利咽解毒方加減對口腔黏膜下纖維化患者CCR2、TLR2水平的影響

禹潔 彭濤 左巧娟 謝圣發 譚勁

〔摘要〕 目的 探究利咽解毒方加減對口腔黏膜下纖維化患者趨化因子CCR2、Toll樣受體2（TLR2）表達的影響。方法 選取2019年3月至2020年3月于湖南中醫藥大學第一附屬醫院接受治療的口腔黏膜下纖維化患者114例，隨機分為常規治療組、利咽解毒方組，每組 57例，常規治療組患者使用西藥進行治療，利咽解毒方組在常規治療組治療基礎上使用利咽解毒方加減進行治療。對比兩組患者張口度、病變面積、中醫證候評分，免疫透射比濁法檢測GSH-Px、LPO、MDA水平，酶聯免疫吸附實驗法檢測hs-CRP、IL-17、TGF-β1水平，檢測兩組患者血液流變學指標血漿黏度（PV）、纖維蛋白原（FIB）、高切全血黏度（HS），Western blot法檢測CCR2、TLR2表達，對比兩組治療有效率。結果 治療后，與常規治療組相比，利咽解毒方組張口度較高，病變面積較小，中醫證候評分較低（P<0.05），且兩組較治療前均有改善。治療后，與常規治療組相比，利咽解毒方組GSH-Px水平較高，LPO、MDA、hs-CRP、IL-17、TGF-β1、CCR2、TLR2及血液流變學指標PV、FIB、HS水平較低（P<0.05）。與常規治療組相比，利咽解毒方組患者治療總有效率較高（P<0.05）。與治療前比較，兩組治療后上述指標均得到改善（P<0.05）。結論 利咽解毒方加減可使口腔黏膜下纖維化患者張口度受限狀況明顯緩解，病變面積縮小，炎癥反應、氧化應激損傷明顯減輕，血液流變學明顯改善，CCR2、TLR2表達下調，治療效果顯著。

〔關鍵詞〕 口腔黏膜下纖維化;利咽解毒方;炎癥反應;血液流變學;氧化應激

〔中圖分類號〕R276? ? ? ?〔文獻標志碼〕B? ? ? ?〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.04.021

〔Abstract〕 Objective To explore the effect of modified Liyan Jiedu Formula on the expression of chemokines CCR2 and toll-like receptor 2 （TLR2） in patients with oral submucous fibrosis. Methods A total of 114 patients with oral submucous fibrosis treated in The First Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine from March 2019 to March 2020 were selected and randomly divided into conventional treatment group and Liyan Jiedu Formula group， with 57 cases in each group. Patients in conventional treatment group were treated with western medicine， while patients in Liyan Jiedu Formula group were treated with modified Liyan Jiedu Formula on the basis of conventional treatment group. The mouth opening， lesion area and traditional Chinese medicine （TCM） syndrome scores of the two groups were compared. The levels of GSH-Px， LPO and MDA were detected by immunity transmission turbidity. The levels of hs-CRP， IL-17 and TGF-β1 were detected by enzyme-linked immunosorbent assay. The hemorheological indexes plasma viscosity （PV）， fibrinogen （FIB） and high-cut whole blood viscosity （HS） of the two groups were detected. The expression of CCR2 and TLR2 was detected by Western blot， and the effective rates of the two groups were compared. Results After treatment， compared with the conventional treatment group， the Liyan Jiedu Formula group had higher mouth opening， smaller lesion area and lower TCM syndrome score （P<0.05）， and both groups showed improvement compared with before treatment. After treatment， compared with the conventional treatment group， the level of GSH-Px was higher， while the expression of LPO， MDA， hs-CRP， IL-17， TGF-β1， CCR2， TLR2 and hemorheological indexes PV， FIB and HS were lower in the Liyan Jiedu Formula group （P<0.05）. Compared with the conventional treatment group， the total effective rate of the Liyan Jiedu Formula group was higher （P<0.05）. Compared with before treatment， the above indexes were improved in both groups after treatment （P<0.05）. Conclusion Modified Liyan Jiedu Formula can significantly alleviate the mouth opening limitation in patients with oral submucous fibrosis， reduce the lesion area， alleviate the inflammation and oxidative stress injury， improve the hemorheology， down-regulate the expression of CCR2 and TLR2， and the treatment effect was significant.

