血小板抗體篩查結果及影響因素分析

【摘要】目的通過對27239例急診和住院患者進行血小板抗體篩查，分析不同患者類型、不同疾病類型中血小板抗體的陽性率分布，探討血小板抗體產生的相關影響因素。方法選擇2020年6月至2024年6月在中山大學附屬第三醫院輸血科急診和住院申請備血或輸血的27239例患者，采用紅細胞固相凝集法對血小板抗體進行篩查，根據患者血小板抗體檢測結果將患者分為血小板抗體陽性組和血小板抗體陰性組，分析2組患者間臨床資料，采用二元Logistic回歸分析篩選患者血小板抗體產生的相關影響因素。結果27239例患者中血小板抗體總陽性率為3.91%，其中女性患者血小板抗體陽性率高于男性患者（5.01%vs.2.41%，Plt;0.001）；各年齡段患者血小板抗體陽性率差異具有統計學意義（χ2=123.83，Plt;0.001），其中年齡≤10歲兒童血小板抗體陽性率最高，達到9.19%，其次為20～40歲年齡段，達到5.46%。有輸血史患者血小板抗體陽性率高于無輸血史患者（9.07%vs.3.45%，Plt;0.001）。此外，急診內科為血小板抗體陽性率最高的科室，其次分別為血液內科、產科、重癥醫學科和感染科。二元Logistic回歸分析顯示，女性、有輸血史、妊娠狀態、地中海貧血、甲狀腺疾病、肝衰竭、重癥肺炎、血小板減少是血小板抗體陽性的危險因素（均Plt;0.05）。結論對于女性、有輸血史、妊娠狀態，疾病診斷為血小板減少、肝衰竭、肺炎、地中海貧血或甲狀腺疾病患者，在血小板或紅細胞輸注前應高度重視血小板抗體篩檢，以預防血小板輸注無效及相關輸血不良反應。

【關鍵詞】血小板；血小板抗體；血小板輸注；血小板抗體陽性率

血小板在止血、血栓形成、促進血管修復、免疫調節和組織再生等方面發揮著重要功能。當機體在妊娠、輸血、患有自身免疫疾病、發生藥物反應或病毒感染時可能產生血小板抗體如人類白細胞抗原（humanleukocyteantigen，HLA）抗體、血小板特異性抗原（（humanplateletantigen，HPA）抗體（HPA抗體）和CD36抗體，從而導致免疫性血小板輸注無效（post-transfusionpurpura，PTR）、胎兒和新生兒同種免疫性血小板減少癥（fetalandneonatalalloimmunethrombocytopenia，FNAIT）、非溶血性發熱性輸血反應（febrilenon-hemolytictransfusionreaction，FNHTR）、輸血后紫癜（posttransfusionpurpura，PTP）等［1-6］。因此，輸血前進行患者血小板抗體篩查對預防血小板輸注無效和減少血小板輸注引起的輸血反應具有重要的臨床意義，但目前該方面的臨床研究較少。本研究回顧性分析了不同患者類型、不同疾病類型（包括肝衰竭和甲狀腺疾病等）中血小板抗體的陽性率分布，探討了血小板抗體產生與患者類型、輸血、妊娠和疾病類型的相關性，為臨床輸血前進行血小板抗體篩查，提高血小板輸注療效和降低臨床輸血反應提供更為全面的參考依據。

1對象與方法

1.1研究對象

采用回顧性研究方法，選取2020年6月至2024年6月在中山大學附屬第三醫院急診和住院輸血的27239例患者，其中男11569例、女15670例，年齡為（48.4±17.9）歲。排除標準：無血型記錄、病歷資料不完整。本研究已獲得中山大學附屬第三醫院倫理委員會的批準（批件號：醫倫II2024-302-01），并獲豁免患者知情同意。

