探討P16/Ki67蛋白檢測在宮頸上皮內瘤變診斷中的應用

周煥娣 黃小軍 夏燕卿

【摘要】 目的 探討P16/Ki67蛋白檢測在宮頸上皮內瘤變診斷中的應用價值。方法 16949例行宮頸液基細胞學檢查者作為研究對象， 全部細胞標本均行巴氏染色和P16及Ki67免疫細胞化學染色， 以宮頸活檢結果為金標準， 觀察P16及Ki67診斷結果。結果 16949例婦科細胞學檢查者中全部細胞標本均行P16免疫化學染色， 陰性14720例， 陽性2012例， 強陽性217例， 總陽性率13.67%。在改良液基細胞系統基礎上實施P16和Ki67蛋白檢測， 特異性明顯。P16和Ki67蛋白檢測的陽性表達率越高， CIN病變級別越高。結論 在宮頸上皮內瘤變的診斷中， 在改良液基細胞系統基礎上實施P16和Ki67蛋白檢測， 具有重要的應用價值， 可以明確CIN病變的分級， 提高診斷正確率， 降低漏診率， 為臨床治療提供科學的依據。

【關鍵詞】 宮頸上皮內瘤變;宮頸癌;P16;Ki67;應用價值

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.12.007

【Abstract】 Objective To investigate the application value of P16/Ki67 protein detection in the diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia. Methods A total of 16949 patients with thinprep cytologic test as study subjects. All cell specimens were stained with PAP staining， P16 and Ki67 immunocytochemistry. The cervical biopsy results were taken as the gold standard， and the diagnostic results of P16 and Ki67 were observed. Results In all 16949 cases of gynecological cytology， all the cell specimens were stained with P16 immunochemistry， with 14720 negative cases， 2012 positive cases， 217 strong positive cases， and the total positive rate was 13.67%. The detection of P16 and Ki67 proteins on the basis of a modified liquid-based cell system has obvious specificity. The higher the positive rate of P16 and Ki67 protein detection， the higher the CIN lesion level. Conclusion In the diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia， detection of P16 and Ki67 protein in modified liquid based cell systems shows important application value， and it can identify the classification of CIN lesions， improve the accuracy of diagnosis， reduce the rate of missed diagnosis， and provide a scientific basis for clinical treatment.

【Key words】 Cervical intraepithelial neoplasia; Cervical cancer; P16; Ki67; Application value

宮頸癌是中國女性常見腫瘤之一， 超過99%的宮頸癌都由高危型人乳頭瘤病毒（HPV）引起并導致P16INK4a和Ki67表達上調。從正常宮頸發生病變繼而進展到宮頸癌大約需8～12年[1， 2]。使用P16INK4a和Ki67作為輔助低度鱗狀上皮內病變（LSIL）和鱗狀上皮細胞高度病變（HSIL）診斷的分子生物學指標在組織學中具有高度特異性和敏感性。宮頸液基細胞學篩查目前已在臨床推廣應用多年， 取得了顯著的經濟效益， 然而以巴氏染色為基礎的篩查技術漏診誤診率較高， 從而延誤假陰性患者的最佳治療時機。所以急需發展一種技術降低假陰性率， 目前的研究顯示P16INK4a和Ki67在液基細胞標本中非特異性染色太強， 影響了其應用價值[3]。本研究旨在消除其非特異性染色并降低成本， 進而顯著地降低宮頸液基細胞學篩查的假陰性率， 從而低成本高效率的降低宮頸癌發病率和死亡率。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取東莞市第八人民醫院2015年2月～

2017年11月共16949例行宮頸液基細胞學檢查者作為研究對象， 取樣本， 使用改良液基細胞系統行巴氏染色和P16及Ki67免疫細胞化學染色， 以宮頸活檢結果為金標準， 觀察P16及Ki67診斷結果。其中婦科活檢、超高頻電波刀（LEEP刀）切除、宮頸錐切及子宮全切標本共2070例， 檢查結果：陰性1423例， 宮頸上皮內瘤變1級（CIN 1）或CNI 1～2級

533例， CIN 2級以上114例（包括21例浸潤性鱗癌）、腺癌及其它癌9例（宮頸原位及浸潤性腺癌、內膜腺癌、癌肉瘤、神經內分泌癌、透明細胞癌）。

1. 2 方法 ①細胞芯片制作。取標本中有效細胞制成2行×5列細胞芯片備用。②免疫化學染色。所用鼠單克隆抗體P16及試劑盒為安必平或邁新公司產品。

1. 3 觀察指標 觀察宮頸液基細胞標本中免疫細胞化學染色后陽性細胞的強度、數量。

2 結果

2. 1 P16檢驗結果 16949例婦科細胞學檢查者中全部細胞標本均行P16免疫化學染色， 陰性14720例， 陽性2012例， 強陽性217例， 總陽性率13.67%。見表1。

