血液中乙醇含量測定-異丁醇內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法

薛烽

摘 要：目的：建立用異丁醇作為內(nèi)標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線定量法來測定血液中的乙醇含量，并與方法GA/T 1073-2013進(jìn)行比較。方法：用頂空進(jìn)樣器-氣相色譜聯(lián)用儀，采用內(nèi)標(biāo)工作曲線法的定量方式分析血液中乙醇含量[1-2]。結(jié)果：用本方法測得的乙醇加標(biāo)回收率為97.8～104.5%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.5%以內(nèi)，一元性回歸方程式的相關(guān)系數(shù)r>0.999。結(jié)論：用該法分析血液中的乙醇含量準(zhǔn)確度和精密度均能滿足要求，內(nèi)標(biāo)物的適用性更廣泛。

關(guān)鍵詞：乙醇;血液;異丁醇;內(nèi)標(biāo)-標(biāo)準(zhǔn)曲線;氣相色譜

中圖分類號：O657 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1671-2064（2019）23-0210-02

血液中的乙醇含量測定目前現(xiàn)有的方法是GA/T 1073- 2013和GA/T 842-2019，采用的內(nèi)標(biāo)物均為叔丁醇，但是筆者在實(shí)際運(yùn)用中發(fā)現(xiàn)：冬天溫度低的時候，叔丁醇是固體狀態(tài)，配制內(nèi)標(biāo)液的時候需要加熱等候很長時間才能將固體狀的叔丁醇完全轉(zhuǎn)化成液體狀，給稱量或移取帶來不便。經(jīng)過查證發(fā)現(xiàn)，叔丁醇的熔點(diǎn)為25.7℃，這是導(dǎo)致叔丁醇在冬天氣溫較低時會處于固體狀態(tài)或固液混合狀態(tài)，因此筆者的想法時尋找熔點(diǎn)較低的化合物來替代作為內(nèi)標(biāo)，根據(jù)GA/T 1073-2013，其不但可以測試乙醇含量，還用于測試甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、異丙醇和正丁醇，因此內(nèi)標(biāo)物的選擇需要避開以上化合物，經(jīng)過尋找，筆者找到了異丁醇，其熔點(diǎn)為-108℃，溶解性：溶于約20倍的水，與乙醇和乙醚混溶，因此筆者認(rèn)為異丁醇比較適合作為內(nèi)標(biāo)物。

1 材料與方法

1.1 儀器

Aglient氣相色譜7890B、Aglient頂空進(jìn)樣器7697A、Eppendorf移液器（20-200μL和100-1000μL）、頂空進(jìn)樣瓶（10mL，配有鋁帽及密封墊）。

1.2 試劑

乙醇系列標(biāo)準(zhǔn)品（Cerilliant進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品）、異丁醇（國藥集團(tuán)沃凱>99.5%）、叔丁醇（阿拉丁>99.5%）、蒸餾水（屈臣氏）、血液樣品。

1.3 試劑配制

1.3.1 內(nèi)標(biāo)物溶液

用移液器移取623.5μL的異丁醇（密度0.806g/mL，純度99.5%）于一預(yù)先裝有適量蒸餾水的100mL容量瓶中，再用蒸餾水定容至刻度，搖勻，得濃度為5mg/mL的正丁醇內(nèi)標(biāo)儲備液（A溶液），再將A溶液用蒸餾水稀釋成4mg/100mL（B溶液）。

1.3.2 乙醇標(biāo)準(zhǔn)品

市售，濃度為10mg/100mL、20mg/100mL、50mg/100mL、80mg/100mL、100mg/100mL、200mg/100mL、300mg/100mL。

1.4 實(shí)驗(yàn)條件

1.4.1 頂空進(jìn)樣器條件（如表1）

1.4.2 氣相色譜條件（如表2）

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

用移液器分別移取500μL的異丁醇內(nèi)標(biāo)物溶液（B溶液）于7個10mL頂空瓶中，再向這7個頂空瓶中分別移取100μL的10mg/100mL、20mg/100mL、50mg/100mL、80mg/100mL、100mg/100mL、200mg/100mL、300mg/100mL乙醇標(biāo)準(zhǔn)品，用硅膠墊和鋁帽密封，混勻。置于頂空進(jìn)樣器中，按1.4條件進(jìn)樣分析。以待測組分（乙醇）和內(nèi)標(biāo)物（異丁醇）的峰面積之比作為縱坐標(biāo)，以待測組分（乙醇）和內(nèi)標(biāo)物（異丁醇）的含量之比作為橫坐標(biāo)，制作內(nèi)標(biāo)工作曲線。

1.5.2 樣品測定

用移液器分別移取100μL的全血樣品和500μL的異丁醇內(nèi)標(biāo)物溶液（B溶液）于一個10mL頂空瓶中，用硅膠墊和鋁帽密封，混勻，置于頂空進(jìn)樣器中，按1.4條件進(jìn)樣分析。據(jù)待測樣品中乙醇和異丁醇的峰面積之比，即可在工作曲線上查出待測樣品中乙醇的濃度，進(jìn)而得出待測樣品中乙醇的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 方法的可行性

從圖1可知，乙醇的出峰時間為1.708min，異丁醇的出峰時間為4.496min，實(shí)驗(yàn)條件能達(dá)到分離效果，實(shí)驗(yàn)方法可行。

2.2 內(nèi)標(biāo)工作曲線的建立

乙醇/異丁醇峰面積之比-乙醇/異丁醇含量之比對照表見表3;內(nèi)標(biāo)工作曲線見圖2。

2.3 加標(biāo)回收

向空白血液中加入適量乙醇，分別制得乙醇含量為20mg/100mL和80mg/100mL的血液樣品，用此方法測其乙醇含量，結(jié)果如表4。

2.4 精密度

隨機(jī)抽取一血液樣品，按此方法重復(fù)分析6次，得出6個乙醇含量結(jié)果，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差如表5。

3 結(jié)語

應(yīng)用異丁醇作為內(nèi)標(biāo)測定血液中乙醇含量，加標(biāo)回收率為97.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.35%，滿足測試要求，異丁醇代替叔丁醇作為內(nèi)標(biāo)的適用性更廣泛，特別是當(dāng)室溫比較低時，異丁醇不會出現(xiàn)叔丁醇凍結(jié)的狀態(tài)，方便了檢測人員的操作。

參考文獻(xiàn)

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[2] 陳君，彭峰.氣相色譜法直接測定血液中乙醇的含量[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7（5）：418-419.