GSTT對大鼠腦缺血再灌注損傷模型腦組織IL-1、TNF-αmRNA水平的影響①

王夢嬌，曹啟博，顏嘉儀，辛怡萱，袁琦峰，張 波

(佳木斯大學基礎醫學院, 黑龍江 佳木斯 154007)

GSTT對大鼠腦缺血再灌注損傷模型腦組織IL-1、TNF-αmRNA水平的影響①

王夢嬌，曹啟博，顏嘉儀，辛怡萱，袁琦峰，張 波

(佳木斯大學基礎醫學院, 黑龍江 佳木斯 154007)

目的:觀察蒺藜總皂苷(grosssaponinsfromtribulusterrestris，GSTT)對大鼠腦缺血再灌注損傷模型IL-1、TNF-α在mRNA水平表達影響的實驗研究。方法:SD大鼠40只, 適應性喂養一周后，隨機分為：正常對照組；MCAO模型組；大、小劑量GSTT治療組。制備大鼠大腦中動脈栓塞模型,缺血2h，再灌注24h后，檢測大鼠神經功能評分；預處理組大鼠術前7d，按照GSTT大、小劑量給予治療，Real-time方法檢測IL-1、TNF-α在mRNA水平的表達。結果:與正常對照相比較，模型組，大、小劑量GSTT治療組，大鼠神經功能平分較高(P<0.05)；與模型組相比較,大、小劑量GSTT治療組,明顯上調IL-1、同時顯著下調TNF-α在mRNA水平的表達(P<0.05)；且大治療組效果更加顯著。結論:GSTT抑制炎癥因子IL-6表達的同時，促進抗炎因子TNF-α的表達，從而實現其對大鼠局灶性腦缺血/再灌注損傷后神經元的拮抗保護作用。

缺血再灌注損傷；大鼠；IL-1；TNF-α

流行病學調查研究表明，我國已經逐漸進入老齡化社會，隨之我們要面臨的是人口老齡化帶來的相關問題，其中尤其明顯的是腦血管疾病發生率不斷地增高。腦血管疾病是世界第三大死亡原因，其中缺血性腦血管疾病(ischemiccerebrovasculasdisease，ICVD)約占其2/3[1]，其致殘率極高，給人們的生活帶來巨大的影響，同時給家庭和社會帶來沉重的經濟負擔。目前，對于缺血性腦血管疾病，臨床上主要采用溶栓治療，解除局部血流阻塞，恢復缺血區域血流再灌注。腦缺血再灌注(cerebralischemiareperfusioninjury,CIR)是腦缺血一定時間后，恢復其血液供應，功能不但未能恢復，反而出現了更加嚴重的腦功能障礙。因此，探討腦缺血再灌注損傷的發病機制，在研究開發保護腦缺血性腦損傷的藥物具有重要的理論意義和實用價值。蒺藜總皂苷(grosssaponinsfromtribulusterrestris，GSTT)為心腦疏通膠囊的主要成分為[2]，是目前臨床上廣泛應用于心腦血管疾病治療的中成藥，具有良好的應用價值，然而目前階段對其治療腦缺血疾病的機制尚無明確定論，尤其是它在炎癥方面的研究更是稀少。本文作者在成功地制造了大鼠腦缺血再灌注損傷模型的基礎上，檢測GSTT對大鼠腦組織中炎癥因子IL-1、抗炎因子TNF-α在mRNA水平方面的影響，進而為其在臨床上的應用提供堅實的理論基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

