不同固定液在細胞蠟塊技術中的應用

黃麗芬 韋花媚 陸小嬋 曾冬云 黃海寧

摘要：目的 研究不同固定液在細胞蠟塊技術中的應用。方法 使用目前較為常見的三種不同的固定液對同一陽性涂片漿膜腔液體進行處理并制成細胞蠟塊，對細胞蠟塊開展HE染色以及免疫組織化學染色，通過對比三種不同固定液作用下的切片效果以及抗體標記情況，綜合分析其應用效果。結果 10%中性福爾馬林作為固定液時HE染色最為清晰，能夠看到完好的細胞形態，免疫標記定位情況準確;無水乙醇作為固定液時HE染色清晰度不佳，少部分細胞發生變性，免疫標記定位情況一般;甲醇作為固定液時HE染色清晰度不佳，大部分技術中的應用效果發現10%中性福爾馬林作為固定液的應用效果最好，可以作為制作細胞蠟塊的首選固定液。

關鍵詞：固定液;細胞蠟塊;應用效果

【中圖分類號】Q26 【文獻標識碼】A 【文章編號】1673-9026（2022）03--01

臨床上病理學診斷的常用方法為脫落細胞學檢查，即將脫落細胞學標本制成細胞蠟塊，通過觀察細胞形態以及免疫標記定位細胞的方法分析患者的病情，具有迅速、便捷、創傷小等優點，已成為病理檢查常規方式[1-2]。以往針對脫落細胞檢查，臨床多采取傳統細胞學涂片，該技術常因細胞量不足、細胞易出現退變、結構不清等因素，增加細胞學診斷難度[3-4]。目前薄層液基因細胞學檢查，雖可改善傳統細胞學的制片質量，但該檢查方式處理的細胞樣本不易獲得細胞排列方式與背景對照細胞，造成難以鑒別可疑與高分化癌細胞、反應性間皮細胞與間皮瘤[5]。近年來，隨著分子病理檢測技術、免疫組化抗體檢測不斷發展，體腔積液樣本可提供更多新型檢查方式，細胞蠟塊技術的應用顯著提升了病理診斷的敏感性與特異性，其可明確積液中細胞成分分化來源與性質，也可為后續相關檢測提供源源不斷的樣本數量，以此為靶向治療提供有效的理論依據，具有較為顯著的應用價值【6-7】，但細胞蠟塊制作使用的固定液種類較多，現在同一個標本上使用多種固定液制定細胞蠟塊，通過對比不同固定液下細胞蠟塊的切片效果以及抗體標記情況，綜合分析其應用價值。

1資料與方法

1.1一般資料

抽取2019年1月到6月間我院病理科腫瘤性胸腹水1例，選取細胞學涂片經過病理診斷確定可見癌細胞。

1.2方法

1.2.1細胞蠟塊制作方法

取適量細胞學涂片診斷可見癌細胞的腹水并使用三個尖底離心管各抽取50毫升，在3000r/min的轉速下進行3min的離心處理，將上層清液去除。針對細胞量較少的腹水可以進行多次離心處理，并保留沉淀物。針對血性標本，在制作細胞蠟塊前需要去除紅細胞，首先將血性標本放置在離心管內進行離心處理，將上層清液去除后加入適量冰醋酸酒精液不能并再次離心處理，離心完成后將上層清液去除并加入適量固定液（三個試管內分別加入不同的固定液）。加入固定液后混合均勻并放置一小時，使用吸管抽取離心管底部的細胞并放置在顯微鏡擦鏡紙上，包裝完成后放置在自動脫水機內進行組織處理，將處理好的組織塊進行常規石蠟包埋，制成細胞蠟塊。

1.2.2切片與烤片

細胞蠟塊在冰箱冷凍室內放置5到10分鐘后進行常規切片，切片的厚度為4um，最后在65攝氏度的烤箱內進行烤片1.5小時。

1.2.3 HE染色及免疫組織化學染色

對其中一張切片進行常規HE染色，其余切片則根據不同的需求進行免疫組織化學抗體染色。

2結果

2.1三種不同固定液作用下細胞蠟塊HE切片情況

10%中性福爾馬林作為固定液時HE染色最為清晰，顯微鏡觀察下能夠清楚的看到細胞的排列方式以及分布情況，細胞輪廓及形態清晰可見，腫瘤細胞與周圍的細胞形態學存在明顯差異。無水乙醇作為固定液時HE染色清晰度不佳，顯微鏡觀察下難以有效觀察細胞的排列方式以及分布情況，細胞輪廓及形態不易辨認，腫瘤細胞與周圍細胞的形態學之間存在一定差異。甲醇作為固定液時HE染色情況與95%乙醇類似，清晰度較低，難以有效辨別細胞形態，部分細胞發生變性，細胞核體積增大或者固縮。

