血脂康干預(yù)肥胖高血壓合并代謝相關(guān)性脂肪肝的作用機(jī)制

龔智君　江宇寧　張淑潔　王修明　朱堯　蔣衛(wèi)民

摘要 目的：通過評(píng)價(jià)高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)的肥胖高血壓大鼠合并代謝相關(guān)性脂肪肝的病變程度，初步探索血脂康改善肥胖自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）合并代謝相關(guān)性脂肪肝的作用機(jī)制。方法：將24只6周齡的雄性SHR隨機(jī)分為普通飲食組（STD組）、高脂飲食組（HFD組）、普通飲食血脂康治療組（STD－X組）、高脂飲食血脂康治療組（HFD－X組），每組6只。STD－X組、HFD－X組予以血脂康灌胃，STD組、HFD組予以生理鹽水灌胃。實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)大鼠體質(zhì)量、血壓變化；酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)各組SHR肝臟游離脂肪酸（FFA）和三酰甘油（TG）水平；蘇木精－伊紅（HE）及油紅O染色觀察各組大鼠肝臟病理學(xué)形態(tài)變化；蛋白免疫印跡法檢測(cè)各組SHR肝臟組織中過氧化物酶體增殖物激活受體α（PPARα）、過氧化物酶體增殖物激活受體γ共激活因子－1α（PGC－1α）、肉毒堿棕櫚?；D(zhuǎn)移酶1－a（CPT1－a）的蛋白表達(dá)。結(jié)果：與HFD組比較，HFD－X組大鼠血壓、體質(zhì)量均有降低趨勢(shì)，其中舒張壓降低明顯（P＜0.05）。與HFD組比較，HFD－X組肝臟TG及FFA水平均明顯降低（P＜0.05），肝臟脂肪變性程度明顯減輕。與STD組相比，HFD組PPARα、PGC－1α、CPT1－a蛋白表達(dá)量明顯降低（P＜0.05）；STD－X組PPARα、PGC－1α、CPT1－a蛋白表達(dá)量均升高（P＜0.05）；與HFD組相比，HFD－X組PPARα、PGC－1α、CPT1－a蛋白表達(dá)量明顯升高（P＜0.05）。結(jié)論：血脂康通過上調(diào)PPARα/PGC－1α信號(hào)通路多個(gè)蛋白的表達(dá)，降低高脂喂養(yǎng)的SHR大鼠的血壓，減輕其體質(zhì)量，改善其合并代謝相關(guān)性脂肪肝導(dǎo)致的肝內(nèi)脂肪堆積與肝細(xì)胞脂肪變性等。

關(guān)鍵詞 自發(fā)性高血壓；代謝相關(guān)性脂肪肝；肥胖；血脂康；實(shí)驗(yàn)研究

doi：10.12102/j.issn.1672－1349.2024.01.008

近年來，我國(guó)高血壓及其并發(fā)癥的患病率逐漸升高［1］，其中，肥胖合并高血壓的發(fā)病率明顯增加［1］。肥胖是一種慢性代謝疾病，代謝相關(guān)性脂肪肝（metabolic associated fatty liver disease，MAFLD）是其最常見的并發(fā)癥之一。2021年5月中國(guó)肝病學(xué)會(huì)發(fā)布的一項(xiàng)共識(shí)指出：支持將非酒精性脂肪肝（non－alcoholic fatty liver disease，NAFLD）重新定義為MAFLD，并將診斷標(biāo)準(zhǔn)定義為：肝活檢組織學(xué)或影像學(xué)或血液生物標(biāo)志物檢查提示脂肪肝；同時(shí)合并超重/肥胖或2型糖尿病，或存在代謝功能障礙［2］。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前MAFLD的全球患病率約為25%［3］。研究表明，代謝紊亂與心血管不良事件（如腦卒中、心肌梗死、心力衰竭）相關(guān)且增加心血管疾病的死亡風(fēng)險(xiǎn)［4－5］。高血壓是最常見的心血管危險(xiǎn)因素，在合并肥胖及代謝紊亂的人群中尤為突出。但傳統(tǒng)意義上的非酒精性脂肪肝與許多其他代謝疾病無關(guān)［6］。因此，MAFLD可能是代謝綜合征的肝臟表現(xiàn)［7］。肥胖高血壓和MAFLD常常同時(shí)出現(xiàn)，是一種綜合性的代謝紊亂疾病。