2. 2 不同程度宮頸病變的P16表達 2070例行宮頸病理檢查， 陰性142例（9.98%）， CIN 1～2級533例（100.00%）， CIN 2級以上114例（100.00%）。見表2。

2. 3 不同程度宮頸病變的Ki67表達 2070例行宮頸病理檢查， 陰性180例， 陽性指數<10（基層陽性）;CIN 1～2 級

533例， 陽性指數（65.00±8.32）;CIN 2級以上114例， 陽性指數（91.12±4.21）。見表3。

3 討論

P16是E2F轉錄因子的目標蛋白之一， 在宮頸上皮內瘤變當中， 是細胞生長周期失控的敏感的特異性指標[4]。在細胞學篩查的基礎上加染P16可以解決以上細胞學檢查的諸多問題， P16在組織學中對CIN病變具有高度特異性， 但在液基細胞學涂片中這種特異性卻消失， 當把液基細胞標本做成細胞蠟塊切片以后， 其特異性又回到組織學檢查的水平[5-7]。因此如果能在細胞涂片標本中就恢復其特異性， 就可以顯著降低病理醫生的工作量和誤診漏診風險， 也可以完全自動化和標準化， 降低篩查成本[8]。P16不僅有助于病理科醫生對CIN進行準確分級， 并且可以幫助臨床醫生更全面的認識癌前病變和宮頸癌的特點， 有助于對患者選擇更合理的方式， 降低宮頸癌發病率和死亡率[9]。因此， P16蛋白檢測在宮頸上皮內瘤變的診斷中具有重要的應用價值。

Ki67屬于一種增殖細胞的核抗原， 細胞增殖屬于基本的生物過程， 被高度協調機制所控制， 一旦調控機制出現錯誤， 將會導致人體出現腫瘤[10]。Ki67增殖指數的高低可以表示腫瘤的分化程度， 增殖指數越高， 表示患者病情越嚴重， 患者的生存時間越短[11]。聯合使用P16/Ki67蛋白檢測對宮頸病變患者進行診斷可以顯著提高診斷的正確率， 使患者及早發現， 及早治療。

參考文獻

[1] 楊君， 周德平， 王彬， 等. 宮頸上皮內瘤變組織中P16蛋白表達與HR-HPV病毒載量的相關性研究. 實用婦產科雜志， 2014， 30（1）：43-45.

[2] 周莉， 孔敏， 李海霞， 等. p16在宮頸癌組織中的表達及臨床意義. 中國實驗診斷學， 2013， 17（9）：1614-1616.

[3] 張燕， 王一， 王建華， 等. p16、Ki-67在440例宮頸病變中的表達及其病理診斷價值. 診斷病理學雜志， 2013， 20（3）：171-175.

[4] 張濤， 毛世華， 唐良萏， 等. 宮頸上皮內瘤變及早期宮頸癌組織中P16、HPVL-1殼蛋白的表達及與HR-HPV載量相關性研究. 實用婦產科雜志， 2016， 32（7）：536-539.

[5] 王海瑞， 廖光東， 陳汶， 等. p16/Ki-67免疫細胞化學雙染在宮頸癌篩查中的應用價值. 中華腫瘤雜志， 2017， 39（8）：636-640.

[6] 張王亮. P16、Ki-67聯合半定量評分在宮頸上皮內瘤變分級診斷中的應用及其HPV感染的關系. 山西醫科大學， 2015.

[7] 王曉平， 馬德云， 張朝棟，等. P16、Ki67蛋白表達及HPV檢測在宮頸低級別上皮內瘤變轉歸中的價值研究. 齊齊哈爾醫學院學報， 2017， 38（12）：1447-1449.

[8] 雷明. P16、Ki67細胞學檢測在宮頸上皮內瘤變分級診斷中的應用. 吉林大學， 2016.

[9] 黃文瑜， 伍毓強， 林穎. P16蛋白檢測對宮頸上皮內瘤變及宮頸癌診斷的臨床價值研究. 中國醫師雜志， 2015， 17（2）：262-263.

[10] 陳鋇. P16/Ki67雙染在宮頸上皮內瘤變篩查及診斷中的價值. 中國臨床醫生雜志， 2017， 45（8）：89-92.

[11] 胡艷. P16/Ki67蛋白檢測（cintec plus雙染技術）在宮頸上皮內瘤變的診斷及宮頸癌篩查中應用價值探討. 浙江大學， 2016.

[收稿日期：2017-12-13]