試管倒插法診斷家畜血吸蟲病效果觀察

汪承相+張建華+李勇+柯棟棟+張瓊+費(fèi)世清+程剛+汪少華

摘要：2006-2008年采用斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾法（DIGFA）血檢診斷陽(yáng)新縣牛（羊）血吸蟲病，血檢結(jié)果為陽(yáng)性病牛（羊）再采用試管倒插法（頂管法）進(jìn)行糞便孵化而確診。結(jié)果表明，實(shí)行以上兩種方法進(jìn)行診斷，準(zhǔn)確率極高。是控制血吸蟲病流行、保護(hù)人民身體健康的最佳辦法。

關(guān)鍵詞：血吸蟲病；診斷；試管倒插法；陽(yáng)新縣

中圖分類號(hào)：S855.9+9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1007-273X（2016）05-0005-02

血吸蟲病是我國(guó)南方地區(qū)流行最為嚴(yán)重的人畜共患寄生蟲病。建國(guó)后，開始實(shí)施以控制傳染源為主的綜合防治方針。實(shí)行圍墾滅螺，查治人畜疾病，研究多種傳染源的診斷方法。傳統(tǒng)的血吸蟲病檢查方法主要為糞檢，其糞便樣量是每頭牛50～100 g，山羊10～15 g。實(shí)行一糞一檢，工作量大且效果不佳。筆者從2006年開始在陽(yáng)新縣采用斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾法（DIGFA）診斷牛（羊）血吸蟲病，先用血檢篩選出結(jié)果為陽(yáng)性病牛（羊），再用糞便孵化（頂管法）進(jìn)一步確診。幾年來(lái)，通過(guò)采取一系列綜合防治措施，使陽(yáng)新縣家畜血吸蟲病感染率逐年下降。耕牛感染率由2006年的6.58%下降到2008年的1.66%，下降4.92個(gè)百分點(diǎn)。山羊感染率由6.67%下降到2008年的0.67%，下降了6.0個(gè)百分點(diǎn)。從而使牛（羊）血吸蟲病的感染強(qiáng)度逐年減弱（水牛更為明顯）。實(shí)踐證明，每年實(shí)行春查、春治、秋查、秋治。一糞三檢，采用上述兩種檢查方法，可收到較好的效果。

1 材料與方法

1.1 材料

（1）糞缸（試管蓋），試管，20～40目糞篩，橡皮筋，記號(hào)筆，竹筷，剪刀，醫(yī)用紗布，脫脂棉，直徑50 cm篩箕（過(guò)濾井水、河水），30%氯漂白粉50 g，水溫計(jì)2支，10 cm×20 cm涂有墨汁的黑色紙板5塊，塑料缸2口，食鹽1 000 g。

（2）待檢牛（羊）糞樣，牛200～300 g，山羊45～80 g。家畜血吸蟲病糞樣送檢登記卡。

1.2 方法

（1）洗糞水。洗糞水在孵化前1 d準(zhǔn)備充足，河水、井水先用備好的兩層紗布中間夾一層脫脂棉，放在篩萁上將水過(guò)濾于塑料缸中，并在水中加入30%氯漂白粉，比例按每50 kg加0.39 g；如用自來(lái)水，應(yīng)將水存放于容器中20 h，使氯元素逸出后備用。

（2）編號(hào)。糞缸用記號(hào)筆編號(hào)。被檢牛（羊）糞樣依次放在預(yù)先排列好的糞缸旁，一糞三檢，做好登記。糞篩、筷子放入糞缸中，加入洗糞水約650 mL。

（3）洗糞。三人一組，檢查人員將糞樣按量挑入糞篩中攪動(dòng)淘洗（注：牛糞>80 g，羊糞>15 g），淘洗到可以看到糞樣中的粗纖維為止。

（4）沉淀?yè)Q水。第一次為30 min；第二次為20 min，第三次10 min。從第一次起，每次待糞渣下沉后，倒出上層糞汁1/3；第二次為上層糞水一半。

（5）孵化。第二次換水后加入孵化水。孵化水用家庭飲用純凈水。將純凈水加滿糞缸后沉淀10 min，蓋上蓋。蓋上前每支試管在離試管口4～6 cm處套上橡皮筋以作固定。防止因糞缸蓋中央圓孔與試管不合而滑落糞缸中。將純凈水加入試管中，用右手食指和中指夾住試管，大拇指堵住試管口，成為密封狀態(tài)，使試管為倒立狀態(tài)，將帶有試管蓋的試管放入糞缸中，并輕輕移開大拇指，使糞缸中糞水頂托住試管中的純凈孵化水。這樣試管雖然是倒立于糞缸中，但試管水仍是清亮的。然后將已合好蓋子的糞缸移到平面臺(tái)子上（如木桌子、鋪板、乒乓球臺(tái)）進(jìn)行孵化觀察。