1.2主要試劑與儀器

IH-1000全自動血型分析儀（美國伯樂公司），ID-Centrifuge12SⅡ卡式離心機（美國伯樂公司），配套所用血型分析稀釋液、ABO及Rh（D）血型檢測卡（美國伯樂公司）；單克隆抗-A、抗-B標準血清（上海血液生物醫藥有限責任公司）；L3-5K臺式低速離心機、D8H低速離心機（湖南可成儀器設備有限公司）；荷蘭三昆血小板抗體檢測試劑盒（固相凝集法），包含血小板特異性單克隆抗體固相血小板抗體試驗（monoclonalantibodysolidphaseplateletantibodytest，MASPAT）微孔板、血小板抗體篩檢細胞、低離子強度溶液、血小板抗體特異性的陽性質控，不包含血小板特異性抗體的陰性質控，抗IgG特異性鼠單克隆抗體，MASPAT0.3%致敏指示紅細胞，磷酸鹽緩沖液（phosphatebufferedsaline，PBS）。

1.3方法

1.3.1血型檢測

用EDTA-K2抗凝管采集患者2～3mL靜脈血，1500×g離心10min，以免纖維蛋白殘余干擾反應結果。離心后上機進行ABO和Rh（D）血型鑒定，正反定型不符的樣本進行微柱凝膠法手工法和試管法進行復查或結合患者臨床疾病特征進行鑒定。微柱凝膠法手工法步驟如下：壓積紅細胞25μL或全血50μL懸浮于0.5mL伯樂2號稀釋液中，取50μLA1型和B型標準細胞（0.8%）分別加入A1管和B管中，取50μL血漿或血清加入A1和B管中，取10μL5%樣本紅細胞加入A-B-D-Ctl管中。伯樂卡式專用離心機（ID-Centrifuge12SⅡ）離心10min。判讀并記錄結果。

1.3.2血小板抗體檢測

用EDTA-K2抗凝管采集患者2～3mL靜脈血，3000轉/分離心10min取上清液進行檢測，檢測前將所有試劑恢復至室溫，檢測步驟簡述如下：每個微孔板加入50μL篩選血小板抗原，50rcf離心5min，使血小板固定到微孔板表面；用150μL的PBS/Tween0.005%手工洗板3次，去除未結合的血小板。然后將100μL低離子強度溶液（lowionicstrengthsolution，LISS）和50μL患者血清或陰陽性對照依次加入相應的微孔中孵育，如果患者血清中存在血小板抗體（HLA抗體或HPA抗體）將會與固定在微孔板底部的血小板單細胞層結合。

將微孔板在37℃孵育30min，用150μL的PBS/Tween0.005%手工洗板5次。加入鼠單克隆抗人IgG和人IgG致敏紅細胞（MASPAT指示紅細胞）后，通過離心微孔板的方法檢測血小板結合抗體。結果判讀：陽性或者弱陽性反應顯示為微孔底部形成一層指示紅細胞，表明血清中存在HPA和（或）HLA特異性抗體；陰性反應顯示為指示紅細胞在微孔板底部形成紐扣狀，表明血清中不存在血小板抗體或HLA特異抗體。

1.4統計學方法

采用SPSS25.0進行數據分析，計數資料以n（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。以因變量為血小板抗體是否陽性（陰性=0，陽性=1），自變量為性別（男=0，女=1）、輸血史（有=1，無=0）、妊娠（是=1，無=0）及各病種，年齡以0～10歲作為參照進行二分類Logistic回歸分析血小板抗體陽性的影響因素。雙側Plt;0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1血小板抗體檢測結果的人群分布特征

27239例就診患者中，檢出血小板抗體陽性為1064例，陰性為26175例，血小板抗體陽性率為3.91%。其中男性患者有11569例，血小板抗體陽性率為2.41%，女性患者有15670例，血小板抗體陽性率為5.01%，比較差異有統計學意義（Plt;0.001）；年齡≤10歲患者的血小板抗體陽性率為9.19%，年齡21～40歲患者的血小板抗體陽性率為5.46%，各年齡段比較差異有統計學意義（Plt;0.001）；有輸血史患者的血小板抗體陽性率為9.07%，無輸血史患者的血小板抗體陽性率為3.45%，比較差異有統計學意義（Plt;0.001）；不同血型患者的血小板抗體陽性率比較，差異無統計學意義（Pgt;0.05）。見表1。

