細胞塊切片免疫組化染色在胸腔積液病理診斷中的應用

余衛東　蔡育波　劉瓊茹等

[摘要] 目的 探討細胞塊切片免疫組化染色應用于胸腔積液病理診斷的臨床效果。 方法 選擇本院收治的60例胸腔積液患者作為研究對象，分別采用細胞塊切片免疫組化染色檢測和常規細胞涂片檢測，檢測患者的CK7、CD15、MOC-31、BerEP4、TTF-1、CEA、Calretinin、WT-1、CK5/6、Desmin等指標表達，對鑒別診斷肺腺癌和間皮病變的相關免疫標記組化進行篩選。 結果 兩組胸腔積液的陽性檢出率相比，P<0.05。細胞塊切片免疫組化染色檢測分型診斷惡性胸腔積液的符合率高達96.67%，經過組合性抗體檢測發現，間皮病變呈現Calretinin、WT-1、CK5/6、Desmin指標高表達，而肺腺癌則呈現CK7、CD15、MOC-31、BerEP4、TTF-1、CEA指標高表達，顯示細胞塊切片免疫組化染色檢測明顯優于常規細胞涂片檢測（P<0.01）。 結論 在適當的抗體組合下，胸腔積液細胞塊切片結合免疫組化染色檢測對肺腺癌和間皮瘤等惡性胸腔積液具有非常的病理鑒別診斷效果，值得臨床推廣。

[關鍵詞] 胸腔積液；細胞塊切片；細胞涂片；免疫組化；病理診斷

[中圖分類號] R446.8 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）12-0127-03

[Abstract] Objective To explore the clinical effect of cell block slice immunohistochemical staining was applied to pathologic diagnosis of pleural effusion. Methods Selected 60 patients with pleural effusion were treated at our hospital as the research object， the cell block slice immunohistochemical staining were used respectively to test and conventional smear test， the testing of patient CK7，CD15，MOC-31，BerEP4， TTF-1，CEA，Calretinin，WT-1， CK5/6， Desmin index expression， such as for differential diagnosis between skin lesions of lung adenocarcinoma and filtered immune markers related to network stations. Results The two positive rate of pleural effusion compared， P<0.05. Cell block sections immunohistochemical staining typing diagnosis of malignant pleural effusion compliance rate of 96.67%， after a combination of antibodies detected， mesothelial lesions showed Calretinin， WT-1， CK5/6， Desmin indicators of high expression the lung cancer was showing CK7， CD15， MOC-31， BerEP4， TTF-1， CEA indicators of high expression， indicating cell block sections immunohistochemical staining was significantly better than conventional smear test（P <0.01）. Conclusion The under the appropriate combination of antibody， pleural effusion cells block biopsy combined with immunohistochemical staining detection for such as lung adenocarcinoma and mesothelioma pathological differential diagnosis of malignant pleural effusion is very effect， worth clinical promotion.

[Key words] Pleural effusion； Cell block sections； Smears； Immunohistochemistry； Pathological diagnosis

一直以來，漿膜腔積液的細胞病理學診斷具有非常重要的臨床意義。傳統上，漿膜腔積液的臨床診斷主要使用細胞涂片法，但是細胞涂片檢測的敏感度比較低，僅為50.0%～78.0%[1-3]。這是因為在細胞涂片檢測過程中，由于漿膜腔原發性間皮性腫瘤與轉移性癌癥的細胞形態比較相似，因此很難作為細胞病理鑒別診斷[4，5]。在臨床過程中，對間皮性腫瘤與轉移性癌癥的區分關系到臨床醫生的治療方案選擇和確定，因此對間皮性腫瘤與轉移性癌癥進行鑒別診斷的意義非常重大，尤其是對于肺腺癌和惡性間皮瘤的鑒別診斷。為此，為了解胸腔積液細胞塊切片免疫組化染色的病理診斷方法，探討細胞塊切片免疫組化染色應用于胸腔積液病理診斷的臨床效果，選擇本院2011年6月～2013年6月60例胸腔積液患者作為觀察對象，對比研究細胞涂片法與細胞塊切片結合免疫組化染色法對胸腔積液的鑒別診斷效能，以尋找對胸腔積液進行病理鑒別診斷的最有效方法，現報道如下。endprint

1資料與方法

1.1一般資料

選擇本院2011年6月～2013年6月呼吸內科門診所接收的60例胸腔積液患者。其中，男36例，女24例，年齡20～72歲，平均（47.6±15.7）歲。所有患者送檢標本均為胸腔積液，每例患者均進行細胞涂片和細胞塊切片制作。所有患者經過臨床特征加影像學檢查均診斷為惡性胸腔積液，本研究均征得患者及其家屬同意，并簽署試驗意見書。