（6）觀察毛蚴。糞缸已沉淀蟲卵孵化1～3 h后，在孵化水溫適宜時(shí)，毛蚴開始從卵中逸出。毛蚴有較強(qiáng)的向光性，均向試管清水中集中做左右上下直線運(yùn)動(dòng)。觀察時(shí)需將涂有墨汁的黑色紙板置于試管前方，成為黑色背景有助于觀察。毛蚴呈梭形，灰白色，即便是一個(gè)毛蚴在試管中運(yùn)動(dòng)也易于發(fā)現(xiàn)。

2 注意事項(xiàng)

（1）用糞量要足。用一糞三檢，每個(gè)糞樣牛不得少于300 g，羊不得少于45 g。應(yīng)收集新鮮糞便。

（2）洗糞盡量將蟲卵洗入糞缸中，羊糞洗糞時(shí)用鑷子夾碎，倒水應(yīng)輕倒上部糞汁，以免將蟲卵倒掉，且只能倒掉1/3糞水。

（3）做到一糞缸一糞篩-雙筷子，切不可交叉使用。

（4）孵化診斷結(jié)束后糞缸、糞篩、筷子應(yīng)消毒清洗后再用。

（5）觀察毛蚴時(shí)應(yīng)分組按洗糞換水先后順序觀察。觀察時(shí)間為加蓋后1、2、3 h，每一試管觀察時(shí)間不少于2 min。且眼睛不要移動(dòng)。

（6）孵化臺(tái)應(yīng)設(shè)在光線充足的地方。

（7）夏季水溫高于15 ℃時(shí)，為延緩毛蚴過(guò)早逸出，孵化水應(yīng)加入1.0%～1.2%鹽水。

（8）個(gè)別獸醫(yī)由于責(zé)任心不強(qiáng)，將一牛糞便分成多樣送檢，采血時(shí)，將一牛血液分成多份血樣送檢或采集陳舊糞樣，直接影響診斷結(jié)果。應(yīng)加以重視。

3 結(jié)果與分析

由表1、表2可見(jiàn)，2006-2008年共血檢耕牛 28 151頭，山羊8 686只。糞檢耕牛7 744頭、山羊 2 038只，耕牛感染率下降了4.92個(gè)百分點(diǎn)，山羊感染率下降了6.0個(gè)百分點(diǎn)。

4 討論

診斷家畜血吸蟲病的方法很多，實(shí)踐中大范圍內(nèi)普查診斷可采用斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾法（DIGFA），該方法省時(shí)、省工、易操作，可作為血檢的首選。但血檢也有其不足之處。一是評(píng)判失誤（誤判），出現(xiàn)假陽(yáng)性。二是因疫區(qū)家畜接觸疫水而重復(fù)感染，重復(fù)治療。牛（羊）體內(nèi)已沒(méi)有成蟲（但體內(nèi)有抗體），血檢時(shí)仍呈陽(yáng)性反應(yīng)，因而糞檢是最準(zhǔn)確的診斷手段。經(jīng)多次血檢呈陽(yáng)性反應(yīng)而糞檢為陰性的家畜，筆者沒(méi)有統(tǒng)計(jì)。病畜體內(nèi)產(chǎn)生了抗體，糞檢為陰性的家畜，在后續(xù)不感染的情況下，其體內(nèi)抗體衰減規(guī)律有待研究。陽(yáng)新縣血吸蟲病經(jīng)過(guò)多年的查治，其感染強(qiáng)度逐年減弱。檢查過(guò)程中要注意，糞便孵化中，糞樣量應(yīng)相對(duì)增加。每頭牛糞樣量應(yīng)采集200～300 g，山羊45～80 g，一糞三檢，一年兩次（春、秋），可提高檢出率。此外，由于糞樣蟲卵少，孵化后試管中毛蚴只有1～3只，因此化驗(yàn)人員要有過(guò)硬的技術(shù)和高度的責(zé)任心，仔細(xì)觀察。血吸蟲病防治是以政府主導(dǎo)、多部門協(xié)作，多手段并用的一項(xiàng)系統(tǒng)工程，按照我國(guó)血吸蟲病控制和阻斷標(biāo)準(zhǔn)，只有人畜同步防治，認(rèn)真落實(shí)國(guó)務(wù)院各項(xiàng)防治措施，保證各項(xiàng)防治經(jīng)費(fèi)落實(shí)到位，才能最終消滅血吸蟲病。