過氧化物酶體增殖物激活受體（peroxisome proliferators－activated receptors，PPARs）在人體內(nèi)多個(gè)組織中都有表達(dá)，發(fā)揮促進(jìn)脂肪酸（fatty acids，F(xiàn)A）的攝取、轉(zhuǎn)運(yùn)和氧化，參與能量代謝平衡的功能。脂質(zhì)代謝中間產(chǎn)物游離脂肪酸（free fatty acid，F(xiàn)FA）可以激活過氧化物酶體增殖物激活受體α（peroxisome proliferator－activated receptor α，PPARα），并誘導(dǎo)PPARα調(diào)控的下游基因表達(dá)，降解上述中間產(chǎn)物，降低三酰甘油（triglyceride，TG）和FFA水平，可以減少肌肉中脂肪的含量，調(diào)節(jié)脂聯(lián)素從而增高胰島素敏感性，這些對(duì)肝臟的健康都至關(guān)重要［8］。過氧化物酶體增殖物激活受體γ共激活因子－1α（peroxisome proliferator－activated receptor γ coactivator－1α，PGC－1α）是過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator－activated receptor γ，PPARγ）的轉(zhuǎn)錄共激活因子，目前被認(rèn)為是參與線粒體能量代謝的主要調(diào)節(jié)因子。PGC－1α調(diào)節(jié)中樞代謝功能，包括線粒體代謝、細(xì)胞分化、血管生成和炎癥［9］。肝臟是協(xié)調(diào)人體新陳代謝的重要器官，其代謝機(jī)制復(fù)雜且與多種分子的交互相關(guān)，而越來越多的研究證明，PPARα/PGC－1α信號(hào)通路在肝臟的動(dòng)態(tài)平衡中起著關(guān)鍵作用。PPARα及其輔助激活物PGC－1α均可在一定程度上影響肥胖高血壓合并MAFLD帶來的一系列代謝紊亂問題，兩者共同上調(diào)肉毒堿棕櫚?；D(zhuǎn)移酶1－a（carnitine palmitoyl transferase 1－a，CPT1－a）的表達(dá)，提高機(jī)體脂肪酸氧化水平，從而改善肥胖高血壓合并MAFLD病人的炎癥反應(yīng)和脂肪堆積，降低心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。既往研究發(fā)現(xiàn)，血脂康也是一種PPARα激動(dòng)劑，能夠參與調(diào)控PPARα相關(guān)的生物途徑。中國(guó)冠心病二級(jí)預(yù)防研究［10］為血脂康的應(yīng)用提供了充分的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。本實(shí)驗(yàn)旨在探討血脂康是否可以通過PPARα/PGC－1α信號(hào)通路干預(yù)肥胖高血壓合并MAFLD。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

24只無特定病原體（SPF）級(jí)雄性6周齡左右自發(fā)性高血壓大鼠（spontaneously hypertensive rats，SHR），初始體質(zhì)量100～120 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供［生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2012－0001］，飼養(yǎng)于南京中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng)物房的溫度維持在（23±1）℃，濕度保持在（55±10）%，并且維持12 h光/暗循環(huán)；動(dòng)物房通風(fēng)良好，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可在籠內(nèi)自由活動(dòng)，每周更換墊料2次，大鼠可以自由獲得食物和水。實(shí)驗(yàn)開始前給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物2周適應(yīng)動(dòng)物房環(huán)境的飼養(yǎng)時(shí)間，之后將24只SHR隨機(jī)分為普通飲食組（STD組）、高脂飲食組（HFD組）、普通飲食血脂康治療組（STD－X組）、高脂飲食血脂康治療組（HFD－X組），每組6只。STD組、STD－X組大鼠連續(xù)16周給予普通飼料（由南京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供）；HFD組、HFD－X組大鼠連續(xù)16周給予高脂飼料（D12492，Research Diets，USA）。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

