FOXQ1基因介導(dǎo)了Shh誘導(dǎo)的SW480 細(xì)胞血管生成及增殖

朱雙偉，　李相述，　彭旭東，　陳　誠(chéng)，　陳小龍，　魏正強(qiáng)

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胃腸外科, 重慶 400016)

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FOXQ1基因介導(dǎo)了Shh誘導(dǎo)的SW480 細(xì)胞血管生成及增殖

朱雙偉，李相述，彭旭東，陳誠(chéng)，陳小龍，魏正強(qiáng)△

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胃腸外科, 重慶 400016)

[摘要]目的： 探討FOXQ1基因沉默對(duì)大腸癌SW480細(xì)胞血管生成及增殖能力的影響及其在Sonic hedgehog(Shh)通路中的作用。方法：以攜帶FOXQ1-shRNA的慢病毒載體感染SW480細(xì)胞，將細(xì)胞株分為FOXQ1-shRNA和NC-shRNA組，利用臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系926細(xì)胞行體外血管形成實(shí)驗(yàn)，熒光顯微鏡觀察2組細(xì)胞血管形成能力，MTT、倍增時(shí)間、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)2組細(xì)胞的存活率，real-time PCR、Western blot檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)-A、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)2和cyclin D1 mRNA和蛋白水平。利用重組Shh蛋白誘導(dǎo)上述2組細(xì)胞，觀察誘導(dǎo)前后細(xì)胞存活率及血管形成能力的變化，檢測(cè)上述分子的表達(dá)差異。結(jié)果：與NC-shRNA組細(xì)胞相比，F(xiàn)OXQ1-shRNA組細(xì)胞的體外血管形成能力降低，而存活率無(wú)明顯變化，real-time PCR及Western blot顯示FOXQ1基因沉默后，VEGF-A和MMP2的表達(dá)下調(diào)，cyclin D1表達(dá)無(wú)顯著差異。與NC-shRNA組比較，重組Shh蛋白誘導(dǎo)的FOXQ1-shRNA體外血管形成能力更低，存活率無(wú)明顯差異。結(jié)論：FOXQ1基因介導(dǎo)了大腸癌SW480細(xì)胞的血管形成能力，對(duì)存活率無(wú)明顯影響，并且可能受到Shh通路調(diào)控。

[關(guān)鍵詞]FOXQ1基因； Sonic hedgehog； 大腸癌； 細(xì)胞增殖； 血管生成

結(jié)直腸癌在世界多數(shù)國(guó)家的發(fā)病率呈持續(xù)上升趨勢(shì)[1]。結(jié)直腸癌細(xì)胞的惡性行為包括過(guò)度異常的增殖、血管形成能力、侵襲遷移、對(duì)藥物敏感性的變化等，涉及Wnt/β-catenin、Hedgehog、TGF-β/Smads等多種信號(hào)通路及轉(zhuǎn)錄因子(snail、GLI2等)[2-4]。

FOXQ1基因是叉頭框(forkhead box，F(xiàn)OX)基因家族的重要成員之一[3]。近年來(lái)，其作為原癌基因的角色逐漸被人們認(rèn)識(shí)，其與信號(hào)通路間的相互作用與腫瘤密切相關(guān)[4-5]。研究表明在大腸癌組織中FOXQ1基因表達(dá)明顯增高，并與腫瘤的分期及轉(zhuǎn)移相關(guān)，這提示其可能參與了結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展，但具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究[6-7]。我們前期的實(shí)驗(yàn)已證實(shí)，其與大腸癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化關(guān)系密切[8-9]，而FOXQ1是否參與了大腸癌細(xì)胞的血管形成及增殖尚待進(jìn)一步研究。

Sonic hedgehog(Shh)信號(hào)通路在胚胎發(fā)育、細(xì)胞分化、維持組織極性及組織損傷與修復(fù)過(guò)程中發(fā)揮重要作用，在正常成熟組織中處于失活狀態(tài)，近年來(lái)在許多腫瘤中發(fā)現(xiàn)Shh信號(hào)通路異常激活，參與調(diào)控腫瘤的發(fā)生發(fā)展及惡性生物學(xué)行為的維持[10-11]。研究表明Shh的表達(dá)與大腸癌的關(guān)系密切，參與了大腸癌細(xì)胞的增殖、血管形成及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[12-13]。FOX為近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄因子超家族，其中有許多受到Shh通路的調(diào)節(jié)，參與腫瘤的發(fā)展[14]，F(xiàn)OXQ1與Shh信號(hào)通路的關(guān)系待進(jìn)一步研究。

本研究利用基因沉默技術(shù)沉默大腸癌細(xì)胞SW480的FOXQ1基因，觀察FOXQ1基因沉默對(duì)SW480細(xì)胞血管形成和存活率的影響。為了探索FOXQ1是否介導(dǎo)了Shh通路所誘導(dǎo)的惡性行為，我們采用重組Shh蛋白誘導(dǎo)SW480 細(xì)胞，觀察誘導(dǎo)前后細(xì)胞的血管形成及存活率的改變。

