食品中維生素B1測定

李建平

摘 要：隨著社會經濟快速發展，維生素B1（vitaminB1，VB1）又稱為硫胺素（thiamin），也可稱為抗神經炎因子（aueurin）。近年來的研究表明，VB1對于細胞的生長和發育、參與碳水化合物和能量代謝方面具有重要作用，同時在維持神經、肌肉特別是心肌的正常功能，以及維持正常食欲、胃腸蠕動和消化分泌中均扮演著不可或缺的角色。缺乏VB1在臨床上會導致心血管疾病和神經性障礙。然而，所有哺乳動物都不具備內源合成VB1的能力，同時人體內的VB1也不能大量儲存，必須通過外源食物的補充來維持體內的穩態。

關鍵詞：食品；維生素B1；測定

引言

采用高效液相色譜法檢測輔食營養補充品中維生素B1的含量。樣品在稀鹽酸介質中恒溫水解、中和后酶解，水解液用活性人造沸石凈化，凈化液用堿性鐵氰化鉀溶液衍生，正丁醇萃取后經C18反相色譜柱分離，用高效液相色譜-熒光檢測器檢測，外標法定量。通過優化前處理方式調整衍生液濃度以及樣品凈化的方式，本方法標準曲線相關系數≥0.999，加標回收率在95.2%～99.0%，保留時間穩定且重復性好，RSD值為1.0%，衍生液濃度在40～60g·mL-1，結果顯示本方法適用于檢測維生素B1含量較高的輔食營養補充品，減少雜質干擾結果準確度高。

1高效液相色譜原理

高效液相色譜其原理是單一或不同比例流動相經混合以后經高壓系統輸送，承載待測樣品迚入分離器，根據待測樣品在固定相和流動相之間的分配系數不同，相互作用力強弱，使待測樣品在兩相之間呈反復吸附-分離狀態，樣品中各成分運動速度不同，配以不同洗脫能力的流動相將待測樣品依次洗脫出來，經過檢測器，產生電信號，通過記錄儀解讀出待測樣品圖譜。根據待測樣品物理化學特性可選擇適當的檢測器，如紫外檢測器、示差檢測器、熒光檢測器及二極管陣列檢測器等。與傳統液相色譜相比，高效液相色譜可以更快速、高效、準確靈敏地對樣品迚行檢測，待測樣品僅5min即可完成檢驗。同時高效液相色譜檢測應用范圍相對更廣，現存的有機物中70%～80%都可以利用其迚行分析檢測。一般沸點高、熱穩定性差、分子量較大等有機物都可以用高效液相色譜迚行檢測。高效液相色譜對樣品的前處理及純化程度要求較高，易出現假陽性，采用高效液相質譜與質譜儀聯用，可有效解決假陽性問題幵能簡化樣品前處理工序，同時高效液相色譜法-串聯質譜法抗基質干擾能力強，定量定性靈敏度高，檢測效率快，可以更準確地對樣品迚行檢測和分析，在食品安全檢驗檢測領域具有廣泛應用，為食品安全檢測提供良好的技術支持。

2方法

樣品前處理--試液提取。準確稱取樣品約0.5g于50mL錐形瓶中，加入30mL0.1mol·L-1鹽酸溶液與樣品混勻，塞上軟塞放入高壓滅菌鍋120℃保持30min，水解結束待冷卻拿出。此時樣品水解液pH為2.0～2.5，用10g·L-1的氫氧化鈉溶液調至pH為4.5，加入2mL混合酶溶液（木瓜蛋白酶1.76g/50mL＋淀粉酶1.27g/50mL），搖勻后置于37℃培養箱中放置約16h，將酶解液轉至50mL比色管中，用水定容至刻度線，搖勻，離心取上清液備用，同時做空白試驗[4-6]。

