乳腺癌組織中Livin蛋白的表達及其與患者臨床病理特征和細胞增殖的關系

余劍文　池圣亮

[摘要] 目的 探討乳腺癌組織中Livin蛋白的表達及其與患者臨床病理特征和細胞增殖的關系。 方法 采用免疫組化S-P法檢測乳腺癌組織中Livin蛋白表達，并探討其與患者年齡、組織學分級、臨床分期和淋巴結轉移等臨床病理特征和細胞增殖的關系。另選擇20例癌旁正常組織和10例正常乳腺組織作對照。 結果 Livin蛋白在正常乳腺、癌旁正常組織及乳腺癌組織中的表達呈逐漸增高趨勢（χ2=18.28，P<0.01）。乳腺癌組織中Livin蛋白表達與臨床分期和淋巴結轉移密切相關（χ2=4.19和7.73，P<0.05或P<0.01）。Livin表達陰性乳腺癌組織中PCNA增殖指數明顯低于Livin表達陽性乳腺癌組織（t=2.37，P<0.05）。 結論 Livin蛋白在乳腺癌發生和發展不同階段的表達呈進行性上升趨勢，Livin蛋白在乳腺癌細胞的增殖、侵襲、轉移等活動中可起到促進作用，可作為預后評估的指標。

[關鍵詞] 乳腺癌；免疫組化；Livin蛋白；臨床病理特征；細胞增殖

[中圖分類號] R735.34 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）04-0095-03

近年來研究發現乳腺癌的發生發展過程是一個多基因、多階段的演進過程，與腫瘤細胞的過度增殖和凋亡密切相關[1]。Livin是一種新發現凋亡蛋白控制因子IPA 家族的新成員，能阻礙多種途徑誘導的細胞凋亡，在大多數正常成人組織中不表達或表達較弱，而在一些腫瘤組織中高表達[2，3]。Livin的抗腫瘤細胞凋亡作用特性及在腫瘤發病過程中的作用越來越被臨床重視，使其有望成為腫瘤診斷的新靶點[4]。本研究觀察了在乳腺癌組織中Livin蛋白的表達在其與患者的臨床病理特征和細胞增殖的關系?，F報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2008年1月～2013年5月我院普外科手術切除女性乳腺癌患者55例。所有患者均具有完整臨床資料且經術后病理證實，按TNM分期法分期：Ⅰ期18例、Ⅱ期22例和Ⅲ期15例，術前均未行放化療；年齡37～82歲，平均（57.4±7.9）歲。另選擇20例癌旁正常組織（距腫瘤邊緣>5cm）和10例正常乳腺組織作對照。

1.2 免疫組化染色

采用免疫組化S-P法。標本10%福爾馬林液固定，石蠟包埋，連續4μm切片，采用高溫修復抗原，正常血清封閉10min，傾去血清滴加Livin、PCNA-抗工作液4℃過夜，其余均參照說明書進行。采用DAB顯色，蘇木精襯染，脫水、透明、封片和鏡檢。以試劑公司提供的陽性切片作陽性對照，以PBS緩沖液代替一抗作陰性對照。Livin、PCNA蛋白單克隆抗體和免疫組化S-P試劑盒均由福州邁新生物公司提供。

1.3 觀察指標

1.3.1 免疫組化結果判定 結果以細胞漿內出現棕黃色顆粒為陽性細胞。隨機選取10個高倍視野，計數100個細胞，根據計數細胞染色強度計分，其中無著色為0分、淺黃色為1分、棕黃色為2分，棕褐色為3分；再根據染色陽性細胞百分比進行計分，其中（-）計為0分，陽性細胞的百分比≤10%計1分，陽性細胞的百分比11%～50%計2分，陽性細胞的百分比51%～75%計3分，陽性細胞的百分比>75%計4分。我們定義計數細胞染色強度計分和陽性細胞比例計分的乘積≥2分即為Livin蛋白表達（+），否則Livin蛋白表達（-）[5]。

