食品中維生素B1測(cè)定

李建平

摘 要：隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展，維生素B1（vitaminB1，VB1）又稱(chēng)為硫胺素（thiamin），也可稱(chēng)為抗神經(jīng)炎因子（aueurin）。近年來(lái)的研究表明，VB1對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)和發(fā)育、參與碳水化合物和能量代謝方面具有重要作用，同時(shí)在維持神經(jīng)、肌肉特別是心肌的正常功能，以及維持正常食欲、胃腸蠕動(dòng)和消化分泌中均扮演著不可或缺的角色。缺乏VB1在臨床上會(huì)導(dǎo)致心血管疾病和神經(jīng)性障礙。然而，所有哺乳動(dòng)物都不具備內(nèi)源合成VB1的能力，同時(shí)人體內(nèi)的VB1也不能大量?jī)?chǔ)存，必須通過(guò)外源食物的補(bǔ)充來(lái)維持體內(nèi)的穩(wěn)態(tài)。

關(guān)鍵詞：食品；維生素B1；測(cè)定

引言

采用高效液相色譜法檢測(cè)輔食營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充品中維生素B1的含量。樣品在稀鹽酸介質(zhì)中恒溫水解、中和后酶解，水解液用活性人造沸石凈化，凈化液用堿性鐵氰化鉀溶液衍生，正丁醇萃取后經(jīng)C18反相色譜柱分離，用高效液相色譜-熒光檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。通過(guò)優(yōu)化前處理方式調(diào)整衍生液濃度以及樣品凈化的方式，本方法標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)≥0.999，加標(biāo)回收率在95.2%～99.0%，保留時(shí)間穩(wěn)定且重復(fù)性好，RSD值為1.0%，衍生液濃度在40～60g·mL-1，結(jié)果顯示本方法適用于檢測(cè)維生素B1含量較高的輔食營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充品，減少雜質(zhì)干擾結(jié)果準(zhǔn)確度高。

1高效液相色譜原理

高效液相色譜其原理是單一或不同比例流動(dòng)相經(jīng)混合以后經(jīng)高壓系統(tǒng)輸送，承載待測(cè)樣品迚入分離器，根據(jù)待測(cè)樣品在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)不同，相互作用力強(qiáng)弱，使待測(cè)樣品在兩相之間呈反復(fù)吸附-分離狀態(tài)，樣品中各成分運(yùn)動(dòng)速度不同，配以不同洗脫能力的流動(dòng)相將待測(cè)樣品依次洗脫出來(lái)，經(jīng)過(guò)檢測(cè)器，產(chǎn)生電信號(hào)，通過(guò)記錄儀解讀出待測(cè)樣品圖譜。根據(jù)待測(cè)樣品物理化學(xué)特性可選擇適當(dāng)?shù)臋z測(cè)器，如紫外檢測(cè)器、示差檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器及二極管陣列檢測(cè)器等。與傳統(tǒng)液相色譜相比，高效液相色譜可以更快速、高效、準(zhǔn)確靈敏地對(duì)樣品迚行檢測(cè)，待測(cè)樣品僅5min即可完成檢驗(yàn)。同時(shí)高效液相色譜檢測(cè)應(yīng)用范圍相對(duì)更廣，現(xiàn)存的有機(jī)物中70%～80%都可以利用其迚行分析檢測(cè)。一般沸點(diǎn)高、熱穩(wěn)定性差、分子量較大等有機(jī)物都可以用高效液相色譜迚行檢測(cè)。高效液相色譜對(duì)樣品的前處理及純化程度要求較高，易出現(xiàn)假陽(yáng)性，采用高效液相質(zhì)譜與質(zhì)譜儀聯(lián)用，可有效解決假陽(yáng)性問(wèn)題幵能簡(jiǎn)化樣品前處理工序，同時(shí)高效液相色譜法-串聯(lián)質(zhì)譜法抗基質(zhì)干擾能力強(qiáng)，定量定性靈敏度高，檢測(cè)效率快，可以更準(zhǔn)確地對(duì)樣品迚行檢測(cè)和分析，在食品安全檢驗(yàn)檢測(cè)領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用，為食品安全檢測(cè)提供良好的技術(shù)支持。

2方法

樣品前處理--試液提取。準(zhǔn)確稱(chēng)取樣品約0.5g于50mL錐形瓶中，加入30mL0.1mol·L-1鹽酸溶液與樣品混勻，塞上軟塞放入高壓滅菌鍋120℃保持30min，水解結(jié)束待冷卻拿出。此時(shí)樣品水解液pH為2.0～2.5，用10g·L-1的氫氧化鈉溶液調(diào)至pH為4.5，加入2mL混合酶溶液（木瓜蛋白酶1.76g/50mL＋淀粉酶1.27g/50mL），搖勻后置于37℃培養(yǎng)箱中放置約16h，將酶解液轉(zhuǎn)至50mL比色管中，用水定容至刻度線，搖勻，離心取上清液備用，同時(shí)做空白試驗(yàn)[4-6]。