血脂康膠囊，國(guó)藥準(zhǔn)字Z10950029，北京北大維信生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.3 主要試劑和儀器

TG試劑盒（南京建成生物研究工程所，貨號(hào)：A110－1－1）；Free Fatty Acid Assay（Abcam，貨號(hào)：Ab6534）；油紅O染液（武漢谷歌生物科技有限公司，貨號(hào)：G1016）；蘇木精－伊紅（HE）染液（武漢谷歌生物，貨號(hào)：G1005）；二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量檢測(cè)試劑盒（Servicebio，貨號(hào)：G2026）；β－actin（Servicebio，貨號(hào)：GB12001）；辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記山羊抗兔（Servicebio，貨號(hào)GB23303）；HRP標(biāo)記山羊抗大鼠（Servicebio，貨號(hào)：GB23302）。臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（大龍，型號(hào)：D3024R）；酶標(biāo)檢測(cè)儀（BioTeK，型號(hào)：Epoch）；全自動(dòng)生化分析儀（深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司，型號(hào)：Chemray 800）；電泳儀（Servicebio，型號(hào)：BV－2&BT－2）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 干預(yù)方法

在實(shí)驗(yàn)開始的第1周， STD－X組、HFD－X組大鼠均予以血脂康（溶解于生理鹽水中）300 mg/（kg·d）灌胃，STD組及HFD組大鼠采用等劑量生理鹽水灌胃，均連續(xù)灌胃16周。在實(shí)驗(yàn)期結(jié)束時(shí)（即第16周），腹腔注射過量的戊巴比妥鈉（250 mg/kg）處死大鼠。采血后，取出肝臟組織，稱重，記錄肝臟質(zhì)量并儲(chǔ)存于－80 ℃冰箱中待檢。

1.4.2 一般指標(biāo)檢測(cè)

各組大鼠每周稱重1次，每只大鼠連續(xù)測(cè)量3次體質(zhì)量，取其平均值。在第12周，采用尾套法無創(chuàng)測(cè)量各組收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）和平均動(dòng)脈壓（mean arterial pressure，MAP）［11］。

1.4.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)FFA和TG水平

ELISA檢測(cè)各組肝臟FFA和TG水平，按照試劑盒說明書操作，之后于酶標(biāo)儀上在不同波長(zhǎng)下測(cè)各孔OD值，根據(jù)OD值計(jì)算出實(shí)際濃度。

1.4.4 HE染色及油紅O染色觀察肝臟病理學(xué)變化

通過HE染色、油紅O染色觀察各組大鼠肝臟病理學(xué)形態(tài)變化，按照常規(guī)取材、脫水、包埋、切片、染色、觀察等途徑進(jìn)行操作，評(píng)價(jià)血脂康干預(yù)后SHR肝臟形態(tài)和變性程度，取材部位均為大鼠肝臟最大葉。

