丹七軟膠囊脂溶性成分的GC—MS指紋圖譜研究

龐穎 劉漢偉 高峰 楊健

中圖分類號 R283.6 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2018）06-0766-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.06.11

摘 要 目的：建立丹七軟膠囊脂溶性成分的氣相色譜-質譜（GC-MS）指紋圖譜。方法：采用GC-MS 法。色譜柱為DB-5 ms毛細管色譜柱，載氣為高純度氦（99.999%），程序升溫，流速為1.0 mL/min， 進樣口溫度為250 ℃，進樣量為1 μL，分流比為1 ∶ 40，分流進樣；電離方式為電子轟擊離子源，離子源溫度為280 ℃， 接口溫度為300 ℃，電子能量為 70 eV，溶劑延遲時間為3 min，質荷比（m/z）為50～550。以棕櫚酸乙酯為參照，測定11批樣品的GC-MS圖譜，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統》（2004 A版）進行相似度評價，確定共有峰，并采用LC Solution 2工作站標準質譜圖庫（NIST05.LIB和NIST05s.LIB）確定共有峰成分。結果：11批樣品相似度均大于0.90；經驗證，11批樣品的GC-MS圖譜均與對照圖譜具有較好的一致性。11批樣品的GC-MS圖譜有49個共有峰，鑒定出38個化學成分（占總峰面積的94.94%）。結論：所建指紋圖譜可為丹七軟膠囊質量評價提供參考。

關鍵詞 丹七軟膠囊；脂溶性成分；氣相色譜-質譜聯用；指紋圖譜

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish GC-MS fingerprints of liposoluble constituents from Danqi soft capsule. METHODS： GC-MS method was adopted. GC chromatogram column was DB-5 ms capillary column with high purity helium （99.999%） as carrier gas at the flow rate of 1.0 mL/min， with temperature programming. The injector temperature was 250 ℃.The sample size was 1 μL. The shunt ratio was 1∶40， with distributary injection. Ionization mode was as follows as electron bombardment ion source， ion source temperature of 280 ℃， injector temperature of 300 ℃， electronic energy of 70 eV， solvent delay time of 3 min， mass charge ratio （m/z） of 50-550. Using ethyl palmitate as reference， MS spectrums of 11 batches of samples were determined. Similarity evaluation was conducted by using TCM Fingerprint Chromatogram Similarity Evaluation System （2004 A edition） to determine common peak. The common peaks were determined by LC Solution 2 workstation standard mass spectrometry Library （NIST05.LIB or NIST05s.LIB）. RESULTS： The similarity of 11 batches of samples was higher than 0.90. After validation， GC-MS chromatograms of 11 batches of samples were in good agreement with control fingerprint. There were 49 common peaks in GC-MS chromatogram， and 38 chemical constituents were identified， accounting for 94.94% of total peak areas. CONCLUSIONS： Established fingerprint can provide evidence for quality evaluation of Danqi soft capsule.

KEYWORDS Danqi soft capsule； Liposoluble constituents； GC-MS； Fingerprint

丹參、三七（合稱“丹七”）是臨床常用中成藥的重要組成部分。丹七軟膠囊，系在普通丹七片的基礎上對其制備方法進行科學改良而成，并獲得了國家知識產權局頒發的丹七軟膠囊制備方法發明專利證書（證書公開號：CN17624A）。其具有活血化瘀、通脈止痛之功效，多用于瘀血閉阻所致的胸痹，癥見胸部刺痛、痛處固定、眩暈頭痛、經期腹痛等，廣泛應用于心內科、神經內科、骨傷科、婦科、眼科等屬“血瘀證”范疇疾病的治療[1-4]。目前，對丹七類藥物的研究主要集中于其極性部位，尚未見對該類藥物脂溶性成分的圖譜研究。有研究報道，三七藥材中脂溶性成分對大腦和延髓具有一定的抑制作用，可鎮靜、安神[5-6]，其中α-松油醇還具有抑菌作用[7-8]；丹參藥材中脂溶性成分β-石竹烯、β-欖香烯、δ-欖香烯和α-蛇麻烯等對腫瘤有抑制作用，是具有化療潛力的活性成分[9-10]。為準確反映丹七軟膠囊的內在品質，本研究首次對其中的脂溶性成分進行了探討，建立了氣相色譜-質譜（GC-MS）指紋圖譜，以期為該類藥物的質量控制及其有效成分的研究提供參考。

1 材料

1.1 儀器

TRACE 1310/TSQ 8000型GC-MS儀（美國Thermo公司）；BS210S型十萬分之一電子分析天平（北京賽多利斯天平有限公司）。

1.2 藥品與試劑

丹七軟膠囊[北京長城制藥廠，批號：13110105、13110215、14080101、14080102、14090101、14090102、14100101、14100102、14110101、14110102、14110113（編號為S1～S11），規格： 0.6 g/粒]；棕櫚酸乙酯對照品（批號：B21707-20160325，純度：≥98%）、硅藻土（批號S30557-201603）均購自上海源葉生物科技有限公司；試驗所用試劑均為分析純，水為純化水。