清潔級Sprague-Dawley(SD)健康大鼠40只，

體重(250±20)g，由佳木斯大學實驗動物中心提供。

1.2 實驗藥物

RNA提取試劑盒購自美國Sigma公司；Real-time試劑盒購自日本TaKaRa公司。

1.3 實驗動物模型

健康SD大鼠40只，實驗前普通飼料適應性喂養1周后，隨機分為4組：正常對照組；模型組；小劑量GSTT治療組；大劑量GSTT治療組。參照Nagasawa和Longa等[3]報道的線栓法制備大鼠大腦中動脈栓塞動物模型，并在此基礎上加以適當的改進。預處理組大鼠術前7d，小劑量GSTT治療組, 給予6.3mg/kgGSTT；大劑量GSTT治療組，給予12.6mg/kgGSTT，每天經腹腔注射給藥1次，缺血2h再灌注24h后取大鼠腦組織進行相應指標的檢測。

1.4 神經功能評分

按照Longa提出的5分制評分標準[3]。評分在1～3分為有效模型，排除評分為0分和4分者，隨機補全模型，以保證每組動物數不變。

1.5 實驗指標

Real-time方法檢測大鼠腦組織中IL-1、TNF-α的mRNA水平的表達。

1.6 統計學方法

采用SPSS17.0軟件處理進行統計學分析，結果以均數±標準差的方式表示。多組樣本均數的比較采用AVON分析。

2 結果

2.1GSTT對大鼠腦缺血后神經功能的影響

模型組大鼠腦缺血后神經功能評分數值明顯高于正常對照組(P<0.05)，提示大鼠大腦中動脈缺血導致神經功能受損，說明MCAO模型建立成功(P<0.05)；與模型組相比較,大、小劑量GSTT治療組,大鼠神經功能評分較模型組明顯降低，且大治療組改善效果更加顯著。見表1。

表1 各組大鼠腦缺血后神經功能評分±s)

*與正常對照組比較P<0.05；**與模型組比較P<0.05。

2.2Real-time方法檢測IL-1、TNF-α在mRNA水平的表達

與模型組相比較,大、小劑量GSTT治療組，在mRNA水平上明顯上調IL-1、同時顯著下調TNF-α的表達，且大治療組效果更加顯著(P<0.05)。見表2。

表2 IL-1、TNF-α在mRNA水平的表達

*與空白對照組比較P<0.05，**與模型組比較P<0.05。

3 討論

腦缺血再灌注損傷是影響急性腦梗死病人臨床恢復的重要并發癥，其發生機制復雜，許多研究領域尚無明確定論。但其防治已成為目前研究雖待解決的課題[4]。大鼠大腦中動脈阻斷模型(middlecerebralarteryocclusionmodel，MCAO)是在生物醫學科學研究中所建立的模擬人類缺氧缺血性腦病表現的實驗動物模型[5]。自Nagasawa和Longa等[3]報道了此模型的制作方法，歷經完善，已經被國際上廣泛應用于腦缺氧缺血的研究，是目前公認的建立局灶性腦缺血再灌注模型的理想方法[3]。本實驗中大鼠腦缺血后神經功能評分數值明顯升高，并且大鼠表現出相應的缺血癥狀，說明MCAO實驗動物模型建立成功。以往對于腦缺血性損傷疾病的臨床治療原則之一是盡早恢復血供，以使缺血腦組織重新得到氧的供應，提供代謝所必需的營養物質并清除代謝廢物，由此有利于減輕腦缺血損傷。然而近年來發現，缺血后的血流恢復在某些情況下能導致進一步的組織損傷和功能障礙，造成缺血再灌注損傷(IschemiaandReperfusionInjury，IR)，因此抑制再灌注損傷成為目前治療缺血性腦卒中的關鍵環節。臨床上一般用溶栓治療來解除梗塞，建立缺血區域血流再灌注。對于缺血引起的腦組織損傷尚無有效治療藥物。盡早治療,恢復腦血流,減少再灌注損傷,減輕腦水腫[6]。