1.4.5 免疫蛋白印跡法（Western Blot）檢測(cè)肝臟組織中PPARα、PGC－1α、CPT1－a的蛋白表達(dá)水平

采用Western Blot檢測(cè)各組肝臟組織中PPARα、PGC－1α、CPT1－a的蛋白表達(dá)水平。將大鼠肝臟組織蛋白提取后用試劑盒測(cè)定蛋白濃度并于100 ℃下煮15 min進(jìn)行蛋白變性，之后進(jìn)行蛋白電泳、轉(zhuǎn)膜及封閉。按照抗體說明書，配制一抗溶液，4 ℃冰箱搖床過夜。次日洗脫后再將二抗按比例稀釋后，然后加入孵育槽中，放置搖床上慢搖，室溫下孵育30 min；最后將聚偏二氟乙烯膜與混合好的化學(xué)發(fā)光試劑充分反應(yīng)，用顯影、定影試劑進(jìn)行顯影和定影，并用Image－J軟件對(duì)條帶進(jìn)行灰度分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用最小顯著差異法（LSD）檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 血脂康對(duì)大鼠體質(zhì)量及血壓的影響

從第7周開始，HFD組大鼠的體質(zhì)量開始明顯高于STD組（P＜0.05），隨著高脂喂養(yǎng)時(shí)間的推進(jìn)，這種差距逐漸明顯，并且HFD組大鼠的體質(zhì)量開始超過STD組的20%，證明肥胖高血壓模型造模成功。在第16周，與HFD組相比，HFD－X組大鼠的體質(zhì)量明顯下降，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第12周，與HFD組相比，HFD－X組DBP明顯降低（P＜0.05），且MAP也有所降低。詳見圖1～圖4。

2.2 血脂康對(duì)大鼠肝臟TG和FFA的影響

與STD組比較，HFD組大鼠肝臟FFA、TG水平明顯上升（P＜0.05）；與HFD組比較，HFD－X組大鼠肝臟FFA、TG水平明顯下降明顯（P＜0.05）。詳見圖5。

2.3 血脂康對(duì)大鼠肝臟形態(tài)及變性程度的影響

HE染色結(jié)果顯示，STD組大鼠肝細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，未見明顯的肝細(xì)胞壞死，也未見明顯的肝細(xì)胞脂肪變性，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰完整，肝細(xì)胞排列較為整齊，未見較大的脂肪空泡及明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。HFD組大鼠肝細(xì)胞脂肪變性非常明顯，且肝細(xì)胞排列紊亂，可見明顯的大小不等、數(shù)量不同的脂肪空泡，肝細(xì)胞排列混亂，較多肝細(xì)胞腫脹變性，胞質(zhì)疏松，染色偏淡。而經(jīng)過血脂康治療的HFD－X組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)較為完整，肝細(xì)胞排列相對(duì)整齊，脂肪變性明顯減輕，脂肪空泡體積縮小及數(shù)量明顯減少。詳見圖6。

油紅O染色結(jié)果顯示，與STD組相比，HFD組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量紅色脂滴，油紅O染色面積明顯增大，細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量明顯高于STD組。與HFD組比較，HFD－X組大鼠油紅O染色面積明顯縮小，細(xì)胞內(nèi)紅色脂滴數(shù)量明顯減少，脂質(zhì)含量明顯降低。詳見圖7。

2.4 血脂康對(duì)大鼠肝臟組織中PPARα、PGC－1α、CPT1－a蛋白表達(dá)水平的影響

與STD組相比，HFD組PPARα、PGC－1α、CPT1－a的蛋白表達(dá)量明顯降低（P＜0.05），STD－X組PPARα、CPT1－a、PGC－1α蛋白表達(dá)量均增高（P＜0.05）；與HFD組相比，HFD－X組PPARα、PGC－1α、CPT1－a的蛋白表達(dá)量明顯升高（P＜0.05）。詳見圖8～圖10。