2.2篩查出血小板抗體陽性的臨床科室分布特征

篩查血小板抗體陽性率最高的科室為急診內科10.33%，住院患者中以血液內科最高，為8.82%，其次為產科（7.68%）、重癥醫學科（7.50%）、感染科（7.47%）、兒科（7.19%）、風濕免疫科（7.10%）、神經內科（4.86%）、腫瘤內科（3.70%）等科室。見表2。

2.3篩查出血小板抗體陽性患者的疾病分布特征

在疾病分布中，地中海貧血患者的血小板抗體的陽性率最高（16.33%），其次為再生障礙性貧血（13.64%）、瘢痕子宮（11.97%）、甲狀腺疾病（11.35%）和肝衰竭（10.86%）患者，見表3。33例年齡≤10歲血小板抗體陽性患兒疾病類型中，重癥肺炎8例（24.2%），白血病7例（21.2%），肝膽疾病（膽道閉鎖、膽管擴張、肝炎和肝衰竭）6例（18.2%），血小板減少性紫癜2例（6.1%）。

2.4血小板抗體陽性影響因素的多因素分析

二分類Logistic回歸分析結果顯示，女性、有輸血史、妊娠狀態、地中海貧血、甲狀腺疾病、肝衰竭、重癥肺炎、血小板減少是血小板抗體陽性的危險因素（Plt;0.05）。各年齡段分組中大于10歲的患者相對于0～10歲的患兒差異均有統計學意義（均Plt;0.05）。見表4。

3討論

血小板輸注已被廣泛應用于治療血小板減少或血小板功能障礙的患者。已有研究表明，輸血次數、女性孕產史、炎癥、腫瘤生長和轉移、化學治療、藥物是血小板抗體產生的影響因素［7-11］。血小板表面主要表達2類抗原系統，一類是位于血小板膜糖蛋白上的HPA抗原；另一類是血小板與其他細胞或組織共有的非特異性血小板抗原，包括HLA抗原系統、紅細胞ABH、Lewis、CD36抗原等［12］。這些抗原在血小板參與免疫調節和輸血反應中發揮重要作用。血小板抗體主要有2種類型：一種是抗HLA-I類抗原的抗體，另一種是抗血小板膜糖蛋白抗原的血小板特異性抗體［13］。血小板輸注引起的輸血反應，如FNHTR、PTP等和血小板輸注無效，主要由免疫刺激產生HLA抗體和HPA抗體所致［14-16］。因此，輸血前進行患者血小板抗體篩查對預防血小板輸注無效和減少血小板輸注引起的輸血反應具有重要的臨床意義。

此項回顧性研究顯示，27239例患者中血小板抗體總陽性率為3.91%，低于牛佳萌等［17］報道的10.27%和陸樂等［18］報道的5.58%，這可能與選取的患者資料、人群和地域等因素有關。本研究在不同性別中比較血小板抗體陽性率，發現女性患者高于男性患者（5.01%vs.2.41%），這可能與女性妊娠、流產等因素產生血小板抗體有關。多項研究顯示，婦女的妊娠次數與血小板抗體的產生存在一定的關聯性。妊娠次數越多的婦女，血小板抗體的陽性率越高，妊娠次數和血小板抗體陽性率具有線性趨勢，這一現象與妊娠期間的免疫調節和母-胎之間的免疫相容性相關［19-23］。在年齡組抗體分布中，小于10歲兒童血小板抗體陽性率最高，達到9.19%（33/359），這可能與≤10歲兒童免疫系統未成熟致同種免疫易感性高、高發血液病（白血病、血小板減少性紫癜）及反復輸血暴露有關。本研究中，33例小于10歲血小板抗體陽性兒童疾病類型以重癥肺炎、白血病、肝膽疾病（膽道閉鎖、膽管擴張、肝炎和肝衰竭）、血小板減少性紫癜為主要特征。其次為21～40歲年齡段，血小板陽性率達到5.46%，這顯然與育齡期婦女多次妊娠和不良妊娠有關。有輸血史患者血小板抗體陽性率高于無輸血史患者（9.07%vs.3.45%）。有研究顯示，多次輸血的患者其血小板抗體的產生與輸血次數呈正相關，輸血次數越多抗體強度越高［11，24］，輸血達到5次以上的患者更容易產生血小板抗體［25］。

