安宮降壓丸對自發性高血壓大鼠受損靶器官け；ぷ饔玫難芯

張志聰 張曉笛 岳楓 李晉生 劉瑩 靳冉

摘要?目的：觀察安宮降壓丸對自發性高血壓大鼠（SHR）受損靶器官的保護作用。方法：選取18只WKY大鼠為對照組，78只SHR大鼠隨機分為SHR模型組、安宮降壓丸高劑量組（1 600 mg/kg）、安宮降壓丸中劑量組（800 mg/kg）、安宮降壓丸低劑量組（400 mg/kg）、卡托普利組（20 mg/kg），連續給藥6周。給藥前和給藥6周后分別測定大鼠的血壓。給藥6周后取胸主動脈、左心室、大腦、腎臟組織制作病理切片，進行蘇木素-伊紅（HE）染色，光學顯微鏡觀察各臟器組織病理組織學形態變化。結果：與SHR模型組相比，安宮降壓丸各劑量組給藥6周后收縮壓均明顯降低（P＜0.01）；安宮降壓丸能夠明顯改善SHR大鼠胸主動脈、左心室、腦、腎的組織病理損傷。結論：安宮降壓丸在降低SHR大鼠血壓的同時，對大鼠高血壓累及靶器官胸主動脈、心臟、腦、腎臟具有一定的保護作用。

關鍵詞?自發性高血壓；安宮降壓丸；靶器官；保護作用；大鼠；實驗研究

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.07.011

高血壓是心腦血管系統常見疾病之一。長期持續的血壓升高會導致心、腦、腎以及主動脈等靶器官的病理損傷。研究表明，中藥的降壓機制多樣，能兼顧高血壓的多個病理環節，包括改善微循環、保護血管內皮、調節血管活性物質、逆轉血管重構等。安宮降壓丸作為傳統中成藥，具有清熱鎮靜、平肝降壓的功效［1-2］。對于初發難治性高血壓病人，在應用標準抗壓藥的基礎上，合并使用安宮降壓丸能夠明顯增強高血壓的治療效果［3］。前期動物實驗表明，安宮降壓丸對于自發性高血壓大鼠（SHR）出現的眩暈、易怒等高血壓臨床癥狀有所緩解，可通過調節腎素-血管緊張素系統（RAS）、改善血管內皮功能等發揮其降壓作用。本研究團隊在前期研究的基礎上，進一步探討安宮降壓丸對于高血壓受損靶器官的保護作用，為明確安宮降壓丸的作用優勢和特點提供實驗依據。

1?材料與方法

1.1?實驗動物

無特定病原體（SPF）級14周齡WKY雄性大鼠18只和雄性SHR大鼠78只，體質量260～300 g，許可證號：SCXK（京）2016-0006。實驗動物飼養于SPF級動物室內，日光燈照明，12 h明暗周期，自由飲水、飲食，溫度20～26 ℃，送風每小時6～10次，濕度40%～70%。

1.2?分組與給藥??實驗動物適應性飼養6 d后，將18只WKY大鼠作為對照組，將78只SHR大鼠分為5組：SHR模型組18只，安宮降壓丸高劑量組12只，安宮降壓丸中劑量組18只，安宮降壓丸低劑

量組12只，卡托普利組18只。安宮降壓丸高劑量組（1 600 mg/kg）、中劑量組（800 mg/kg）、低劑量組（400 mg/kg）、卡托普利組（20 mg/kg），每日給藥1次，連續給藥6周。WKY對照組和SHR模型組灌胃同體積的純凈水，每周測量大鼠體質量，調整給藥體積。

1.3?藥物試劑及儀器

安宮降壓丸（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠生產，批號：18035208）；卡托普利（常州制藥廠有限公司生產，批號：18110912）；組織固定液（北京益利精細化學品有限公司生產，批號：20180806）；95%乙醇（北京化工廠生產，批號：20190118）；100%乙醇（北京化工廠生產，批號：20181008）；二甲苯（北京化工廠生產，批號：20180605）；蘇木素（九州柏林，批號：20181130）；伊紅（九州柏林，批號：20180115）；切片石蠟58～60 ℃（Leica，批號：20180530）；BX61光學顯微鏡（日本Olympus）；TP1020全自動組織脫水處理機（德國Leica公司）；ST5010全自動組織切片染色機（德國Leica公司）；BP2010大鼠無創血壓儀（北京軟隆生物技術有限公司）。

