HPLC法同時(shí)檢測(cè)食品中四種添加劑含量研究

湯振華++周紅霞

摘要：采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定液體食品中的山梨酸、苯甲酸、糖精鈉、安賽蜜。樣品經(jīng)鹽酸酸化，乙醚提取，甲醇和水溶解后過(guò)HLB固相萃取小柱凈化，以TC-C18（4.6×250毫米，5微米）色譜柱分離。結(jié)果顯示苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜在1.0微克/毫升～100.0微克/毫克范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，回收率在84.24%～96.34%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.03%～4.78%之間，最低檢限0.5毫克/千克，適用于同時(shí)檢測(cè)液體食品中的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜的含量。

關(guān)鍵詞：苯甲酸；山梨酸；糖精鈉；安賽蜜；高效液相色譜

中圖分類(lèi)號(hào)： TS214 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 1674-0432（2014）-06-30-2

1食品添加劑

苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸是我國(guó)目前常用的食品有機(jī)防腐劑；糖精鈉作為甜味劑也廣泛應(yīng)用于食品中，但過(guò)量使用會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生毒副作用，甚至引發(fā)癌癥。因而對(duì)各類(lèi)食品進(jìn)行安全質(zhì)量控制尤為重要[1-3]。現(xiàn)有的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法中，很少有同時(shí)測(cè)定幾種添加劑的方法。但在日常工作中，為節(jié)約時(shí)間提高分析效率，就要求檢測(cè)工作者研究出適合多種類(lèi)型食品中多種添加劑同時(shí)測(cè)定的檢測(cè)[4-6]。不同類(lèi)型食品中蛋白質(zhì)和脂肪含量的高低直接影響著檢測(cè)結(jié)果的可靠性，針對(duì)不同樣品應(yīng)用不同的前處理及檢測(cè)方法，無(wú)疑增加了檢測(cè)工作的難度及強(qiáng)度[7-8]。本文研究了常見(jiàn)液體食品中如果汁、醬油、醋等其中的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜這四種添加劑的液相色譜檢測(cè)方法。該法操作簡(jiǎn)單快速，測(cè)定結(jié)果滿意，適合大批量樣品的快速檢測(cè)。

2 材料與方法

2.1 儀器與試劑

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 Heidolph G3；固相萃取裝置 美國(guó)Supelco；氮吹儀 Turbo Vap LV Caliper；高效液相色譜儀 AGILENT-1100。

乙醚（分析純）； 鹽酸（分析純）； 氫氧化鈉 （分析純）；甲醇（色譜純 美國(guó)TEDIA ）；醋酸銨（色譜純 美國(guó)TEDIA ）；冰乙酸（色譜純 美國(guó)TEDIA ）；HLB固相萃取小柱（30微米，Oasis公司）；MAX固相萃取小柱（30微米，Oasis公司）；C18固相萃取小柱（SP7756B，SUPELCO）

2.2 樣品的預(yù)處理

精確稱(chēng)取5克樣品至50毫升離心管中，加0.5毫升 6摩爾/升鹽酸，加蓋渦旋30秒使樣品酸化，加20毫升乙醚，渦旋20秒提取，8000轉(zhuǎn)/分離心3分，取乙醚層至圓底燒瓶中旋干，加1毫升甲醇混勻，再加9毫升水渦旋混勻，加200微升6摩爾/升鹽酸混勻[2.8]，待過(guò)HLB固相萃取小柱。

2.3 樣品的凈化

用滴管將上述處理過(guò)的樣品加到HLB柱子中，用3毫升 0.6摩爾/升鹽酸淋洗， 4毫升甲醇洗脫，用氮吹管接洗脫液。將樣品氮吹干后，用1毫升3∶7甲醇∶水定容，過(guò)直徑為0.45納米的水相膜后，待測(cè)。

2.4 色譜條件

3 結(jié)果與分析

3.1 流動(dòng)相的選擇

將10毫摩爾/升醋酸銨+0.05%冰乙酸的混合液與甲醇按不同比例配成流動(dòng)相。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)甲醇體積分?jǐn)?shù)為25%時(shí)出峰時(shí)間太快，安賽蜜出峰時(shí)間大約在1.2分、糖精鈉出峰時(shí)間大約在2.1分，此時(shí)極性雜質(zhì)很難分開(kāi)，干擾較大。甲醇體積分?jǐn)?shù)15%時(shí)，糖精鈉出峰時(shí)間晚，峰展寬現(xiàn)象嚴(yán)重。也嘗試過(guò)梯度洗脫，但是梯度洗脫有時(shí)基線飄的較嚴(yán)重，而且平衡時(shí)間較長(zhǎng)。甲醇體積分?jǐn)?shù)20%時(shí)，出峰時(shí)間較合理、分離效果較好，結(jié)果見(jiàn)圖1，從圖1中可以看出糖精鈉的出峰時(shí)間為4.150分，安賽蜜的出峰時(shí)間為6.107分，苯甲酸的出峰時(shí)間為15.205分，山梨酸的出峰時(shí)間為24.796分，峰形和分離效果都比較好。綜合考慮，本實(shí)驗(yàn)選擇甲醇的體積分?jǐn)?shù)20%的流動(dòng)相[4，7，8]。