1.3 藥材

丹參、三七藥材均購自河北安國藥市，經中國中醫科學院中藥研究所唐仕歡副研究員鑒定為真品。

2 方法與結果

2.1 試驗條件

2.1.1 GC條件 色譜柱：DB-5 ms毛細管色譜柱（30 mm × 0.25 mm，0.25 μm）；載氣：高純度氦（純度：≥99.999%）；流速：1.0 mL/min；程序升溫：起始溫度 40 ℃，保持 1 min，以 4 ℃/min的速度升至 220 ℃，以 50 ℃/min的速度升至 280 ℃，保持 5 min；進樣口溫度： 250 ℃；進樣量：1 μL；分流比：1 ∶ 40，分流進樣[11-12]。

2.1.2 MS條件 電離方式：電子轟擊離子源；離子源溫度：280 ℃； 接口溫度：300 ℃；電子能量：70 eV；溶劑延遲時間：3 min；荷質比（m/z）：50～550。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 取棕櫚酸乙酯對照品適量，置于10 mL量瓶中，加乙醇溶解并定容，即得。

2.2.2 供試品溶液 取樣品內容物 2.0 g，精密稱定，加入約0.5 g硅藻土，研勻，置于100 mL圓底燒瓶中，加乙酸乙酯 25 mL，回流提取 1 h，放至室溫，濾過，取濾液加乙酸乙酯定容至 25 mL，搖勻，經0.22 μm 微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.3 方法學考察

2.3.1 精密度試驗 取“2.2.2”項下供試品溶液（批號：14110113）適量，按“2.1”項下試驗條件連續進樣測定6次，以棕櫚酸乙酯峰的保留時間和峰面積為參照，記錄各共有峰相對保留時間和相對峰面積。結果，13個共有峰相對保留時間和相對峰面積的RSD為0.13%～1.95%（n=6），表明方法精密度良好。

2.3.2 穩定性試驗 取“2.2.2”項下供試品溶液（批號：14110113）適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、12、16 h時按“2.1”項下試驗條件進樣測定，以棕櫚酸乙酯峰的保留時間和峰面積為參照，記錄各共有峰相對保留時間和相對峰面積。結果，13個共有峰相對保留時間和相對峰面積的RSD為 0.46% ～ 2.62%（n=6），表明供試品溶液室溫放置16 h內基本穩定。

2.3.3 重復性試驗 精密稱取樣品（批號：14110113）內容物適量，共6份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下試驗條件進樣測定，以棕櫚酸乙酯峰的保留時間和峰面積為參照，記錄各共有峰相對保留時間和相對峰面積。結果，13個共有峰相對保留時間和相對峰面積的RSD為0.26%～2.02%（n=6），表明本方法重復性良好。

2.4 GC-MS指紋圖譜的生成、相似度及共有峰相關數據分析

2.4.1 GC-MS指紋圖譜的生成 取11批樣品內容物各適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下試驗條件進樣測定，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統》（2004 A版）對11批樣品的GC-MS圖譜進行分析，得GC-MS指紋圖譜，詳見圖1、圖2。

2.4.2 相似度分析 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統》（2004 A版），以樣品共有模式為對照，進行整體相似度評價。結果顯示，11批樣品相似度均大于0.90，表明各樣品間差異較小、質量穩定性良好，詳見表1。

2.5 GC-MS指紋圖譜中共有峰的歸屬和指認

采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統》（2004 A 版）對11批樣品的GC-MS圖譜進行比較分析。11批樣品有49個共有峰，確定25號峰為棕櫚酸乙酯，其峰面積較大，為所有藥材樣品共有，因此以25號峰為參照峰，根據共有峰的保留時間和通過檢索LC Solution 2工作站標準質譜圖庫（NIST05.LIB和NIST05s.LIB）對比相關質譜圖，鑒定出 38 個化合物（占總峰面積的94.94%）并指認其歸屬，詳見表2。

3 討論

本試驗采用GC-MS法對丹七軟膠囊脂溶性成分進行指紋圖譜研究，為了更好地反映其脂溶性成分，筆者對提取條件和分析條件（色譜條件和質譜條件）進行了多次優化。同時，考察了正己烷、石油醚、二氯甲烷、乙醚和乙酸乙酯在樣品超聲和回流提取后的提取效率，結果表明乙酸乙酯提取最為完全、出峰數最多，故選擇其作為提取溶劑。本試驗采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統》（2004 A版）生成了丹七軟膠囊脂溶性成分指紋圖譜的共有模式，計算了11批樣品的GC-MS指紋圖譜的相似度，結果均大于0.90，表明與對照圖譜具有較好的一致性；且各色譜峰相對保留時間穩定，說明本方法所建立的指紋圖譜具有較好的穩定性和可控性。

本研究同時對丹七軟膠囊脂溶性成分指紋圖譜進行了指認，得到49個共有峰，其中13個峰占總峰面積的71.71%（以13個峰進行方法學考察），38個峰占總峰面積的94.94%（鑒定38個峰化合物成分）。

綜上所述，本研究所建指紋圖譜可為丹七軟膠囊的真偽鑒別和質量評價提供參考。

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（收稿日期：2017-05-09 修回日期：2017-07-07）

（編輯：張 靜）