1.4?血壓測定

采用大鼠無創血壓儀，在安靜、干凈的實驗環境，分別于給藥前和給藥6周后監測大鼠的尾動脈收縮壓。

1.5?病理組織檢測

取各組大鼠胸主動脈、左心室、腦、腎臟固定于甲醛溶液，經取材修塊，梯度乙醇脫水，包埋，切片厚度4 μm，分別進行蘇木素-伊紅（HE）染色，另取胸主動脈進行內皮型一氧化氮合酶（eNOS）免疫組化染色，光學顯微鏡下觀察各組織病理情況。

1.6?統計學處理

采用SPSS 19.0統計軟件進行數據分析。定量資料結果符合正態分布，以均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗或F檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2?結?果

2.1?各組大鼠收縮壓比較

給藥前及給藥6周后，SHR模型組收縮壓明顯高于WKY對照組（P＜0.01）。給藥6周后，與SHR模型組相比，安宮降壓丸高劑量、中劑量、低劑量組及卡托普利組收縮壓均明顯降低（P＜0.01）。詳見表1。

2.2?各組大鼠胸主動脈病理組織學變化

WKY對照組大鼠胸主動脈結構清晰，內膜層光滑平整，平滑肌細胞排列規則，未見明顯異常。SHR模型組大鼠胸主動脈內膜層欠平滑，平滑肌細胞排列紊亂，細胞大小各異，纖維組織排列紊亂。安宮降壓丸高、中劑量低各組大鼠胸主動脈結構清晰，內膜層較完整，平滑肌細胞排列規則，未見明顯異常。卡托普利組大鼠胸主動脈結構清晰，內膜層平滑，平滑肌細胞排列規則，未見明顯異常。詳見圖1。

2.3?各組大鼠胸主動脈組織中eNOS表達比較

光鏡下觀察發現，免疫組化染色后，WKY對照組胸主動脈組織切片細胞漿內出現棕黃色顆粒者為陽性細胞，可見eNOS主要表達于主動脈內皮細胞和平滑肌細胞，外膜的成纖維細胞也有少量表達。與WKY對照組相比，SHR模型組大鼠胸主動脈組織中eNOS的表達量明顯降低（P＜0.01）；與SHR模型組相比，安宮降壓丸高劑量組、低劑量組大鼠胸主動脈組織中eNOS表達明顯增加（P＜0.05）。采用圖像分析系統計算平均灰度值進行蛋白定量分析，結果見表2，各組胸主動脈eNOS免疫組化染色見圖2。

2.4?各組大鼠左心室病理組織學變化

WKY對照組大鼠心肌細胞未見明顯肥大，細胞排列較規則，未見明顯的心肌纖維化。SHR模型組大鼠心肌細胞排列紊亂，局部心肌纖維斷裂，間質炎細胞浸潤，心肌纖維化，心肌細胞肥大，局部心肌細胞核近似長方形或圓形肥厚。安宮降壓丸高、中、低各劑量組大鼠心肌細胞排列較規則，未見明顯心肌細胞肥大，偶見間質纖維化。卡托普利組大鼠心肌細胞排列規則，未見明顯心肌細胞肥大，局部偶見心肌纖維化。詳見圖3。

2.5?各組大鼠腦組織病理組織學變化

WKY對照組大鼠腦神經細胞排列規則，腦血管管壁未見明顯增厚，血管周圍間隙輕微擴張。SHR模型組大鼠腦內血管管壁增厚、管腔狹窄，血管周圍間隙擴大，局部神經細胞排列紊亂。安宮降壓丸高劑量、中劑量、低劑量組大鼠腦內血管未見明顯管壁增厚，管腔狹窄，局部小血管周圍間隙輕微擴大，神經細胞排列規則，未見明顯異常。卡托普利組大鼠腦內血管未見明顯的管壁增厚，管腔狹窄，血管周圍間隙輕微擴張，神經細胞排列規則未見明顯異常。詳見圖4。

