劉建利，龍懷玉．中國煙葉礦質營養(yǎng)及主要化學成分含量特征研究[J]：中國煙草學報，2004，10（5）：20-27.

[25］杜詠梅，郭承芳，張懷寶，等．水溶性糖、煙堿、總氮含量與烤煙吃味品質的關系研究［J」．中國煙草科學，2000，21（1）：7－10.

[26]周冀衡，楊虹琦，林桂華，等．不同烤煙產區(qū)煙葉中主要揮發(fā)性香氣物質的研究［J]．湖南農業(yè)大學學報（自然科學版），2004，30（1） ：20-23.

[27]毛多斌，李山，牟定榮，等.1-L-谷氨酸-1-脫氧-D-果糖的熱裂解分析研究[J]．中國煙草學報，2014，20（2）：18-29.

[28]聶榮邦，周建平．烤煙葉片成熟度與 α -氨基酸含量的關系[J]．湖南農學院學報，1994，20（1）：21-26.

[29]董洪旭，周蕓，黃善松，等.烤煙游離氨基酸區(qū)域性差異及其與外觀品質關系[J].西南農業(yè)學報，2017，30（4）：937-944.

[30]徐磊，劉偉，過偉民，等．烤煙游離氨基酸組分與感官品質的相關分析[J].煙草科技，2020，53（10）：21-31.

[31]胡建軍，周冀衡，李文偉，等.烤煙香味成分與其感官質量的典型相關分析[J]．煙草科技，2007，40（3）：9-15，22.

[32]王程棟，王樹聲，陳愛國，等．烤煙衰老過程中葉片超微結構及生理特性變化研究［J]．中國農學通報，2012，28（3）：103-109.

[33]陳剛，周清明，楊姣弟，等．采收方式和成熟度對上部煙葉細胞結構及品質的影響[J].中國煙草科學，2016，37（5）：34-39.

[34]夏春，李寒雪，孫覓，等.烤煙不同部位葉片超微結構與常規(guī)化學成分的關系［J]．湖南農業(yè)大學學報（自然科學版），2020，46（2） ：150-156.

[35]時向東，焦楓，范豪杰，等.烤煙葉片發(fā)育過程中柵欄細胞超微結構的變化[J]．煙草科技，2010，43（5）：46－47，49?50，54.

[36]Talla S K，Panigrahy M，Kappara S，et al. Cytokinin delays dark -induced senescence in rice by maintaining the chlorophyll cycle andphotosynthetic complexes[J]．Journal of Experimental Botany，2016，67（6） ：1839 -1851.

[37]楊永鋒，付劭怡，劉國順，等．烤煙葉片發(fā)育過程中不同含氮化合物的變化動態(tài)研究[J]．河南農業(yè)大學學報，2008，42（4）：380 -384.

[38]劉暢宇，陳勛，龍雨青，等.乙烯生物合成及信號轉導途徑中介導花衰老相關基因的研究進展[J]．生物技術通報，2019，35（3）：171-182.

[39]呂淑芳，江靜．擬南芥乙烯合成酶ACS 基因家族研究進展[J].生物技術通報，2014，30（11）：7-13.

[40]孫申申，溫秀萍，楊菲穎，等．‘云香’水仙ACC 合成酶基因NtACSI的克隆及遺傳轉化[J]．西北植物學報，2017，37（2）：250 -257.

[41]Clark K L，Larsen P B，Wang X，et al. Association of theArabidopsis CTR1 raf- like kinase with the ETR1 and ERSethylene receptors[J].Proceedings of the National AcademyofSciences of theUnited Statesof America，1998，95（9）：5401-5406.

[42] Yoo S D，Cho YH，Tena G，et al.Dual control of nuclear EIN3 bybifurcate MAPK cascadesin C2H4 signalling[J].Nature，2008，451（7180）：789-795.

[43]Zhao S，Gao HB，Luo JW，et al.Genome-wide analysis of the