免疫鼠抗AT1受體自身抗體的類型分布研究

鄭榮華，張?zhí)K麗，劉慧榮

(1.臨汾職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山西 臨汾　041000；2.首都醫(yī)科大學(xué)，北京　100069)

?

免疫鼠抗AT1受體自身抗體的類型分布研究

鄭榮華1，張?zhí)K麗2，劉慧榮2

(1.臨汾職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山西 臨汾041000；2.首都醫(yī)科大學(xué)，北京100069)

[摘要]目的：明確免疫鼠血中抗AT1受體自身抗體的類型分布，為該抗體的作用機(jī)制研究提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：以AT1R-ECII為抗原主動(dòng)免疫雌性Wistar大鼠，待大鼠血清中含有高滴度的抗AT1受體自身抗體后，用ELISA法檢測(cè)血清中抗AT1受體抗體的水平、類型及亞類。結(jié)果：雌性Wistar大鼠免疫4周后，抗AT1受體抗體滴度時(shí)明顯升高，8周時(shí)處于穩(wěn)定高峰值(免疫組OD值2.99±0.11 vs. 同期對(duì)照組0.44±0.06，P<0.05)；該抗體屬于免疫球蛋白的IgG類；在大鼠IgG的4個(gè)亞型(IgG1，IgG2a，IgG2b， IgG2c)中，該抗體大部分屬于IgG2b亞類(OD值為0.33±0.04 vs. 同期對(duì)照組OD值0.08±0.01，P<0.05)，極少部分屬于IgG2a亞型(OD值為0.10±0.01 vs. 同期對(duì)照組OD值0.07±0.05，P<0.05)。結(jié)論：通過主動(dòng)免疫大鼠體內(nèi)產(chǎn)生的抗AT1受體抗體主要屬于IgG類，IgG2b亞類。

[關(guān)鍵詞]AT1R受體；抗體；類型

Study on Distribution of the Types of Autoantibodies against AT1Receptor in the Sera of Immunized Rats

ZHENG Ronghua1, ZHANG Suli2, LIU Huirong2

(1.LinfenVocationalandTechnicalCollege,Linfen041000,Shanxi,China; 2.CapitalMedicalUniversity,Beijing100069,China)

[ABSTRACT]Objective: To detect distribution of the types of autoantibodies against AT1receptor in the sera of immunized rats, providing the experimental basis for the research of the action mechanism. Methods: Adult female Wistar rats were actively immunized with AT1R-ECII. When the titer of anti-AT1R antibody reached a peak, the titers, types and subtypes of anti-AT1R antibody in the sera of rats were detected by SA-ELISA. Results: The titers of serum anti-AT1R antibody in immunized group were increased at the 4th week and attained a peak value at the 8th week as compared with the control group at the same time point(OD value, 2.99±0.11 vs. 0.44±0.06, P<0.05). It was shown that anti-AT1R antibody was IgG type immunoglobulin(IgG1, IgG2a,IgG2b, IgG2c). Meanwhile, the antibody was mainly determined as IgG2b subtype(OD value, 0.33±0.04 vs. 0.08±0.01, P<0.05), and a few belonged to IgG2a subtype(OD value, 0.10±0.01 vs. 0.07±0.01, P<0.05).Conclusion:The anti-AT1R antibodies in immunized rats aremainly determined as IgG2b subtype, and a few belongs to IgG2a subtype.

[KEYWORD] AT1receptor; antibodies; types

先兆子癇患者的發(fā)病與抗血管緊張素Ⅱ1型受體自身抗體(AT1-AA)密切性備受關(guān)注[1]。但由于臨床研究具有的局限性及抗體收集的困難性，有關(guān)這些抗體與疾病的相關(guān)性研究大多數(shù)集中到動(dòng)物身上，其中較為廣泛采用的是主動(dòng)免疫大鼠獲取相應(yīng)抗體而進(jìn)行進(jìn)一步機(jī)制研究。本研究通過主動(dòng)免疫大鼠體內(nèi)產(chǎn)生的抗AT1受體抗體，測(cè)定其類型及亞類的分布，為先兆子癇患者發(fā)病機(jī)制的研究提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

Wistar雌性大鼠由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，年齡體重相當(dāng)。佐劑購自美國Sigma公司。北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供生物素化羊抗兔IgG、IgA、IgM、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c二抗、親和素標(biāo)記辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)。酶聯(lián)免疫測(cè)定儀為該實(shí)驗(yàn)室購自美國Molecular Device產(chǎn)品。

1.2方法

1.2.1主動(dòng)免疫動(dòng)物模型的建立隨機(jī)將11只Wistar雌性健康大鼠，分為對(duì)照組(n=6)和免疫組(n=5)。用合成的人AT1受體細(xì)胞外第二環(huán)肽段(AT1R-ECII)為抗原進(jìn)行免疫，每2周加強(qiáng)免疫1次，每次免疫前鼠尾采血，-40℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2血清抗AT1R抗體的檢測(cè)采用SA-ELISA法檢測(cè)免疫雌鼠體內(nèi)抗AT1R抗體產(chǎn)生情況[2]，并測(cè)定該血清抗體的類型及亞類，其中二抗?jié)舛确謩e為IgA(1∶8 000)、IgM(1∶3 000)、IgG1(1∶6 000)、IgG2a(1∶6 000)、IgG2b(1∶8 000)、IgG2c(1∶8 000)，于405 nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1建立主動(dòng)免疫大鼠模型

