一例進行性對稱性紅斑角化癥GJB2基因突變分析

楊銘華+李常興+梅曉珍

【摘要】 目的 對一例進行性對稱性紅斑角化癥（Progressive symmetric erythrokeratodermia，PSEK）患者GJB2、GJB3、GJB4、GJB6、GJA1及SERPINB7基因突變進行檢測。

方法 采用聚合酶反應（PCR）擴增GJB2、GJB3、GJB4、GJB6、GJA1及SERPINB基因所有的外顯子及其鄰近的剪切點并進行直接測序。

結果 PSEK患者的GJB2基因存在雜合突變，核苷酸序列第608位發生錯義突變，堿基由T突變成C，GJB2基因編碼的蛋白第203位的異亮氨酸轉換成蘇氨酸突變；GJB3、GJB4、GJA1、GJB6及SERPINB基因未發現突變；患者家庭成員未發現GJB2基因突變。

結論 GJB2基因突變可能是該例PSEK患者的致病基因。

【關鍵詞】 進行性對稱性紅斑角化癥；GJB2；基因；突變

中圖分類號：R758.61 文獻標識碼：A DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2017.03.004

【Abstract】 Objective To detect GJB2，GJB3，GJB4，GJB6，GJA1 and SERPINGB7 gene mutation in a case of progressive symmetric erythrokeratodermia（PSEK）.

Methods Polymerase chain reaction （PCR） was used to amplify all exons and adjacent shearing points of GJB2，GJB3，GJB4，GJB6，GJA1 and SERPINB genes，and they were sequenced directly.

Results Heterozygous mutations existed in the GJB2 gene of PSEK patients，and base changed from T to C.A missense mutation occurred at the 608th nucleotide sequence.The 203rd isoleucine converted into threonine mutant in protein encoded by GJB2 gene.And no mutations were found in GJB3，GJB4，GJA1，GJB6 and SERPINB genes，and no mutations in GJB2 gene were found in patients family members.

Conclusion Mutations in the GJB2 gene may be the causative gene in patient with PSEK.

【Key words】 PSEK；GJB2；gene；mutation

紅斑角化癥是皮膚科少見的單基因皮膚病，主要有兩種臨床亞型：（1）進行性對稱性紅斑角化癥（OMIM：602036；Progressive symmetric erythrokeratodermia，PSEK）；（2）可變性紅斑角化癥（OMIM：133200；Erythrokeratodermia variabilis，EKV）[1～3]。1911年，Darier首次報道并命名PSEK，PSEK又稱Gottron綜合征，是一種常染色體顯性遺傳病，但約有半數病例為散發病例，患兒出生時正常，一般在生后數月內發病，亦有延遲至17歲時發病。皮疹為紅色角化性紅斑或斑塊，對稱分布，好發于手掌、足跖、手腕、手足背、肘、踝、膝、臀和臉部等，一般無自覺癥狀與系統表現。病理學特征為輕度表皮增生伴致密角化過度和角化不全，可出現毛囊角栓，棘層增厚。本研究報道1例PSEK，測序發現該患者GJB2基因2號外顯子發生錯義突變c.608 T>C（Ile203Thr），現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集PSEK患者家系所有成員4人。先證者，男，16歲，2歲時于雙手掌、足底出現對稱性紅斑。當時未予處理，10歲時，皮疹開始增多，表現為對稱性紅斑、角化性斑丘疹、斑塊、脫屑，伴有異味，累及雙手掌、足底、手指等（圖1A，B）。冬天與夏天無明顯變化。真菌鏡檢未發現菌絲和孢子?；颊咦愕兹〔男薪M織病理學檢查：表皮網籃狀角化過度，顆粒層和棘層增厚；真皮淺層可見少量淋病細胞浸潤（圖1C）。透射電鏡示基底層細胞間隙增大（圖1D）。先證者父母是非近親婚配，父母和弟弟無類似臨床癥狀。