樣品凈化。用少許脫脂棉鋪于層析柱底部，加水將棉中氣泡排出加入已活化好的活性人造沸石約8g（高度不低于45mm），液面不低于活性人造沸石。準確加入20mL上述樣品提取液，以流速1滴/s通過裝好的凈化柱，加入10mL近沸騰的熱水沖洗凈化柱，棄去淋洗液，如此重復2次。于層析柱下放置25mL比色管收集洗脫液，加入20mL溫度約為90℃的酸性氯化鉀洗脫溶液，流速保持1滴/s，待洗脫液冷卻至室溫后用250g·L-1酸性氯化鉀定容搖勻，即為凈化液。

試液衍生。準確移取上述凈化液2.0mL于10mL試管中，加入2.0mL堿性鐵氰化鉀溶液（分別加入20、30、40、60g·mL-1），渦旋混勻后，準確加入2.0mL正丁醇，再次渦旋混勻約2min后靜置10min，約樣品出現乳化現象應轉至離心管離心處理，待分層后取上層正丁醇萃取層經0.45μm有機微孔濾膜過濾至棕色進樣品中，待上機檢測。

3結果與分析

3.1不同檢測方法的對比與討論

GB5009.84—2016《食品安全國家標準食品中維生素B1的測定》規定了高效液相色譜法和熒光光度法2種不同的分析方法用于測定食品中VB1，其中高效液相色譜法規定樣品通過稀鹽酸介質恒溫水解、中和、酶解，水解液用堿性鐵氰化鉀衍生，正丁醇萃取，液相分離熒光檢測器定量，定量限為0.1mg/100g。其更適用于天然食品及簡單配方的保健食品，而用于例如多種維生素礦物質片樣品，則在樣品前處理階段無法避免各營養素之間的相互氧化還原反應，VB1的實測值不足理論添加量的一半，難以用于定量分析。同時其前處理步驟復雜，檢測效率較低。2020版《中國藥典》[22]則通過滴定法或紫外分光光度法進行VB1的含量測定，不僅同樣無法避免各營養素之間的相互干擾，同時定量限較高，無法滿足保健食品-復合營養素補充劑樣品中VB1的含量測定。

3.2精密度考察

儀器進樣精密度考察。針對對照品溶液和樣品溶液，分別重復6次進樣，記錄VB1主峰峰面積，考察色譜方法中的儀器精密度情況。結果發現對照品溶液的儀器精密度為0.42%；樣品溶液的儀器精密度為0.87%，說明此儀器方法精密度良好。

重復性考察。重復平行6次樣品前處理及儀器測定過程，分析同批次樣品中的VB1含量，以考察本方法的重復性。結果發現6次實驗的相對標準偏差（relativestandarddeviations，RSDs）為0.61%，說明本方法的重復性較好。

3.3耐用性考察

為了考察本儀器方法的耐用性，通過在小范圍內改變液相分析方法的柱溫和流速參數，按同樣的前處理方法測定多種維生素礦物質片樣品中的VB1含量。結果發現在流速變動±0.05mL/min以及柱溫變動±3℃的條件下，樣品溶液色譜圖中的VB1主峰峰型仍保持良好，與周圍雜質的分離度控制在1.35～2.78范圍內，主峰理論塔板數均在7200以上。達到基線分離要求而不影響定量分析，同時參數改變后計算的定量結果恒定，由此證明本方法耐用性良好。

結語

高效液相色譜在食品安全檢測斱面應用廣泛，収展迅速，在食品研収及檢測斱面應用日益成熟，近幾年專家學者致力于簡化實驗程序，提高檢測效率，擴大應用范圍，完善已有檢驗檢測斱法。維生素B1在檢測過程中易受水分、溫度、微量元素等各種因素的影響而降解，沸石具有較強的吸附性，樣品通過活化后的人工沸石凈化后，凈化提取液加入衍生檢測。

參考文獻：

[1] 張隆龍，王海燕，胡 越，等.高效液相色譜法測定嬰幼兒配方乳粉中的維生素B1、B2[J].食品安全質量檢測學報，2019（1）：129-134.

[2] 李丹.在線衍生高效液相色譜熒光光譜法測定食品中維生素B1[J].食品安全質量檢測學報，2018，9（20）：5445?5451.

[3] 高娜.高效液相色譜技術在食品檢測中的應用[C].《決策與信息》雜志社、北京大學經濟管理學院，2017.