本研究中，急診內科的血小板抗體陽性率最高，可能是與門診輸血患者中血液病［26-27］與地中海貧血［28］患者比例居多有關。在住院患者中，血液內科患者血小板抗體陽性率最多，其次是產科、重癥醫學科和感染科。二元Logistic多因素回歸分析結果顯示，女性、有輸血史、血小板減少、妊娠狀態、肝衰竭、重癥肺炎、甲狀腺疾病和地中海貧血是產生血小板抗體的危險因素。在一些造血功能紊亂的血液疾病中，骨髓中的造血干細胞異常增殖或分化可能導致異常的血小板生成或釋放，從而產生血小板同種抗體或自身抗體［26-27］。此外在一些炎癥狀態下，炎癥因子的釋放和免疫細胞的異常活化也可以促進血小板抗體的生成。

此項研究還發現，甲狀腺疾病患者的血小板抗體陽性率高達11.35%，這可能與甲狀腺疾病尤其是自身免疫性甲狀腺疾病（如Graves病和Hashimoto甲狀腺炎）中甲狀腺功能異常、免疫系統的異常活化、單克隆或寡克隆細胞擴增可能導致產生針對甲狀腺和血小板抗原的抗體有關［29］。在一項與自身免疫性甲狀腺疾病（autoimmunethyroiddisease，AITD）相關的血小板減少癥的發病機制研究中，Cordiano等［30］調查了18例伴血小板減少癥的AITD患者、19例無血小板減少癥的AITD患者以及22例無AITD臨床表現的原發性自身免疫血小板減少性紫癜患者的血小板和甲狀腺自身抗體的存在和特異性。結果顯示，在伴血小板減少癥的AITD患者中檢測到83%的患者存在血小板抗體，在無血小板減少癥的AITD患者中檢測到10%的患者存在血小板抗體，在原發性自身免疫血小板減少性紫癜患者中檢測到86%的患者存在血小板抗體。該研究顯示，AITD和原發性自身免疫血小板減少性紫癜中具有相似血小板抗體陽性率和特異性，甲狀腺和血小板自身免疫存在交叉重疊，其潛在的機制需要進一步深入研究。此外多次妊娠、胎兒和母體HLA和HPA不相合也均會產生血小板同種抗體，可能導致免疫PTR、胎兒和新生兒同種免疫性血小板減少癥、FNHTR等。因此，為了提高血小板的輸注療效和減少輸血不良反應，在血小板或紅細胞輸注前進行血小板抗體（HLA抗體+HPA抗體）篩查就顯得十分必要。若患者血小板抗體篩查陽性，務必選擇輸注配型相合的血小板或輸注白細胞去除的紅細胞和血小板，從而預防血小板輸注無效和減少輸血不良反應，杜絕盲目輸血。

綜上所述，本研究通過對大規模患者樣本的血小板抗體篩查進行分析，揭示了不同疾病狀態下血小板抗體的產生規律和臨床意義，為免疫性血小板輸注無效、胎兒和新生兒同種免疫性血小板減少癥等相關疾病的診斷和預防提供了重要的參考依據。本研究的局限性在于，由于回顧性設計，未能區分患者的血小板HPA抗體和HLA抗體。未來的前瞻性研究將致力于區分這2類抗體，并進一步實現HPA和HLA抗體的精細分型檢測。

利益沖突聲明：本研究未受到企業、公司等第三方資助，不存在潛在利益沖突。

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（責任編輯：林燕薇）