1.3.2 增殖指數（PI） 采用高清晰度彩色圖文分析系統，選取10個高倍區域，計算1000個腫瘤細胞中PCNA陽性染色的細胞比例，即為增殖指數（PI）。

1.4 統計學處理

采用SPSS17.0統計軟件。計數資料采用相對數表示，用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Livin蛋白在正常乳腺組織、癌旁正常組織及乳腺癌組織中的表達差異

正常乳腺、癌旁正常組織及乳腺癌組織中Livin的陽性表達率分別為0%（0/10）、35.0%（7/20）和67.27%（37/55），Livin蛋白在正常乳腺、癌旁正常組織及乳腺癌組織中的表達呈逐漸增高趨勢（χ2=18.28，P<0.01）。

2.2 乳腺癌組織中Livin蛋白與臨床病理特征的關系

乳腺癌組織中Livin蛋白表達與臨床分期和淋巴結轉移等臨床病理特征密切相關（χ2=4.19和7.73，P<0.05或P<0.01），與年齡和組織學分級無關（χ2=0.43和2.17，P>0.05）。見表1。

2.3 乳腺癌組織中Livin的表達與細胞增殖的關系

Livin表達陰性的乳腺癌組織中PCNA的增殖指數為（37.27±13.67）%；Livin表達陽性的乳腺癌組織中PCNA的增殖指數為（57.26±17.36）%。Livin表達陰性的乳腺癌組織中PCNA的增殖指數明顯低于Livin表達陽性的乳腺癌組織（t=2.37，P<0.05）。

3討論

Livin是近年來新發現IAPs家族中的一種凋亡抑制基因，在多種腫瘤細胞中呈高表達，可引起腫瘤細胞對化療藥物抵抗而耐藥[6，7]。人Livin基因位于20號染色體q13.3，全長7.6kb，內有7個外顯子和6個內含子，含有BIR結構域和RING結構域，其中BIR的結構域是Livin的抗凋亡活性依賴點[8，9]。Livin基因主要通過其BIR結構域與Caspase家族成員結合，從而抑制Caspase活性，尤其是Caspase-3/-7和Caspase-9的活性，達到阻斷凋亡受體和以線粒體為核心的外源性及內源性細胞凋亡途徑來發揮抗凋亡作用，還可通過激活 TAK1/JNK1信號通路來抑制癌細胞的凋亡[10，11]。

近年來研究發現Livin基因與乳腺癌發生、發展過程密切相關。吳國武等[11]研究發現Livin在乳腺癌組織中表達率68.6%明顯高于正常乳腺組織，表明Livin蛋白在乳腺癌組織中過表達，在乳腺癌分子機制中起重要作用。周晟等[12]研究發現Livin在乳腺癌組織中表達上調，提示Livin基因可能在乳腺癌發生和發展中起重要促進作用。本研究結果示Livin蛋白在正常乳腺、癌旁正常組織及乳腺癌組織中的表達呈逐漸增高趨勢。提示Livin蛋白在乳腺癌發生和發展不同階段的表達呈進行性上升趨勢。在此過程中凋亡抑制因子Livin基因通過抑制Caspase活性而達到抗細胞凋亡作用，使已轉化細胞發生異常有絲分裂，導致乳腺上皮細胞的永生化或癌變[13]。陳亮等[14]研究發現乳腺癌中Livin表達與其臨床分期、組織學分級和腋下淋巴結轉移密切相關，與年齡、腫瘤大小和遠處轉移無關。提示乳腺癌組織中Livin的異常高表達與其發生、發展及預后關系較密切，可作為乳腺癌浸潤及預后評估的指標。潘崢等[15]研究發現乳腺癌組織中Livin RNA的表達與TNM分期、腋窩淋巴結轉移和術后復發的關系較密切，在乳腺癌的發生及發展中起了重要的作用。本研究結果發現乳腺癌組織中Livin蛋白的表達與患者的臨床分期和淋巴結轉移密切相關，與年齡和組織學分級無關。提示Livin蛋白在乳腺癌細胞的侵襲、轉移等活動中可起到促進作用，可作為預后評估的指標。同時研究發現Livin表達陰性的乳腺癌組織中PCNA的增殖指數明顯低于Livin表達陽性的乳腺癌組織。提示Livin基因還具有促進乳腺癌細胞的增殖作用。