1.2方法

1.2.1標本制備 所有細胞涂片和細胞塊標本均取10 mL，分為3～5個管，使用離心機分離沉渣后制成HE涂片，離心率為3 000 r/min，分離時間為10 min。然后將分離后剩下的沉渣使用試鏡紙進行包裹，固定在10%福爾馬林中性固定液中，經過常規的處理后制備成細胞蠟塊，然后進行細胞連續切片，切片厚度為3～4 μm。所有細胞涂片和細胞塊切片分別進行HE染色和免疫組化染色。

1.2.2 HE染色標本觀察[6] 所有觀察過程由兩位具有高級職稱的病理醫生進行觀察。根據標本中的細胞形態、黏附性以及核不典型性，如果出現反應性增生間皮細胞，細胞的彌散性好，無不典型性，比較溫和則為良性；如果細胞成團，核具有嚴重不典型性，細胞形態嚴重不溫和則為惡性；如果細胞彌散，核中-重度不典型性，或者是細胞成團，核中-輕度不典型性則為不能肯定。

1.2.3免疫組化染色標本觀察[7] 使用S-P法，Maxvision試劑盒，DAB顯色試劑；抗體選擇為CK7、CD15、MOC-31、BerEP4、TTF-1、CEA、Calretinin、WT-1，CK5/6、Desmin。所有操作按照說明書進行。判斷標準為：CK7、BerEP4、CEA、MOC-31、CK5/6、Desmin細胞質染色呈棕黃色為陽性，WT-1、TTF-1細胞核呈棕黃色為陽性，Calretinin的細胞核和細胞質均顯色為陽性，CD15細胞膜和細胞質染色為陽性。

1.3統計學方法

采用SPSS15.0軟件進行統計學處理，計數資料行χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1兩組檢測陽性比較

兩組胸腔積液的陽性檢出率相比，差異有統計學意義（χ2=32.935，P<0.05），見表1。

2.2兩組病理診斷結果比較

細胞塊切片免疫組化染色檢測分型診斷惡性胸腔積液的符合率高達96.67%，經過組合性抗體檢測發現，間皮病變呈現Calretinin、WT-1、CK5/6、Desmin指標高表達，而肺腺癌則呈現CK7、CD15、MOC-31、BerEP4、TTF-1、CEA指標高表達，顯示細胞塊切片免疫組化染色檢測明顯優于常規細胞涂片檢測，兩組相比差異有高度統計學意義（P<0.01），見表2。

3討論

漿膜腔積液的細胞病理學診斷有非常重要的臨床意義。由于胸腔積液細胞學檢查的樣本采集比較容易，制備比較簡單快捷，因此細胞涂片法早已用于病理學檢查。但是，傳統使用細胞涂片法在漿膜腔積液的臨床診斷檢測中的敏感度比較低，一般僅為50.0%～78.0%[8，9]。這主要是因為在細胞涂片檢測過程中，漿膜腔原發性間皮性腫瘤與轉移性癌癥的細胞形態比較相似，因此很難作為細胞病理鑒別診斷。這種因胸腔積液細胞成分比較復雜而導致的細胞形態的相似性給經HE染色的常規離心涂片用于判斷胸腔積液的性質增加了難度[10]。尤其是對于間皮性腫瘤與轉移性癌癥，其細胞形態非常相似，以致于很難使用單純的細胞涂片檢測將其進行區分。然而在臨床過程中，對間皮性腫瘤與轉移性癌癥的區分關系到臨床醫生的治療方案選擇和確定，因此對間皮性腫瘤與轉移性癌癥進行鑒別診斷的意義非常重大，尤其是對于肺腺癌和惡性間皮瘤的鑒別診斷。從本文的分析來看，本組存在14例無法判斷胸腔積液是否良性。可以看出，細胞涂片HE染色檢測目前還存在諸多不足。