因此，尋找新型有效的缺血性腦卒中治療藥物是目前研究熱點。近年來，在ICVD防治中，腦保護藥物的研究與開發進展迅速。由于很多中藥具有活血化淤的功效，所以在腦保護藥中中藥占有重要地位。我國擁有豐富的中藥資源，中藥用于ICVD的防治已有很長的歷史，近年來大量從中藥中提取的有效活性部位或成分具有明顯的ICVD防治作用，如三七總皂苷、燈盞花素、阿魏酸鈉、葛根素等。其中，蒺藜總皂苷對腦缺血引起的損傷具有很好保護作用，近年來倍受關注，已作為臨床一線用藥。現在治療腦缺血的總原則就是

本實驗對蒺藜總皂苷作用于大鼠局灶性腦缺血/再灌注損傷后神經元的拮抗保護作用機制進行了實驗研究，并且得出其能夠抑制炎癥因子IL-1，促進抗炎癥因子TNF-α表達的結論。此結果說明蒺藜總皂苷具有明顯抑制炎癥因子的形成以及促進抗炎因子生成的作用，從而減輕腦缺血/再灌注的損傷作用。此研究結果進而為蒺藜總皂苷在臨床上應用于缺血性腦血管疾病的治療給予我們一些新的啟示,為其臨床應用提供了堅實的理論基礎。

[1]粟秀初，孟錦立．第16世界神經科大會中有關缺血性中風的某些診療新觀點和措施簡介[J]．中風與神經疾病雜志，1998，15(2)：125

[2]胡文蘭.高密度脂蛋白抗動脈粥樣硬化的研究進展[J].國外醫學內科學分冊，2003,30(6)：235-23

[3]LongaEZ，WeinsteinPR，CarlsonS，etal．Reversiblemiddlecerebralarteryocclusionwithoutcraniectomyinrats[J]．Stroke，1989，20(1):84-91

[4]姜堯佳,楊曉玉,劉永剛,等.高壓氧對腦缺血再灌注損傷的臨床療效觀察分析[J].黑龍江醫藥科學，2013，36(3)：99-100

[5]BedersonJB,PittsLH,TsujiM,eta1.Ratmiddlecerebralarteryocclusion：evaluationofthemodelanddevelopmentofaneurologicexamination[J]．Stroke，1986,17:472-476

[6]張艷娟,王景霞,原德新,等.黃芪注射液對大鼠局灶性腦缺血再灌注后梗死體積的影響[J]. 黑龍江醫藥科學，2010，33(6)：54-55

Research on the effects of GSTT to the mRNA level of IL-1 and TNF-αin Ischemia-Reperfusion rats

WANGMeng-jiao,CAOQi-bo,YANJia-yi,XINYi-xuan,YUANQi-feng,ZHANGBo

(College of Basic Medical Sciences, Jiamusi University, Jiamusi 154007,China)

Objective: To observe the effects of gross saponins from tribulus terrestris (GSTT) on the expression of IL-1、TNF-α in rabbits with MCAO. Methods: Forty healthy SD rats were used in the experiment. 10 of them were randomly selected as normal control group. The others were randomly divided into three groups, treating with GSTT in the low-dose (6.3mg/kg), in the high-dose (12.6mg/kg) and without therapy, respectively. The levels of IL-1、TNF-α were measured in mRNA level. Results: The level of IL-1 was increased significantly in GSTT group compared with model group(P<0.05).ThelevelsofTNF-αwasdecreasedsignificantlyinGSTTgroupcomparedwithmodelgroup(P<0.05). Conclusion：GSTT could be against MCAO by decreasing the level of inflammation factor IL-6 and increasing the level of anti-inflammation factor TNF-α.

Ischemia-Reperfusion; IL-1；TNF-α

佳木斯大學大學生科技創新項目，編號：XSYD2014-017。

王夢嬌(1995～)女，黑龍江佳木斯人，在讀本科生。

張波(1973～)女，黑龍江牡丹江人，在讀博士研究生，副教授，研究方向：病理生理學與分子病理生理學。E-mail：sunnem@163.com。

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A

1008-0104(2015)01-0054-02

2014-12-11)