畜禽產(chǎn)品獸藥殘留的免疫學檢測方法探討

蘇茂

摘 要 隨著人們對畜禽產(chǎn)品獸藥殘留問題的日益重視，獸藥殘留檢測方法逐漸增多。介紹畜禽產(chǎn)品中獸藥殘留的主要免疫學檢測方法，包括酶聯(lián)免疫法、膠體金檢測技術(shù)、熒光定量檢測、化學發(fā)光檢測、放射免疫分析法及生物芯片檢測技術(shù)，對每種方法特點及應用現(xiàn)狀做一簡介。希望為獸藥殘留檢測的深入研究提供一些參考。

關鍵詞 畜禽產(chǎn)品；獸藥殘留；免疫學檢測方法

中圖分類號：S859.84 文獻標志碼：B 文章編號：1673-890X（2016）12--02

獸藥是畜禽生成中必不可少的一部分，能夠降低發(fā)病及死亡率，提高養(yǎng)殖效益。但隨著獸藥種類及數(shù)量的持續(xù)上升，獸藥濫用現(xiàn)象日趨嚴重。獸藥在畜禽體內(nèi)持續(xù)積累造成了獸藥殘留，殘留超標會使消費人群中毒、過敏等；同時，也會引起耐藥性、生態(tài)環(huán)境毒性等其他問題[1]。近年來，因獸藥殘留問題導致的食品安全信任危機逐步加劇，使之成為制約畜牧業(yè)發(fā)展的重要因素。獸藥殘留的控制離不開檢測標準的制定及檢測技術(shù)的發(fā)展。免疫學檢測技術(shù)以抗原抗體的結(jié)合為基礎，具有特異性強、靈敏度高、篩選速度快、操作簡單等特點。隨著免疫學技術(shù)的日趨完善，免疫學檢測方法在眾多獸藥殘留檢測手段中脫穎而出，其應用越來越廣泛。本文就近年來用于獸藥殘留的免疫學手段做一簡要綜述，以期為獸藥殘留檢測提供參考。

1 酶聯(lián)免疫測定法（ELISA）

ELISA方法是一種將抗原-抗體特異性反應與酶高效催化反應相結(jié)合的檢測方法，是酶免疫測定法中應用最廣的一種方法，具有操作簡單、靈敏度高、批量檢測等優(yōu)勢。檢測時首先將抗原或抗體吸附于固相載體表面，后加入待測抗體或抗原，再加入酶標記的抗原或抗體，最后通過底物顯色生成有色物質(zhì)，根據(jù)吸光值對樣品進行定性及定量分析。該方法對動物產(chǎn)品中的磺胺類、四環(huán)素類、己烯雌酚、苯巴比妥、氯霉素和黃曲霉素等獸藥殘留具有高靈敏度及準確度[2]。自ELISA方法首次用于獸藥殘留檢測至今幾乎所有常用獸藥均建立了酶聯(lián)免疫檢測系統(tǒng)，大部分已應用于獸藥殘留的快速檢測中。

2 膠體金免疫層析測定法（CGIA）

膠體金法將膠體金顆粒作為標記物，通過金標顆粒顏色的直觀讀取，定量定性的顯示檢測結(jié)果。該方法具有靈敏度高、操作簡單、快速有效和成本低廉等特點。膠體金法將抗原或抗體以條帶狀預先固定于條狀纖維層析材料上，金標抗體（單抗或多抗）固定于樣本墊上，樣品加入后在毛細作用推動下于層析試紙中泳動，與樣本墊上金標抗體發(fā)生免疫反應，形成聚合物。當聚合物移動至預固定條帶時被截留，聚集于條帶處而呈色[3]。膠體金法用于定性檢測時不需儀器可直觀讀取且試紙條攜帶方便，因此該方法適合現(xiàn)場檢測。目前已有多種試紙條經(jīng)農(nóng)業(yè)部批準投入使用，應用于獸藥殘留檢測。