圖1 100.0微克/毫升濃度混合標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖

Fig. 1 Chromatogram of 100.0μg/ml mixed standard substance

3.2固相萃取小柱類(lèi)型的選擇

適合極性或非極性化合物的提取、富集和凈化的固相萃取小柱有C18固相萃取小柱、MAX固相萃取小柱、HLB固相萃取小柱這三種。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)C18柱無(wú)法保留糖精鈉和安賽蜜，在上樣和水洗的過(guò)程中，糖精鈉和安賽蜜大量流出。MAX柱無(wú)法保留糖精鈉、安賽蜜、苯甲酸、山梨酸，在上樣、5%氨水淋洗、甲醇淋洗的過(guò)程中，糖精鈉、安賽蜜、苯甲酸、山梨酸大量流出，這有可能的原因是當(dāng)pH為8～9時(shí)，這四種物質(zhì)的分子狀態(tài)不穩(wěn)定，無(wú)法保留在MAX柱上[7，8]。而HLB柱可以保留安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸這四種物質(zhì)，結(jié)果見(jiàn)圖2，但是在水淋洗水性雜質(zhì)的過(guò)程中一部分安賽蜜被水帶出。

3.3 HLB固相萃取小柱淋洗溶液的選擇

HLB固相萃取小柱在水淋洗的過(guò)程中有部分安賽蜜被帶出，這可能是水洗過(guò)程中使得pH值上升后安賽蜜與HLB柱結(jié)合不是很牢，因此嘗試用酸淋洗[8，9]。實(shí)驗(yàn)分別用0.6摩爾/升和1.2摩爾/升L鹽酸淋洗，接廢液進(jìn)樣，結(jié)果見(jiàn)圖3，由圖3可以發(fā)現(xiàn)0.6摩爾/升鹽酸淋洗效果最好， 安賽蜜基本無(wú)損失。

3.4線性范圍與最低檢出限

3.5 回收率和精密度

選取不含有苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜的果汁、啤酒、醋為樣品，加入不同量的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表 2。從表2 可以看出，該方法的回收率在84.24%～96.34%之間，RSD在2.03%～4.78%之間，回收率和精確度都在可接受范圍內(nèi)。加標(biāo)量越大，RSD值越低，精密度越高[9，10]。

x

3.6 樣品檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)選取了市售的5種不同的液體樣品進(jìn)行苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜含量的檢測(cè)，結(jié)果如表3所示。從表3中可以看出這5種樣品的回收率在82.31%～97.06%之間，回收率都在可接受范圍內(nèi)。這5種樣品中有4種添加了一種或一種以上的這四種添加劑。根據(jù)GB2760-2011[2]判斷，這5種產(chǎn)品都符合國(guó)標(biāo)的限量要求。

4 結(jié)語(yǔ)

本文研究了液體類(lèi)食品中同時(shí)測(cè)定苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉四種添加劑的方法。方法的相關(guān)性均在0.999以上， 回收率在84.24%～96.34%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.03%～4.78%之間，最低檢出限0.5 毫克/公斤，準(zhǔn)確度好。運(yùn)用本方法對(duì)液體食品中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉四種添加劑進(jìn)行了檢測(cè)，方法操作簡(jiǎn)便、快捷，實(shí)用性強(qiáng)。

參考文獻(xiàn)

[1] 高彥祥.食品添加劑基礎(chǔ)[M].北京：中國(guó)輕工業(yè)社，2012（5）：45-46，168-169.

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[4] 陳春梅，董劉敏，師邱毅，等.超高效液相色譜法檢測(cè)飲料中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸含量[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（5）：282-283.

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[8] 程春梅， 李歆， 董劉敏，等.月餅中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸檢測(cè)方法的研究[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2009，21（11）：102-103.

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作者簡(jiǎn)介：湯振華，昆山市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，工程師，研究方向：食品安全檢測(cè)；周紅霞，南京曉莊學(xué)院生物化工與環(huán)境工程學(xué)院，研究方向：食品安全檢測(cè)。

4 結(jié)語(yǔ)

本文研究了液體類(lèi)食品中同時(shí)測(cè)定苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉四種添加劑的方法。方法的相關(guān)性均在0.999以上， 回收率在84.24%～96.34%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.03%～4.78%之間，最低檢出限0.5 毫克/公斤，準(zhǔn)確度好。運(yùn)用本方法對(duì)液體食品中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉四種添加劑進(jìn)行了檢測(cè)，方法操作簡(jiǎn)便、快捷，實(shí)用性強(qiáng)。

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作者簡(jiǎn)介：湯振華，昆山市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，工程師，研究方向：食品安全檢測(cè)；周紅霞，南京曉莊學(xué)院生物化工與環(huán)境工程學(xué)院，研究方向：食品安全檢測(cè)。

4 結(jié)語(yǔ)

本文研究了液體類(lèi)食品中同時(shí)測(cè)定苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉四種添加劑的方法。方法的相關(guān)性均在0.999以上， 回收率在84.24%～96.34%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.03%～4.78%之間，最低檢出限0.5 毫克/公斤，準(zhǔn)確度好。運(yùn)用本方法對(duì)液體食品中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉四種添加劑進(jìn)行了檢測(cè)，方法操作簡(jiǎn)便、快捷，實(shí)用性強(qiáng)。

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作者簡(jiǎn)介：湯振華，昆山市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，工程師，研究方向：食品安全檢測(cè)；周紅霞，南京曉莊學(xué)院生物化工與環(huán)境工程學(xué)院，研究方向：食品安全檢測(cè)。