〔Keywords〕 oral submucous fibrosis; Liyan Jiedu Formula; inflammatory reaction; hemorheology; oxidative stress

口腔黏膜下纖維化又稱口腔黏膜下纖維性變，是一種常見的發生于機體口腔部位的慢性進行性疾病，具有癌變傾向[1-2]。口腔黏膜下纖維化具有口腔黏膜發硬、發白、纖維條索等臨床癥狀，發病后主要臨床表現為口干、吞咽困難、張口受限等，對患者身體健康、生活質量造成嚴重的影響，因此，尋找一種安全有效的治療手段具有重要意義[3-4]。臨床常用的治療口腔黏膜下纖維化的手段為藥物治療，但是西醫藥物并不能徹底逆轉纖維化，治療效果并不理想，因此，許多專家學者開始致力于中醫藥治療口腔黏膜下纖維化的研究[5]。本研究通過觀察利咽解毒方加減對口腔黏膜下纖維化患者的治療效果，以期為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1? 臨床資料

選取2019年3月至2020年3月于湖南中醫藥大學第一附屬醫院接受治療的口腔黏膜下纖維化患者114例，按照隨機數字表法分為常規治療組、利咽解毒方組各57例。常規治療組包括男性患者32例，女性患者25例，年齡32～57（44.5±9.9）歲，病程1～3（2.2±0.7）年;利咽解毒方組包括男性患者35例，女性患者22例，年齡31～55（42.9±10.2）歲，病程1～3（2.1±0.8）年。兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。本研究所有患者及家屬均知情同意，并獲得我院倫理委員會批準。

1.2? 病例選擇

1.2.1? 診斷標準[3-4]? （1）自覺口腔黏膜有燒灼，尤其在進食刺激性食物時更明顯，可伴有黏膜水皰，潰瘍，味覺減退，口干，唇舌麻木等自覺癥狀，嚴重時出現張口受限，吞咽困難，舌運動障礙;（2）口腔黏膜呈蒼白色或灰白色病損，頰部、軟腭、唇部或翼下頜韌帶、舌背、舌腹口底等處可觸及瘢痕樣纖維條索，舌乳頭萎縮，病損區黏膜可伴有水皰，潰瘍，張口度變小;（3）病理檢查膠原纖維變性，上皮萎縮或增生，上皮層出現細胞空泡變性。

1.2.2? 納入標準? 所有患者均經我院檢查確診為口腔黏膜下纖維化，病歷資料齊全。

1.2.3? 排除標準? （1）病歷資料不全者;（2）接受過相關治療者;（3）對本研究所用藥物過敏者;（4）心肝腎等臟器功能障礙者;（5）口腔惡性腫瘤患者;（6）溝通障礙者。

1.3? 治療方法

常規治療組患者使用西醫藥物進行治療：15 mL醋酸潑尼松龍注射液+0.5 mL利多卡因注射液混合，肌肉注射。1～2次/d。利咽解毒方組在常規治療組的治療基礎上使用利咽解毒方加減進行治療，方劑組成：虎杖、生地黃各30 g，山茱萸、苦參各20 g，射干15 g，薄荷6 g。方劑加減：疼痛明顯加用全蝎、地龍;灼熱感明顯加用連翹、蒲公英;胃部不適加用砂仁，黏膜發白加用白芍。清水浸泡藥材0.5 h，加水煎1.5 h，取藥汁，1劑/d。兩組患者均連續治療1個月，觀察效果。

1.4? 觀察指標

1.4.1? 張口度、病變面積? 統計兩組患者治療前后張口度、病變面積變化情況。

1.4.2? 中醫證候評分? 對兩組患者黏膜發硬、發白、灼痛、纖維條索等中醫證候進行評分[6]，按照輕、中、重等不同嚴重程度分別計1、2、4分，評分越低說明患者中醫證候嚴重程度越輕。

1.4.3? 免疫透射比濁法檢測GSH-Px、LPO、MDA水平? 采集所有患者治療前后靜脈血5 mL，離心處理后-80 ℃環境中保存。準備3個試管，記為標準管、測定管、空白管，均添加緩沖液350 μL，標準管加入20 μL GSH-Px、LPO、MDA標準液，測定管中加入20 μL血清，空白管中加入20 μL蒸餾水，3個試管分別搖晃均勻，常溫環境靜置5～10 min后使用分光光度計進行比色，在500 nm波長處以空白管調零，記錄吸光度，對血清GSH-Px、LPO、MDA水平進行計算。