2.6?各組大鼠腎臟病理組織學變化

WKY對照組大鼠腎臟組織結構清晰，腎小球未見明顯的萎縮、玻璃樣變、硬化，腎小球未見明顯肥大。SHR模型組大鼠腎臟組織腎小球萎縮，玻璃樣變，小球硬化，局部腎小球代償性肥大，腎小球毛細血管擴張，腎小囊腔狹窄，腎小管排列紊亂，腎小管擴張，腎小管上皮細胞脫落，間質纖維化。安宮降壓丸高劑量、中劑量、低劑量組腎臟組織結構清晰，腎小球未見明顯病理改變，偶見局部腎小球輕微萎縮伴肥大，腎小球偶見分葉，腎小管見輕微擴張，局部小管上皮細胞脫落。卡托普利組大鼠局部腎小球萎縮，代償性腎小球肥大，小球內細胞增生，腎小囊腔狹窄，局部小管上皮脫落。詳見圖5。

3?討?論

長期高血壓會導致血管、心臟、腦、腎臟等靶器官的損傷，會引發左心室肥厚、充血性心力衰竭、腦卒中、腎臟衰竭等并發癥［4］。

血管結構的改變是持續高血壓的結果。持續的高血壓會使血管壁受壓，血管內膜破壞，內皮細胞間隙擴大，血管的通透性增加，導致蛋白質或脂質沉積進入血管壁，最終會使血管壁變厚，血管變硬，彈性降低［5-8］。本實驗結果表明，SHR大鼠的胸主動脈內膜及細胞層結構紊亂，管壁結構不規則，安宮降壓丸能夠改善SHR大鼠的胸主動脈病理損傷，表明其對高血壓大鼠的血管損傷具有一定的保護作用。

eNOS為結構型一氧化氮合酶（NOS），主要分布于血管內皮細胞、心肌細胞、腎小管上皮細胞等組織中。eNOS能夠催化產生一氧化氮（NO），是體內重要的舒張血管物質，具有擴張血管、調節血壓、抑制血小板聚集、抗平滑肌細胞增殖、白細胞黏附等作用［9］。eNOS表達減少導致NO生成減少，從而引起內皮功能障礙，血壓升高［10］。本實驗結果表明，安宮降壓丸能夠提高SHR大鼠胸主動脈eNOS的表達，從而發揮其保護血管和降低血壓的作用。

心臟是高血壓病損害最主要的靶器官之一。心臟改變主要表現為心肌細胞肥大，心肌間質增生，心室壁向心性肥厚，心室腔容積減小，冠狀動脈供血不足，這種改變稱為心臟結構的重塑［11］。血壓升高是引起左心室肥厚的重要因素。左心室肥厚既是心肌細胞實質成分的肥大，同時存在心肌間質成分和血管結構變化。這種復雜的心臟“重構”主要表現在心肌細胞肥大、心肌異常纖維化、冠狀動脈硬化等病理變化［12］。本研究中，SHR大鼠的左心室病理變化主要表現為心肌細胞排列紊亂，局部心肌纖維斷裂，心肌纖維化，心肌細胞肥大，局部心肌細胞核近似長方形或圓形肥厚。安宮降壓丸對于左心室心肌細胞的病理改變具有明顯的抑制作用。

高血壓會導致體內小微血管結構的輕微改變，會使血管硬化，管腔增厚。SHR大鼠腦部血管結構的病變即重構性病變和肥厚性病變，從而使血管內徑縮小，管腔變厚［13］。本實驗中，SHR大鼠腦內血管管壁增厚，管腔狹窄，血管周圍組織間隙擴大。安宮降壓丸能夠有效緩解SHR大鼠腦血管的病理改變，表明其對大鼠腦血管損傷具有一定的保護作用。

長期高血壓會導致高血壓腎病。腎臟病理損傷由腎小球、腎小管缺血造成。主要表現為腎小球毛細血管壁皺縮性萎陷，毛細血管壁增厚，系膜區基質增生，囊壁增厚、硬化，腎間質纖維化等［14］。本實驗中SHR大鼠模型腎臟病理組織學變化主要表現為腎小球萎縮，玻璃樣變，小球硬化，局部腎小球代償性肥大，腎小球毛細血管擴張，腎小囊腔狹窄，腎小管排列紊亂，腎小管擴張，腎小管上皮細胞脫落，間質纖維化。安宮降壓丸能夠在一定程度上緩解SHR大鼠腎小球和腎小管的病理損傷。對于SHR大鼠腎臟具有一定的保護作用。

綜上所述，安宮降壓丸可以降低SHR大鼠的血壓，對SHR大鼠的胸主動脈、心、腦、腎靶器官具有一定的保護作用，其保護作用機制有待進一步深入研究。

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（收稿日期：2022-08-05）

（本文編輯王麗）