樣品凈化。用少許脫脂棉鋪于層析柱底部，加水將棉中氣泡排出加入已活化好的活性人造沸石約8g（高度不低于45mm），液面不低于活性人造沸石。準(zhǔn)確加入20mL上述樣品提取液，以流速1滴/s通過(guò)裝好的凈化柱，加入10mL近沸騰的熱水沖洗凈化柱，棄去淋洗液，如此重復(fù)2次。于層析柱下放置25mL比色管收集洗脫液，加入20mL溫度約為90℃的酸性氯化鉀洗脫溶液，流速保持1滴/s，待洗脫液冷卻至室溫后用250g·L-1酸性氯化鉀定容搖勻，即為凈化液。

試液衍生。準(zhǔn)確移取上述凈化液2.0mL于10mL試管中，加入2.0mL堿性鐵氰化鉀溶液（分別加入20、30、40、60g·mL-1），渦旋混勻后，準(zhǔn)確加入2.0mL正丁醇，再次渦旋混勻約2min后靜置10min，約樣品出現(xiàn)乳化現(xiàn)象應(yīng)轉(zhuǎn)至離心管離心處理，待分層后取上層正丁醇萃取層經(jīng)0.45μm有機(jī)微孔濾膜過(guò)濾至棕色進(jìn)樣品中，待上機(jī)檢測(cè)。

3結(jié)果與分析

3.1不同檢測(cè)方法的對(duì)比與討論

GB5009.84—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中維生素B1的測(cè)定》規(guī)定了高效液相色譜法和熒光光度法2種不同的分析方法用于測(cè)定食品中VB1，其中高效液相色譜法規(guī)定樣品通過(guò)稀鹽酸介質(zhì)恒溫水解、中和、酶解，水解液用堿性鐵氰化鉀衍生，正丁醇萃取，液相分離熒光檢測(cè)器定量，定量限為0.1mg/100g。其更適用于天然食品及簡(jiǎn)單配方的保健食品，而用于例如多種維生素礦物質(zhì)片樣品，則在樣品前處理階段無(wú)法避免各營(yíng)養(yǎng)素之間的相互氧化還原反應(yīng)，VB1的實(shí)測(cè)值不足理論添加量的一半，難以用于定量分析。同時(shí)其前處理步驟復(fù)雜，檢測(cè)效率較低。2020版《中國(guó)藥典》[22]則通過(guò)滴定法或紫外分光光度法進(jìn)行VB1的含量測(cè)定，不僅同樣無(wú)法避免各營(yíng)養(yǎng)素之間的相互干擾，同時(shí)定量限較高，無(wú)法滿足保健食品-復(fù)合營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充劑樣品中VB1的含量測(cè)定。

3.2精密度考察

儀器進(jìn)樣精密度考察。針對(duì)對(duì)照品溶液和樣品溶液，分別重復(fù)6次進(jìn)樣，記錄VB1主峰峰面積，考察色譜方法中的儀器精密度情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)照品溶液的儀器精密度為0.42%；樣品溶液的儀器精密度為0.87%，說(shuō)明此儀器方法精密度良好。

重復(fù)性考察。重復(fù)平行6次樣品前處理及儀器測(cè)定過(guò)程，分析同批次樣品中的VB1含量，以考察本方法的重復(fù)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)6次實(shí)驗(yàn)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relativestandarddeviations，RSDs）為0.61%，說(shuō)明本方法的重復(fù)性較好。

3.3耐用性考察

為了考察本儀器方法的耐用性，通過(guò)在小范圍內(nèi)改變液相分析方法的柱溫和流速參數(shù)，按同樣的前處理方法測(cè)定多種維生素礦物質(zhì)片樣品中的VB1含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在流速變動(dòng)±0.05mL/min以及柱溫變動(dòng)±3℃的條件下，樣品溶液色譜圖中的VB1主峰峰型仍保持良好，與周?chē)s質(zhì)的分離度控制在1.35～2.78范圍內(nèi)，主峰理論塔板數(shù)均在7200以上。達(dá)到基線分離要求而不影響定量分析，同時(shí)參數(shù)改變后計(jì)算的定量結(jié)果恒定，由此證明本方法耐用性良好。

結(jié)語(yǔ)

高效液相色譜在食品安全檢測(cè)斱面應(yīng)用廣泛，収展迅速，在食品研収及檢測(cè)斱面應(yīng)用日益成熟，近幾年專(zhuān)家學(xué)者致力于簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)程序，提高檢測(cè)效率，擴(kuò)大應(yīng)用范圍，完善已有檢驗(yàn)檢測(cè)斱法。維生素B1在檢測(cè)過(guò)程中易受水分、溫度、微量元素等各種因素的影響而降解，沸石具有較強(qiáng)的吸附性，樣品通過(guò)活化后的人工沸石凈化后，凈化提取液加入衍生檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 張隆龍，王海燕，胡 越，等.高效液相色譜法測(cè)定嬰幼兒配方乳粉中的維生素B1、B2[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2019（1）：129-134.

[2] 李丹.在線衍生高效液相色譜熒光光譜法測(cè)定食品中維生素B1[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2018，9（20）：5445?5451.

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