2.2三種不同固定液作用下免疫組化標記結果

三種不同固定液作用下腫瘤細胞檢驗結果均為陽性，免疫標記定位效果最好的是10%中性福爾馬林作為固定液時的細胞切片，無水乙醇與甲醇作用固定液時細胞切片的染色效果以及免疫標記定位效果相對較差，但仍可辨認出腫瘤細胞。

3討論

腫瘤性胸腹水在臨床較為常見，主要是指發生在全身或腹腔中的腫瘤與（或）病變引起的胸腔、腹腔的臟層與（或）壁層胸腹膜發生彌漫性病變，進而造成體腔中液體異常增多的現象[8]。病理診斷中常用的細胞學制片方法有細胞涂片以及液基細胞學制片兩種，細胞涂片具有操作簡單，耗時短的優點，是幾乎所有病理科均常規開展的項目，但其采集細胞量較少，涂片過程中易出現厚薄不均的問題，因此細胞涂片下病理診斷的診斷效果受到多種因素的影響，出現誤診與漏診的概率較高。液基細胞學制片解決了細胞涂片中的常見問題，提升了制片的質量，但液基細胞學制片技術破壞了細胞排列方式，導致腫瘤細胞的鑒別難度增加，而且液基細胞學制片對醫療設備的要求較高，大部分的醫院尚未落實使用[9]。細胞蠟塊制作有效結合了上述兩種細胞學制片技術的優點，具有保存細胞新鮮、抗原保留完整等優點，在不破壞細胞排列方式的同時最大程度的提高了細胞采集量，且可進行多次切片，用于分子檢測、免疫組化染色、藥物分析、臨床實驗等，可顯著提高細胞學診斷陽性率，也可幫助判斷細胞來源、分型，是目前病理診斷的首選制片方法，有利于對患者預后進行評估。在該方法的幫助下，絕大程度上提升了細胞采集工作的綜合效率，可為病理性診斷的準確性以及科學性奠定有效基礎。

近年來，針對細胞蠟塊的制作方式已發現多種，且多數廠家也產出了細胞蠟塊制作試劑盒，但目前關于分析不同固定方法對細胞蠟塊制作效果影響的文獻較少。相關研究顯示，不同固定液會影響到細胞蠟塊的效果，目前臨床上使用較多的固定液有10%中性福爾馬林、無水醇以及甲醇三種，均屬于蛋白質變性劑，作為固定液使用具有良好的應用效果。甲醇還具有神經毒素，能夠在患者的體內積蓄，甲醛是生物遺傳誘變劑，部分學者認為甲醛還具有致癌作用。乙醇對人的損害，最重要的是中樞神經系統。它使神經系統從興奮到高度的抑制，嚴重地破壞神經系統的正常功能。現使用三種固定液對同一個細胞學標本進行細胞蠟塊制作，并綜合評估不同固定液在細胞蠟塊技術中的應用效果。研究結果顯示10%中性福爾馬林作為固定液時細胞蠟塊的染色效果最好，且不會引起細胞變性等問題，腫瘤細胞與周圍組織細胞之間存在明顯的形態學差異，給臨床醫師的鑒別診斷提供了準確有效的數據支持。相對而言，無水乙醇與甲醇作為固定液的細胞蠟塊HE染色效果較差，部分細胞發生變形而出現形態改變，但腫瘤細胞與周圍組織細胞之間仍具有特異性的形態學差異[10]。在制作細胞蠟塊過程中，使用10%中性福爾馬林固定離心后，細胞不易凝結在一起，不利于包埋，在此時應盡可能將試管中液體取出，使用吸管將細胞沉淀物吸出，放于玻片上，使用濾紙將周圍液體吸干，在細胞沉淀物上滴上幾滴無水醇，細胞沉淀凝固成塊，極易制作成細胞蠟塊，無水醇與12%中性福爾馬林兩者固定較為迅速，細胞極易結成塊，有助于細胞蠟塊制作。

綜上所述，10%中性福爾馬林作為細胞蠟塊的固定液具有更為顯著的應用價值，適宜推薦使用。

參考文獻：

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