阿司匹林聯合氟尿嘧啶對肝癌細胞增殖的抑制作用

盧雪如等

【摘要】 目的 體外實驗探討阿司匹林聯合氟尿嘧啶對肝癌細胞增殖的影響。方法 實驗分對照組、阿司匹林組、氟尿嘧啶組、聯合用藥組，各組分別以不同劑量藥物處理肝癌細胞48小時，CCK-8法檢測細胞抑制率，計算兩藥的聯合效應。結果 與對照組相比，阿司匹林單獨用藥可抑制肝癌細胞的增殖，呈劑量依賴關系（P<0.01）。與氟尿嘧啶組相比，聯合用藥組可提高對肝癌細胞增殖的抑制作用（P<0.01），呈現相加效應（0.85≤Q≤1.15）。結論 阿司匹林聯合氟尿嘧啶能提高對肝癌細胞增殖的抑制作用，具有相加效應。

【關鍵詞】 阿司匹林；氟尿嘧啶；肝癌細胞；細胞增殖

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.08.487 文章編號：1004-7484（2013）-08-4510-02

原發性肝癌是一種嚴重影響人類健康的惡性腫瘤，發病率和死亡率較高。我國是世界上肝癌高發區之一，發病率為20.37/10萬，位于常見腫瘤第三位[1]。氟尿嘧啶（fluorouracil，FU）是治療腫瘤、預防腫瘤復發以及腫瘤復發后化療最常用的藥物之一，以FU為基礎制定的化療方案在臨床上得到廣泛應用，但是，肝癌對FU具有一定的耐藥性，而且FU可以對機體的正常細胞產生嚴重的毒副作用[2]，大劑量使用FU可以引起腎功能損害及嚴重的胃腸道反應，從而限制了FU的臨床應用及療效的提高[3]。阿司匹林（acetysalicylic acid，ASA），又名乙酰水楊酸，是常用的非甾體類解熱、鎮痛藥和抗炎藥，對胃腸道腫瘤有抑制作用和預防作用[4]。長期服用阿司匹林能有效降低結腸癌等多種惡性腫瘤的發病率，表明其在腫瘤的防治中有廣泛的應用前景[5]。目前國內關于阿司匹林聯合氟尿嘧啶對肝癌細胞增殖的抑制作用研究未見報道。本研究旨在探討這兩種藥物聯合應用提高對肝癌細胞增殖的抑制作用，為臨床治療肝癌提供證據。

1 資料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司），DMEM（GIBCO，上海英駿生物有限公司），胰酶細胞消化液（Beyotime），CCK-8試劑盒（碧云天生物技術研究所），阿司匹林（南京都萊生物技術有限公司），氟尿嘧啶注射液（FU，25mg/mL，天津金耀氨基酸有限公司），用無血清培養液稀釋至2.5mg/mL備用。

1.1.2 儀器 多功能酶標儀（Biotek），倒置顯微鏡（OLYMPUS），CO2培養箱（RSBiotech），超凈工作臺（蘇凈集團蘇州安泰空氣技術有限公司）。

1.1.3 細胞株 人肝癌細胞株HepG2，由廣東醫學院衰老研究所提供。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養 將人肝癌細胞置于含10%小牛血清的DMEM培養液中，37℃，飽和濕度，5%CO2培養箱中培養。

1.2.2 阿司匹林和氟尿嘧啶處理肝癌細胞 實驗分為對照組、阿司匹林組、氟尿嘧啶組、聯合用藥組。阿司匹林組中4個劑量終濃度分別是0.5、1、2、4mmol/L。氟尿嘧啶組藥物終濃度是0.1mg/mL。聯合用藥組中氟尿嘧啶藥物終濃度均為0.1mg/mL，阿司匹林4個劑量終濃度分別是0.5、1、2、4mmol/L。取對數生長期細胞，每孔5000個細胞接種于96孔板，加入含10%小牛血清的DMEM培養液100μL培養，待細胞貼壁后加入藥物。實驗組每個劑量設5個復孔，每孔加入5μL相應濃度藥液。對照組加相等體積的無血清培養基。培養48h后檢測。