到免疫4周時(shí)，大鼠血清中已明顯檢測(cè)出抗AT1R抗體，8周時(shí)達(dá)穩(wěn)定值(稀釋度1∶10時(shí)OD值2.99±0.11vs. 0.44±0.06，P<0.05，見圖1)。

2.2免疫鼠血中抗AT1R抗體類型及亞類

用ELISA方法檢測(cè)證明免疫雌鼠血清中抗AT1R抗體屬于IgG類(OD值2.79±0.02 vs. 0.40±0.05，P<0.05)，而非IgM及IgA類(vs. 同期對(duì)照組，P>0.05,見圖2)。該抗體以IgG2b亞型為主(OD值0.33±0.04 vs. 0.08±0.01，P<0.05)，極少部分屬于IgG2a亞型(OD值0.11±0.01 vs. 0.07±0.01，P<0.05，見圖3)。

圖1　免疫不同時(shí)間段抗AT1R抗體水平值

圖2　抗AT1R抗體的類型分布

圖3　抗AT1R抗體亞類分布

3討論

在先兆子癇發(fā)病機(jī)制的研究中，從發(fā)現(xiàn)抗血管緊張素Ⅱ1型受體的自身抗體(AT1-AA)存在后，AT1-AA與先兆子癇疾病發(fā)展的相關(guān)性引人關(guān)注。AT1-AA在疾病中發(fā)揮多種的病理生理效應(yīng)，與該抗體的類型密切相關(guān)。但是由于臨床研究的局限性，關(guān)于AT1-AA在先兆子癇疾病中的作用機(jī)制研究受到很大的限制。

AT1-AA與疾病的相關(guān)性研究大多數(shù)集中到動(dòng)物身上，其中較為廣泛采用的是主動(dòng)免疫大鼠獲取相應(yīng)抗體而進(jìn)行進(jìn)一步機(jī)制研究。本實(shí)驗(yàn)通過免疫獲得的抗AT1R抗體其性質(zhì)屬于IgG類免疫球蛋白，這與 Dechend等[3]證實(shí)的先兆子癇患者血中的AT1-AA類型恰巧一致，并且IgG是唯一可通過胎盤的免疫球蛋白，這一結(jié)果提示通過免疫大鼠獲得的抗AT1R抗體與先兆子癇患者體內(nèi)AT1-AA性質(zhì)具有相似性。

本研究檢測(cè)進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，免疫大鼠血清中的抗AT1受體抗體大部分為IgG2b類，極少部分屬于IgG2a。大鼠的IgG共有4個(gè)亞型，分別為IgG1，IgG2a，IgG2b， IgG2c，其中IgG2b和IgG2a類與FcRn結(jié)合力強(qiáng)，而IgG的胎盤穿透功能與IgGFc片段結(jié)構(gòu)有關(guān)，說明免疫大鼠獲得的抗AT1R抗體具有經(jīng)胎盤傳播的可能性。抗AT1受體抗體亞類主要為IgG2b，主要受輔助性T細(xì)胞1(Th1)型調(diào)節(jié)，是參與炎癥相關(guān)的抗體類型，與先兆子癇患者體內(nèi)表現(xiàn)炎癥反應(yīng)過度相吻合[4]。抗AT1R抗體亞類的研究，再次提示免疫鼠血中的抗AT1R抗體與臨床上先兆子癇患者體內(nèi)AT1-AA具有一致性基礎(chǔ)。

綜上所述，本研究利用主動(dòng)免疫大鼠獲得的抗AT1R抗體，能夠成為先兆子癇發(fā)病機(jī)制研究的一種工具。

[參考文獻(xiàn)]

[1]任玉玲，金達(dá)茂，馬成文，等. 腦卒中患者血清抗血管緊張素受體Ⅱ1型和α1腎上腺素受體自身抗體的觀察[J]. 中國神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志，2005，12(1)：53.

[2]鄭榮華，王澎，張?zhí)K麗，等.抗血管緊張素Ⅱ1型受體抗體陽性孕鼠模型的制備[J].中國心血管病研究，2010，8(4): 290-293.

[3]Dechend R, Dominik NM, Wallukat G,etal. AT1Receptor Agonistic Antibodies,Hypertension, and Preeclampsia[J]. Elsevier Inc. 2004，24:571-579 .

[4]鄭榮華.抗AT1受體自身抗體對(duì)人體胎盤血管的收縮作用[D]. 太原：山西醫(yī)科大學(xué)，2010.

本文編輯：王知平

·基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)·

[作者簡(jiǎn)介]鄭榮華，女，講師，從事生理學(xué)教學(xué)工作及相關(guān)教學(xué)管理工作

[基金項(xiàng)目]國家自然科學(xué)基金青年科學(xué) (30900584)

[中圖分類號(hào)]R714.24+4

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1671-0126(2015)02-0001-03