3 熒光免疫測定法（FIA）

熒光免疫法是在抗原-抗體結(jié)合原理基礎上使用熒光物質(zhì)作為標記及檢測依據(jù)的一種方法。熒光物質(zhì)的選擇是該方法的重點，也是限制其發(fā)展的主要因素。傳統(tǒng)熒光物質(zhì)干擾大、靈敏度低。時間分辨熒光免疫法、量子點熒光免疫法及熒光偏振免疫測定法等的出現(xiàn)使得FIA的靈敏度得到大幅提升，從而在獸藥殘留分析中得以迅速發(fā)展。FIA主要的優(yōu)勢是可進行全自動大批量檢測[4]，相信在獸藥殘留檢測中具有很好的推廣前景。

4 化學發(fā)光免疫測定法

化學發(fā)光免疫測定法包括兩個部分，以抗原-抗體結(jié)合為基礎的免疫反應部分和以化學發(fā)光系統(tǒng)為基礎的分析部分。該方法具有靈敏度高、特異性好、可全自動檢測、有效期長且無輻射等優(yōu)點[5]。研究顯示，化學發(fā)光法與ELISA檢測法符合率極高。目前，化學發(fā)光法已成為獸藥殘留免疫學檢測的一個重要發(fā)展方向，未來可能取代放射免疫和ELISA。

5 放射免疫測定法

放射性免疫測定法是用同位素標記的抗原以及機體中抗原共同與抗體發(fā)生競爭性的免疫反應的原理，根據(jù)競爭效應的強弱程度來判斷抗原的含量。這種方法具有成本低，操作簡便，耗時較短等的特點，非常適合大量樣本的檢測鑒定。但這種測定試劑盒在制備及使用過程中會對環(huán)境造成一定的污染[6]，危害著人及動物的健康；同時還存在放射性試劑壽命較短的問題，因此，逐漸被非放射性測定方法所取代。

6 生物芯片檢測

生物芯片技術(shù)的原理是將蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子密集有序的固定于經(jīng)特殊處理的基片表面，然后與標記的樣本進行雜交，然后洗去未結(jié)合的目標分子，使用特定的儀器對結(jié)果信號進行掃描讀取，通過抗原抗體的親和原理以及核酸序列的互補親和原理來判斷檢測結(jié)果，達到檢測的目的[7]。這種方法具有高效，高通量等其他方法所沒有的優(yōu)勢。近年來，我國生物芯片技術(shù)領域取得了長足的進步，生物芯片技術(shù)已經(jīng)廣泛應用于獸藥殘留的檢測，并具有越來越廣的應用前景。

7 結(jié)語

畜禽產(chǎn)品中獸藥殘留問題與人民群眾健康息息相關，控制獸藥殘留、保證食品安全是一項持久而艱巨的任務。近些年獸藥殘留的免疫學檢測手段獲得了快速發(fā)展，在眾多免疫方法中脫穎而出。免疫學檢測方法具有操作簡單快速、高通量、準確和靈敏度高等優(yōu)勢，適合基層工作者現(xiàn)場篩查使用。隨著獸藥總類的增多、藥物結(jié)構(gòu)的日益復雜，多組分同時、快速檢測將成為未來免疫學檢測技術(shù)的發(fā)展趨勢。相信通過不斷改進及應用，免疫學檢測手段將具有更廣闊的應用前景，成為獸藥殘留檢測的主要方法。

參考文獻

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[2]徐偉，程鳳科，孟銀，等.酶聯(lián)免疫吸附法在獸藥殘留檢測中的應用[J].中國家禽，2013，35（12）：49-52.

[3]薛曉，榮霞，葉自霞，等.膠體金免疫層析法在畜禽產(chǎn)品獸藥殘留檢測中的應用[J].動物醫(yī)學進展，2013，34（12）：179-182.

[4]李麗華，白瑞櫻，孫遠明，等.環(huán)丙沙星時間分辨熒光免疫分析方法的建立與應用[J].食品科學，2012，33（8）：216-220.

[5]馬玲，韋建興，陸忠礎，等.磺胺二甲嘧啶間競爭化學發(fā)光酶免疫分析法的建立及應用[J].中國食品衛(wèi)生雜志，2014，26（5）：455-460.

[6]江秀紅.獸藥殘留的快速檢測技術(shù)研究進展[A].中國獸藥大會暨中國畜牧獸醫(yī)學會動物藥品學分會學術(shù)年會[C].2008：386-388.

[7]程景，李英杰，張易，等.畜禽產(chǎn)品中獸藥殘留檢測技術(shù)研究進展[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2009（10）：8-9.

（責任編輯：劉昀）