1.2.3 CCK-8法測定細胞抑制率 取1.2.2處理后的細胞，采用CCK-8法于450nm波長下測定光吸收值A450，計算細胞抑制率。細胞抑制率=（1-實驗組A450/對照組A450）×100%。

1.2.4 阿司匹林和氟尿嘧啶兩藥相加作用判斷 按金（正均）氏公式進行判斷[6]。金氏公式為Q=EA+B/（EA+EB-EAEB）。式中EA為阿司匹林單獨處理的細胞抑制率，EB為氟尿嘧啶單獨處理的細胞抑制率，EA+B為兩藥聯合處理的細胞抑制率：Q<0.85表示兩藥合用有拮抗作用；Q>1.15表示兩藥合用有協同作用；0.85≤Q≤1.15表示兩藥合用有相加作用。

1.2.5 數據處理 實驗數據以（χ±s）表示，采用SPSS18.0統計軟件進行統計分析，組間差異顯著性比較采用t檢驗，p<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 阿司匹林聯合氟尿嘧啶抑制肝癌細胞增殖 與對照組相比，不同濃度阿司匹林可抑制肝癌細胞的增殖，呈劑量依賴性，差異有統計學意義（P<0.01），見表1。與氟尿嘧啶組相比，阿司匹林聯合氟尿嘧啶可提高對肝癌細胞增殖的抑制作用（P<0.01），0.85≤Q≤1.15，兩藥聯用具有相加作用，見表2。

3 結 論

本研究表明，阿司匹林和氟尿嘧啶均可抑制體外肝癌細胞生長。不同濃度阿司匹林可抑制肝癌細胞的增殖，隨著藥物濃度的增加，抑制作用增強。阿司匹林與氟尿嘧啶聯合用藥可提高對肝癌細胞增殖的抑制作用，具有相加作用。阿司匹林和氟尿嘧啶均能抑制肝癌細胞生長，但兩種藥物的抗腫瘤機制不同。阿司匹林對腫瘤細胞的影響主要通過抑制環加氧酶-1（COX-1）及環加氧酶-2（COX-2）表達而起作用[7]。COX-l在許多組織均有表達，產生前列腺素從而保護胃黏膜及擴張腎血管。而COX-2過度表達可增加前列腺素E2的合成進而抑制機體的免疫功能，有利于腫瘤細胞的免疫逃逸，還能使自由基活性增加而引起突變，并能促進腫瘤血管生長等一系列促腫瘤作用[8]。氟尿嘧啶對腫瘤細胞的抑制主要是通過體內代謝產生的5-F-dUMP從而抑制DNA的合成[9]。阿司匹林聯合氟尿嘧啶抑制肝癌細胞的增殖可能與上述機制有關。聯合治療可使多種藥物獲得相加作用，產生最大的抑瘤效應，減少用藥量，降低不良反應。臨床上可通過阿司匹林和氟尿嘧啶聯合應用，提高抗癌療效。

參考文獻

[1] 王星剛，劉剛.原發性肝癌的綜合治療方法探討[J].基層醫學論壇，2007，11（15）：695-696.

[2] 陳忠南，徐克前.表觀遺傳學藥物FK228聯合氟尿嘧啶對肝癌細胞增殖、凋亡及Fas mRNA表達的影響[J].中南大學學報，2009，34（2）：124-129.

[3] 馮婷，劉霞，趙明耀等.牛膝多糖聯合5-氟尿嘧啶對食管癌的作用及相關機制的探討[J].重慶醫科大學學報，2011，36（5）：531-534.

[4] 王美榮，戚之琳.阿司匹林對SMMC-7721人肝癌細胞增殖的影響[J].皖南醫學院學報，2010，29（4）：243-245.

[5] Avivi D，Moshkowitz M，Detering E，et al.The role of lowdose aspirin in the prevention of colorectal cancerJ].Expert Opin Ther Targets，2012，16（Suppl 1）：51-62.

[6] 翟曉波，盧愛國.氟尿嘧啶和絲裂霉素聯合用藥體外藥敏試驗在大腸癌中的應用[J].中國現代應用藥學，2006，23（5）.

[7] 李淑芳.阿司匹林藥效學研究進展[J].中國民族民間醫藥，2012，（1）：31-33.

[8] 江平，劉志蘇.阿司匹林對肝癌細胞生長的抑制作用及其機制[J].中華實驗外科雜志，2008，25（11）：1391-1393.

[9] 韓玉霞.單吡啶基卟啉-5-氟尿嘧啶化合物的合成及抗癌活性的研究[D].河北省：河北師范大學，2009.