3 討 論

隨著世界肥胖發(fā)生率的不斷增加，肥胖高血壓合并各類代謝疾病的風(fēng)險(xiǎn)也與日俱增，當(dāng)前的流行病學(xué)也已經(jīng)明確將肥胖和高血壓的風(fēng)險(xiǎn)聯(lián)系起來［12］。在藥物治療方面，現(xiàn)有的西藥不能完全滿足肥胖高血壓合并MAFLD病人的需求，而中藥具有多層次、多成分、綜合調(diào)控的特點(diǎn)，且臨床應(yīng)用歷史悠久，有望成為新藥開發(fā)的最有效來源之一。血脂康是由紅曲發(fā)酵生產(chǎn)的，在我國(guó)被歸類為處方藥而不是膳食補(bǔ)充劑，既往的大量臨床研究證實(shí)血脂康有確切的降脂療效［13］。前期的實(shí)驗(yàn)研究表明，血脂康可以改善內(nèi)臟組織的脂肪堆積，從而一定程度上改善肥胖導(dǎo)致的一系列代謝紊亂［14］。

PPARα可以有效改善MAFLD病人的糖脂代謝，減輕炎癥反應(yīng)，因此，PPARα激動(dòng)劑有望成為治療本病的新型藥物［15］。PGC－1α是PPARα的輔助激活物，與PPARα結(jié)合后能夠共同上調(diào)相關(guān)β氧化酶（如CPT1－a）的表達(dá)量，提高肝臟、β氧化水平，進(jìn)而改善肝臟內(nèi)脂肪堆積的現(xiàn)象。

SHR是理想的類似于人類原發(fā)高血壓的動(dòng)物模型，尤其是雄性SHR，其伴隨的心血管疾病發(fā)病率高，是建立肥胖高血壓大鼠動(dòng)物模型的理想造模對(duì)象。通過高脂喂養(yǎng)，SHR可以呈現(xiàn)明顯的肥胖體征，其內(nèi)臟脂肪的蓄積及代謝紊亂的表現(xiàn)較為明顯。本研究通過高脂喂養(yǎng)SHR獲得肥胖高血壓大鼠模型，因?yàn)椴捎酶咧桂B(yǎng)，SHR的TG在肝臟中過多蓄積，造成了MAFLD的發(fā)生。采用血脂康干預(yù)后，HFD－X組SHR的DBP較HFD組明顯下降，且DBP、MAP值均低于HFD組。在第16周，HFD－X組大鼠體質(zhì)量較HFD組明顯下降，說明血脂康有一定的減重作用。HFD－X組大鼠肝臟FFA、TG水平明顯低于HFD組（P＜0.05），提示血脂康一定程度上可以減輕肥胖SHR肝臟中TG和FFA的堆積，降低肝臟內(nèi)的脂肪堆積程度。在肝臟中，通過病理切片的觀察發(fā)現(xiàn)，HFD－X組大鼠無論在肝臟細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)、排列，還是在脂滴數(shù)量及脂肪變性程度方面均明顯優(yōu)于HFD組。與HFD組相比，HFD－X組PPARα、PGC－1α、CPT1－a的蛋白表達(dá)量明顯升高，表明血脂康通過PPARα/PGC－1α信號(hào)通路減輕高脂喂養(yǎng)的SHR的血壓、體質(zhì)量，改善其合并MAFLD導(dǎo)致的肝細(xì)胞脂肪變性等，從而改善肥胖高血壓合并MAFLD導(dǎo)致的綜合代謝紊亂。但血脂康改善肥胖高血壓合并MAFLD的機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，高脂喂養(yǎng)的SHR兼顧了肥胖、高血壓、MAFLD、代謝紊亂等多個(gè)體征，血脂康通過上調(diào)PPARα/PGC－1α信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)，在減輕肥胖高血壓大鼠體質(zhì)量、降低其血壓的基礎(chǔ)上，同時(shí)改善大鼠肝臟內(nèi)FFA、TG堆積，減輕肝細(xì)胞脂肪變性，從而有效干預(yù)肥胖高血壓合并MAFLD。

參考文獻(xiàn)：

［1］陳偉偉，高潤(rùn)霖，劉力生，等.《中國(guó)心血管病報(bào)告2016》概要［J］.中國(guó)循環(huán)雜志，2017，32（6）：521－530.