1.4.4? 酶聯免疫吸附實驗法檢測hs-CRP、IL-17、TGF-β1水平? 將血清置于室溫后，標記酶標板，制作標準品，然后取出試劑盒，以1∶2的稀釋液稀釋樣品;在反應孔上依次加入稀釋好的待測血清和標準品100 μL/孔，放置37 ℃恒溫孵育箱中濕育2 h;然后用專用的洗滌液將反應板清洗3次以后，再加入抗體工作液（1∶100倍稀釋）100 μL/孔，放于37 ℃恒溫孵育箱中濕育45 min;繼續清洗反應板4次后，在反應孔內加入TMB溶液100 μL/孔，置于37 ℃恒溫孵育箱中濕育45 min后在反應孔內加入終止液100 μL/孔終止反應，在450 nm波長測定吸光度，顏色反應深淺與hs-CRP、IL-17、TGF-β1水平成正比，經繪制標準曲線計算hs-CRP、IL-17、TGF-β1水平。

1.4.5? 血液流變學檢測? 使用血液流變動態分析儀對患者血液流變學變化情況進行檢測對比[7]，檢測指標包括血漿黏度（PV）、纖維蛋白原（FIB）、高切全血黏度（HS）。

1.4.6? Western blot法檢測CCR2、TLR2表達? 本研究主要采集患者頰部治療前后同一病變部位的口腔黏膜組織。使用PBS緩沖液對標本沖洗之后裂解30 min，測定蛋白濃度。取20 μg/孔蛋白質，添加蛋白緩沖液后進行電泳，10 min后將電轉膜置于10%的牛奶中浸泡，常溫環境下封閉90 min。結合一抗、（1∶1 000稀釋），孵育1 d，取出后使用TBST液沖洗，結合二抗，60 min后清洗、顯色，對治療前后的CCR2、TLR2相對表達量行檢測。

1.4.7? 療效評價標準[7]? 按照顯著療效、有效、無效的評價標準對患者治療效果進行評價。顯著療效：疼痛感、張口受限消失，病變面積縮小比例≥90%;有效：疼痛感、張口受限緩解，50%≤病變面積縮小比例<90%;無效：疼痛感、張口受限未緩解甚至加重，病變面積縮小比例<50%或未縮小。各組總有效率=（顯著療效病例+有效治療病例/該組病例總數）×100%。

1.5? 統計學處理

采用SPSS 21.0軟件進行統計分析。計量資料以“x±s”表示，組間及治療前后對比行t檢驗;計數資料采用？字2檢驗，以P<0.05差異具有統計學意義。

2 結果

2.1? 兩組患者張口度、病變面積變化情況

治療前，兩組患者張口度、病變面積比較，差異無統計學意義（P>0.05）;治療后，兩組患者張口度上升，病變面積下降（P<0.05）;與常規治療組相比，利咽解毒方組張口度較高，病變面積較小，差異具有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2? 兩組患者中醫證候評分對比

治療前，兩組患者各項評分比較，差異無統計學意義（P>0.05）;治療后，兩組患者各項評分均下降，且與常規治療組相比，利咽解毒方組各項評分較低，差異具有統計學意義（P<0.05）。見表2。

2.3? 兩組患者GSH-Px、LPO、MDA水平對比

治療前，兩組GSH-Px、LPO、MDA水平對比，差異無統計學意義（P>0.05）;治療后，與常規治療組相比，利咽解毒方組GSH-Px水平較高，LPO、MDA水平較低，差異具有統計學意義（P<0.05）。見表3。

2.4? 兩組患者hs-CRP、IL-17、TGF-β1水平比較

治療前，兩組hs-CRP、IL-17、TGF-β1水平對比，差異無統計學意義（P>0.05）;治療后，與常規治療組相比，利咽解毒方組hs-CRP、IL-17、TGF-β1水平較低，差異具有統計學意義（P<0.05）。見表4。

2.5? 兩組患者PV、FIB、HS水平比較

治療前，兩組PV、FIB、HS水平對比，差異無統計學意義（P>0.05）;治療后，與常規治療組相比，利咽解毒方組PV、FIB、HS水平較低，差異具有統計學意義（P<0.05）。見表5。

2.6? 兩組患者CCR2、TLR2表達比較

治療前兩組患者CCR2、TLR2表達比較，差異無統計學意義（P>0.05）;治療后，與常規治療組相比，利咽解毒方組CCR2、TLR2表達較低，差異具有統計學意義（P<0.05）。見表6和圖1。