1.2 實驗方法

（1）采集患者、家系成員及100例健康對照者的靜脈血4 ml，用EDTA二鉀鹽抗凝。按照QIAGEN試劑盒操作規程抽提基因組DNA。（2）用Primer 5.0軟件設計能夠擴增GJB2、GJB3、GJB4、GJB6、GJA1及SERPINB7基因所有編碼外顯子和鄰近的剪切位點引物，擴增反應所需的引物的序列見表1。（3）PCR反應體系和擴增條件：PCR總反應體系為30 μL，包括10×緩沖液3 μL，正向與反向引物各1 μL，20 ng基因組DNA，2 μL dNTPs和0.2 μL Taq，模板2 μL，H2O 20.8 μL。PCR反應參數：預變性：96℃ 5 min；變性96℃ 20 s；退火55℃之間 3 min；延伸72℃ 1 min；最后終端延伸72℃ 5 min。（4）GJB2、GJB3、GJB4、GJB6、GJA1及SERPINB7基因突變分析。純化產物后用ABI 3730（Applied Biosystem）型DNA測序儀進行測序。PCR反應進行30個循環。

2 結 果

PESK家系GJB2基因測序結果顯示，患者的GJB2基因核苷酸序列第608位發生錯義突變，堿基由T突變成C，GJB2基因編碼的蛋白第203位的異亮氨酸轉換成蘇氨酸突變（p.Ile203Thr）。見圖2A。PESK家系無臨床表現者、100例正常對照者未發現GJB2p.Ile203Thr突變。見圖2B。該患者的GJB2突變為新生突變。PESK家系所有成員未檢測出GJB3、GJB4、GJB6、GJA1及SERPINB7基因突變。

3 討 論

PSEK的病因及發病機制目前尚未闡明。1997年Ishida-Yamamoto等的研究認為LOR是PSEK的致病基因[4～5]，但Richard等對LOR基因是PSEK的致病基因提出質疑，認為Ishida-Yamamoto等報道中患者的臨床診斷可能是Vohwinkel綜合征的魚鱗病亞型而非PSEK[6]。目前的研究顯示：EKV發病相關的基因還有連接蛋白30.3（Cx30.3）基因及連接蛋白31（Cx31）基因[2，7]。這些研究提示PSEK具有遺傳異質性。

本例患者的臨床表現為手掌、足底、手指等部位紅斑、斑塊伴角化，臨床符合PSEK，家系成員未發現類似臨床表型，組織病理學顯示致密的網籃狀角化過度，顆粒層、棘層增厚，真皮淺層可見少量炎癥細胞浸潤，透視電鏡示基底層細胞間隙增大，病理和超微病理表現符合PSEK。先證者的臨床及組織病理與Nagashima型掌跖角化癥表現相似[4～5]，Nagashima型掌跖角化癥是由SERPINB7基因突變引起[9]，我們對SERPINB7基因7個編碼外顯子測序，未發現變異位點，排除了Nagashima型掌跖角化癥的診斷。進一步對隙縫連接蛋白GJB2、GJB3、GJB4、GJB6及GJA1基因進行測序分析，發現GJB2基因核苷酸序列第608位發生錯義突變，堿基由T突變成C，GJB2基因編碼的蛋白第203位的異亮氨酸轉換成蘇氨酸突變，未發現GJB3、GJB4、GJB6、GJA1及SERPINB7基因突變位點?；颊吒改负偷艿芪窗l現GJB2 p.Ile203Thr突變位點，該突變位點與家系臨床表型共分離，因此，可以考慮該突變在該家系中起作用，該患者為新生突變。編碼連接蛋白26（Connexin 26，Cx26）的GJB2基因，有2個細胞膜外區，在內耳和皮膚組織均有表達。GJB2基因的突變會導致內耳和皮膚功能的損害，例如GJB2基因突變可以導致聾啞癥伴掌跖角化癥和KID綜合征[10～14]。

我們雖然確診了該例患者，但是尚未找到很好的治療方法，維甲酸類藥物如他扎羅汀及激素軟膏復方氟米松軟膏能改善患者的皮損，但停藥后容易復發，該類患者的治療有待進一步研究。

參 考 文 獻

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（收稿日期：2017-04-10 修回日期：2017-04-28）

（編輯：潘明志）