從上文的分析來看，細胞塊切片免疫組化染色對胸腔積液的陽性檢出率為100%，遠高于僅單純性使用細胞涂片HE染色檢測組（P<0.05）。而且，經過分析結果顯示，細胞塊切片免疫組化染色檢測分型診斷惡性胸腔積液的符合率高達96.67%，經過進行組合性抗體檢測發現，間皮病變呈現Calretinin、WT-1、CK5/6、Desmin指標高表達，而肺腺癌則呈現CK7、CD15、MOC-31、BerEP4、TTF-1、CEA指標高表達，顯示細胞塊切片免疫組化染色檢測明顯優于常規細胞涂片檢測（P<0.01），說明細胞塊切片免疫組化染色無論在病理診斷的敏感性還是特異性上都明顯好于細胞涂片HE染色。這主要是因為細胞塊分布比較均勻，能夠充分保持脫落細胞的實際形態結構，使得在進行鑒別檢查時能夠清晰地辨別細胞的形態。而細胞涂片則因為分布不均勻，因而容易導致細胞重疊，從而致使細胞的結構不清楚，細胞形態不清晰，非常不利于胸腔積液的病理鑒別檢查。尤其是細胞涂片易出現厚薄不勻、數量差異致使容易出現高背景著色，使得臨床假陽性檢出率增高，導致臨床出現誤診。而且細胞涂片由于其陽性表達細胞沒有相應的對應標準，因而還增加臨床判讀的難度。然而，細胞塊切片免疫組化染色卻擁有細胞涂片所不能具備的優點，比如細胞分布非常均勻、能夠有效避免假陽性、其陽性表達易于觀察、能夠進行對應性的準確判讀、標本可以永久性保持、有利于回顧性研究等等。這也是本文細胞塊切片免疫組化染色檢測分型診斷惡性胸腔積液的符合率高達96.67%的重要原因。

可見，使用細胞塊切片免疫組化染色可以有效避免細胞涂片HE染色帶來的高誤診率和高漏診率。從臨床應用經驗分析，細胞塊切片免疫組化染色對判斷漿膜腔積液的細胞類型和性質是非常有利的。因此，從現在的技術水平來講，細胞塊切片免疫組化染色是對胸腔積液進行病理診斷的最優方法。然而，最為重要也最為關鍵的是，細胞塊切片的制定過程非常簡單，操作簡單易行，標本易于保存，對于我國醫療水平比較低的廣大基層醫院來說最為實用。endprint

在進行胸腔積液的細胞塊切片免疫組化染色檢測的過程中，檢測的敏感度和特異度對臨床鑒別診斷抗體組合的選擇的依賴也是比較大的。一般來講，肺腺癌有CK7、CD15、MOC-31、BerEP4、TTF-1、CEA表達，而間皮病變則主要有Calretinin、WT-1、CK5/6、Desmin表達。有臨床研究表明，CK7是臨床肺腺癌的最敏感的因子。由于這種組合的選擇對臨床進行肺腺癌和間皮瘤的篩查非常重要，因此一般都將上述因子作為一線抗體進行臨床應用，當然還需要結合臨床病史、隨訪資料等進行綜合鑒別。

總而言之，在適當的抗體組合下，胸腔積液細胞塊切片結合免疫組化染色檢測對諸如肺腺癌和間皮瘤等惡性胸腔積液具有非常的病理鑒別診斷效果，值得臨床予以推廣。

[參考文獻]

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[10] 唐應成，梁利斌，楊瑞仙，等. 胸腔積液細胞塊免疫組化染色的病理診斷價值[J]. 第三軍醫大學學報，2012， 34（15）：1568-1571.

（收稿日期：2013-10-18）endprint

在進行胸腔積液的細胞塊切片免疫組化染色檢測的過程中，檢測的敏感度和特異度對臨床鑒別診斷抗體組合的選擇的依賴也是比較大的。一般來講，肺腺癌有CK7、CD15、MOC-31、BerEP4、TTF-1、CEA表達，而間皮病變則主要有Calretinin、WT-1、CK5/6、Desmin表達。有臨床研究表明，CK7是臨床肺腺癌的最敏感的因子。由于這種組合的選擇對臨床進行肺腺癌和間皮瘤的篩查非常重要，因此一般都將上述因子作為一線抗體進行臨床應用，當然還需要結合臨床病史、隨訪資料等進行綜合鑒別。

總而言之，在適當的抗體組合下，胸腔積液細胞塊切片結合免疫組化染色檢測對諸如肺腺癌和間皮瘤等惡性胸腔積液具有非常的病理鑒別診斷效果，值得臨床予以推廣。

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（收稿日期：2013-10-18）endprint

在進行胸腔積液的細胞塊切片免疫組化染色檢測的過程中，檢測的敏感度和特異度對臨床鑒別診斷抗體組合的選擇的依賴也是比較大的。一般來講，肺腺癌有CK7、CD15、MOC-31、BerEP4、TTF-1、CEA表達，而間皮病變則主要有Calretinin、WT-1、CK5/6、Desmin表達。有臨床研究表明，CK7是臨床肺腺癌的最敏感的因子。由于這種組合的選擇對臨床進行肺腺癌和間皮瘤的篩查非常重要，因此一般都將上述因子作為一線抗體進行臨床應用，當然還需要結合臨床病史、隨訪資料等進行綜合鑒別。

總而言之，在適當的抗體組合下，胸腔積液細胞塊切片結合免疫組化染色檢測對諸如肺腺癌和間皮瘤等惡性胸腔積液具有非常的病理鑒別診斷效果，值得臨床予以推廣。

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