2.7? 兩組患者治療療效比較

與常規治療組相比，利咽解毒方組患者治療總有效率較高，具有統計學差異（P<0.05）。見表7。

3 討論

口腔黏膜下纖維化作為一種臨床較為常見的口腔慢性疾病，多發于舌、咽、唇、頰、口底等部位，發病早期無明顯癥狀，病情發展至一定程度會導致患者張口受限、語言、吞咽障礙，且具有一定的癌變傾向，嚴重威脅患者身體健康[8-9]。近年來，我國口腔黏膜下纖維化發病率一直居高不下，因此，尋找一種安全有效的治療手段具有重要意義[10-11]。

中醫藥治療口腔黏膜下纖維化為臨床研究的重點方向[12-13]。中醫學認為，口腔黏膜下纖維化的發病機制為濕熱毒邪侵體，致使局部經絡運行不暢、氣滯血瘀，因此，臨床治療應以清熱解毒、活血化瘀為原則[14]。利咽解毒方由虎杖、薄荷、苦參、射干、生地黃、山茱萸等多味中草藥組成，其中苦參、虎杖、生地黃具有清熱、涼血、解毒的功效;薄荷、射干具有利咽的功效;山茱萸具有收斂創面的作用。本研究中利咽解毒方加減能夠促進患者口腔黏膜病變創面縮小，從而使患者張口受限狀況出現明顯緩解。

口腔黏膜下纖維化患者具有口腔黏膜發硬、發白、刺激痛、纖維條索等臨床癥狀，嚴重影響患者身體健康和生活質量[15]。本文研究結果顯示，使用利咽解毒方加減對口腔黏膜下纖維化患者進行治療，患者口腔黏膜發硬、發白、刺激痛、纖維條索等癥狀評分均出現明顯下降，說明利咽解毒方加減能夠有效減輕口腔黏膜下纖維化患者臨床癥狀嚴重程度，從而達到治療效果。

自由基的生成、清除所導致的氧化應激在口腔黏膜下纖維化發生發展過程中發揮重要作用，氧化應激產物在口腔黏膜下纖維化發展過程中十分重要[16-17]。GSH-Px、LPO、MDA水平變化情況與機體抗氧化防御系統的失衡、氧化應激損傷嚴重程度密切相關，檢測GSH-Px、LPO、MDA水平變化能夠對機體抗氧化能力進行評價。本研究結果顯示，利咽解毒方加減能夠調控患者GSH-Px、LPO、MDA水平，緩解患者口腔病變組織氧化應激狀態，從而發揮治療效果。

hs-CRP、IL-17是常用的炎癥因子，二者水平變化與機體炎癥反應密切相關。TGF-β1是廣譜的促纖維化細胞因子，在機體組織、細胞病理過程中具有重要作用，TGF-β1水平變化與機體免疫反應、細胞分化、組織纖維化具有密切聯系[18-19]。本研究結果顯示，使用利咽解毒方加減對口腔黏膜下纖維化患者進行治療，患者hs-CRP、IL-17、TGF-β1水平均出現明顯下降，說明使用利咽解毒方加減進行治療，能夠抑制患者病變組織炎癥反應、纖維化，治療效果顯著。

大量臨床研究[20]表明，口腔黏膜下纖維化的發生發展伴隨著機體血液流變學異常。本研究結果顯示，使用利咽解毒方加減對口腔黏膜下纖維化患者進行治療，患者PV、FIB、HS水平出現明顯下降，說明使用利咽解毒方加減進行治療，能夠改善患者血液流變學。

有研究[21-22]表明，CCR2、TLR2在口腔黏膜下纖維化中表達出現明顯異常，且CCR2、TLR2表達變化與口腔黏膜下纖維化病情嚴重程度密切相關。本研究結果顯示，使用利咽解毒方加減對口腔黏膜下纖維化患者進行治療，患者CCR2、TLR2表達明顯下調，進一步體現出利咽解毒方加減的臨床應用價值。

綜上所述，使用利咽解毒方加減對口腔黏膜下纖維化患者進行治療，患者張口度受限狀況明顯緩解，病變面積縮小，炎癥反應、氧化應激損傷明顯減輕，血液流變學明顯改善，CCR2、TLR2表達下調，為口腔黏膜下纖維化的臨床治療提供一定的參考依據。

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（本文編輯? 蘇? 維）