總之，Livin蛋白在乳腺癌發生和發展不同階段的表達呈進行性上升趨勢，Livin蛋白在乳腺癌細胞的增殖、侵襲、轉移等活動中可起到促進作用，可作為預后評估的指標。

[參考文獻]

[1] 吳曉，吳名耀，林妙萍，等. 乳腺浸潤性導管癌預后相關因素分析[J]. 現代腫瘤醫學，2009，17（8）：1481.

[2] 王亞利，王中衛，王西京，等. Livin、Survivin在乳腺癌中的表達及其與Caspase-3和臨床病理的相關性[J]. 西安交通大學學報，2009，30（9）：466-469.

[3] Gazzaniga P， Gradilone A， Giuliani L， et al. Expression and prognostic significance of Livin，Survivin and other apoptosis-related genes in the progression of superficial bladder cancer[J]. Ann Oncol，2003，14（1）：85-90.

[4] 魯祥石，劉彥龍，王滌，等. 凋亡抑制蛋白 Livin和Survivin在乳腺癌中的表達及意義[J]. 中國癌癥雜志，2007， 17（7）：542-545.

[5] 張華東，袁守軍，陳惠鵬. Livin癌癥治療的新靶點[J]. 中國藥理學通報，2003，19（8）：845-847.

[6] Ma L， Huang Y， Song Z， et al. Livin promotes Smac/DIABLO degradation by biquitin-proteasome pathway[J]. Cell Death Differ，2006，13（12）：2079-2088.

[7] Yuan B， Ran B， Wang S， et al. siRNA directed against Livin inhibits tumor growth and induces apoptosis in human glioma cells[J]. J Neurooncol，2012，107（1）：81-87.

[8] Choi J， Hwang YK， Sung KW，et al. Expression of Livin， an antiapoptotic protein， is an independent favorable prognostic factor in childhood acute lymphoblastic leukemia[J]. Blood， 2007，109（2）：471-477.

[9] Wang X， Xu J， Ju S， et al. Livin gene plays a role in drug resistance of colon cancer cells[J]. Clinical Biochemistry，2010，43（7-8）：655-660.

[10] 魯祥石，劉彥龍，王滌，等. 凋亡抑制蛋白Livin和Survivin在乳腺癌中的表達及意義[J]. 中國癌癥雜志，2007， 17（7）：542-545.

[11] 吳國武，曾娟紫. Livin蛋白在乳腺癌組織中的表達及意義[J]. 實用癌癥雜志， 2011，26（4）： 372-373.

[12] 周晟，萬婕，劉聰，等. 凋亡抑制基因livin與survivin 在乳腺癌中的表達差異[J]. 中國組織化學與細胞化學雜志， 2006，15（5）：554-558.

[13] Liu HB，Kong CZ，Zeng Y. Livin may serve as a marker for prognosis of bladder cancer relapse and a target of bladder cancer treatment[J]. Urol Oncol，2009，27（3）：277.

[14] 陳亮，艾寧，戴殿祿，等. 凋亡抑制因子Livin在乳腺癌中的蛋白表達及與預后的關系[J]. 中國現代醫學雜志， 2012，22（17）：49-53.

[15] 潘崢，陳軍，覃冠德，等. 乳腺癌組織中Livin RNA與Smac蛋白的表達[J]. 腫瘤防治研究， 2010，37（9）：1035-1039.

（收稿日期：2013-07-31）