［2］NAN Y M，AN J H，BAO J F，et al.The Chinese society of Hepatology position statement on the redefinition of fatty liver disease［J］.Journal of Hepatology，2021，75（2）：454－461.

［3］LONARDO A，BYRNE C D，CALDWELL S H，et al.Global epidemiology of nonalcoholic fatty liver disease：Meta－analytic assessment of prevalence，incidence，and outcomes［J］.Hepatology，2016，64（4）：1388－1389.

［4］LIU X Y，SUN N L，YU T，et al.The independent and joint association of blood pressure，serum total homocysteine，and fasting serum glucose levels with brachial－ankle pulse wave velocity in Chinese hypertensive adults［J］.International Heart Journal，2016，57（5）：627－633.

［5］ZANCHETTI A.Cardiovascular consequences of hypertension：therapeutic effects on organ damage and on cardiovascular events［J］.Blood Press Suppl，1994，1：1－4.

［6］MELLINGER J L，PENCINA K M，MASSARO J M，et al.Hepatic steatosis and cardiovascular disease outcomes：an analysis of the Framingham Heart Study［J］.Journal of Hepatology，2015，63（2）：470－476.

［7］KIM C H，YOUNOSSI Z M.Nonalcoholic fatty liver disease：a manifestation of the metabolic syndrome［J］.Cleveland Clinic Journal of Medicine，2008，75（10）：721－728.

［8］ESCHER P，BRAISSANT O，BASU－MODAK S，et al.Rat PPARs：quantitative analysis in adult rat tissues and regulation in fasting and refeeding［J］.Endocrinology，2001，142（10）：4195－4202.

［9］CHENG C F，KU H C，LIN H.PGC－1α as a pivotal factor in lipid and metabolic regulation［J］.International Journal of Molecular Sciences，2018，19（11）：3447.

［10］LI J J，LU Z L，KOU W R，et al.Beneficial impact of Xuezhikang on cardiovascular events and mortality in elderly hypertensive patients with previous myocardial infarction from the China Coronary Secondary Prevention Study （CCSPS）［J］.Journal of Clinical Pharmacology，2009，49（8）：947－956.

［11］KUBOTA Y，UMEGAKI K，KAGOTA S，et al.Evaluation of blood pressure measured by tail－cuff methods （without heating） in spontaneously hypertensive rats［J］.Biological & Pharmaceutical Bulletin，2006，29（8）：1756－1758.

［12］MOLENAAR E A，HWANG S J，VASAN R S，et al.Burden and rates of treatment and control of cardiovascular disease risk factors in obesity：the Framingham Heart Study［J］.Diabetes Care，2008，31（7）：1367－1372.

［13］BANACH M，BRUCKERT E，DESCAMPS O S，et al.The role of red yeast rice （RYR） supplementation in plasma cholesterol control：a review and expert opinion［J］.Atherosclerosis Supplements，2019，39：e1－e8.

［14］任煒煒，嚴(yán)羽，殷曉威，等.血脂康膠囊對(duì)高脂喂養(yǎng)大鼠內(nèi)臟脂肪及代謝指標(biāo)的影響［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2016，14（11）：1218－1221.

［15］FOUGERAT A，MONTAGNER A，LOISEAU N，et al.Peroxisome proliferator－activated receptors and their novel ligands as candidates for the treatment of non－alcoholic fatty liver disease［J］.Cells，2020，9（7）：1638.

（收稿日期：2022－08－09）

（本文編輯郭懷印）

基金項(xiàng)目 江蘇省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（No.BK20181503）；江蘇省科技重點(diǎn)研發(fā)項(xiàng)目（No.BE2017775）

通訊作者 蔣衛(wèi)民，E－mail：jwm0410@njucm.edu.cn

引用信息 龔智君，江宇寧，張淑潔，等.血脂康干預(yù)肥胖高血壓合并代謝相關(guān)性脂肪肝的作用機(jī)制［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22（1）：46－51.