材料和方法

1材料

大腸癌SW480細(xì)胞株、臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系926細(xì)胞株(EA.hy926)由重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院實(shí)驗(yàn)研究中心保存；RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清為HyClone產(chǎn)品；FOXQ1-shRNA沉默慢病毒載體、陰性對(duì)照(negative control,NC)慢病毒載體均購(gòu)于上海紐恩生物科技公司；重組蛋白Shh購(gòu)于PeproTech；real-time PCR相關(guān)試劑盒及擴(kuò)增引物均為T(mén)aKaRa產(chǎn)品；兔抗人FOXQ1蛋白抗體為Santa Cruz產(chǎn)品；兔抗人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)-A、基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)2和細(xì)胞周期蛋白D1(cyclin D1)抗體為武漢三鷹公司的產(chǎn)品；鼠抗人GAPDH抗體、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗鼠 II 抗、兔抗兔 II 抗均為ABgent產(chǎn)品；Western blot相關(guān)試劑盒均購(gòu)于上海碧云天公司。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1細(xì)胞培養(yǎng)SW480細(xì)胞和EA.hy926細(xì)胞在含12%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基、5% CO2、37 ℃的培養(yǎng)箱里培養(yǎng)。重組蛋白Shh誘導(dǎo)細(xì)胞的濃度為10 μg/L，誘導(dǎo)時(shí)間為48 h。

2.2慢病毒轉(zhuǎn)染及有效沉默序列的篩選用于轉(zhuǎn)染的攜帶FOXQ1-shRNA(3種)及陰性NC-shRNA慢病毒沉默序列分別如下：FOXQ1-sh1為5′-CGCGGACUUUGCACUUUGA-3′，F(xiàn)OXQ1-sh2為5′-CCAGCTCCTTCGCCATCGACA-3′，F(xiàn)OXQ1-sh3為5′-GGCUGGCUUCAUCCACUGC-3′，NC-shRNA為5′-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3′。消化調(diào)整細(xì)胞濃度為2×108/L，取每孔1 mL種于6孔板中(分陰性組、sh1組、sh2組和sh3組，每組3個(gè)復(fù)孔)，搖勻后常規(guī)培養(yǎng)。14 h后 以MOI=30分別加入上述4種病毒載體，并每孔加入終濃度為5 mg/L的轉(zhuǎn)染增敏劑polybrene，16 h后換液。轉(zhuǎn)染72 h后于熒光顯微鏡下觀察熒光強(qiáng)度，明確轉(zhuǎn)染效率。消化擴(kuò)大培養(yǎng)后提取總RNA和總蛋白檢測(cè)沉默效果，選取效果最好的慢病毒載體為后續(xù)轉(zhuǎn)染載體，將細(xì)胞分為FOXQ1-shRNA組(感染FOXQ1-sh慢病毒的SW480細(xì)胞)和NC-shRNA組(感染陰性對(duì)照序列的SW480細(xì)胞)。采用NC-shRNA序列轉(zhuǎn)染EA.hy926細(xì)胞，除鋪板是密度為每孔5×104外，其余方法同上。

2.3Real-time PCR法檢測(cè)FOXQ1、VEGF-A、MMP2和cyclin D1 mRNA的水平檢測(cè)用TRIzol法提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA，用CFX96擴(kuò)增儀分別擴(kuò)增各目的基因。擴(kuò)增條件為95 ℃ 30 s;95 ℃ 5 s，55～60 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，共35個(gè)循環(huán); 最后72 ℃ 10 min。各目的基因引物序列見(jiàn)表1。

表1　各目的基因的引物序列

2.4FOXQ1、VEGF-A、MMP2和cyclin D1蛋白水平的檢測(cè)提取總蛋白并測(cè)濃度，電泳時(shí)每個(gè)泳道分別加入50 μg蛋白，電泳時(shí)間約為2 h。根據(jù)各目的蛋白分子量切膠，并轉(zhuǎn)至PVDF膜上，TBST洗膜后5%脫脂牛奶封閉2 h，分別用GAPDH(1∶2 000)、FOXQ1(1∶2 000)、VEGF-A(1∶500)、MMP2(1∶500)、cyclin D1(1∶500) I抗，4 ℃過(guò)夜。37 ℃復(fù)溫2 h后，分別用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗鼠、兔抗兔 II 抗，37 ℃孵育2 h。利用ECL發(fā)光液顯色，F(xiàn)usion軟件分析光密度。

2.5體外血管形成實(shí)驗(yàn)取各組細(xì)胞不換液連續(xù)培養(yǎng)3 d后的培養(yǎng)基1 mL，再與1 mL完全培養(yǎng)基混勻后加入6孔板中。取2.5×105個(gè)NC-shRNA病毒感染的EA.HY926細(xì)胞接種于上述培養(yǎng)瓶，常規(guī)培養(yǎng)48 h后，顯微鏡下觀察血管形成情況，攝片，計(jì)數(shù)。

2.6MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率和生長(zhǎng)曲線取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的2組細(xì)胞，消化并計(jì)數(shù)，制成1×107/L細(xì)胞懸液，每孔接種200 μL至96孔板內(nèi)，設(shè)6個(gè)平行孔。即刻、24 h、48 h、72 h每孔加入MTT(5 g/L)20 μL，4 h后去上清液，每孔加150 μL DMSO，在全波長(zhǎng)自動(dòng)酶標(biāo)儀570 nm處比色測(cè)吸光度(A)值。以橫坐標(biāo)為時(shí)間，縱坐標(biāo)為吸光度值，繪制3組細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。倍增時(shí)間：取2×103細(xì)胞加入培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)7 d，每組重復(fù)3次。第7天消化、計(jì)數(shù)，計(jì)算倍增時(shí)間(h)=7×[lg2/(lgN7-lgN0)]×24(N0、N7分別為首次、7 d時(shí)的細(xì)胞數(shù))。平板克隆形成實(shí)驗(yàn)：取狀態(tài)良好的細(xì)胞，用0.125%胰蛋白酶消化吹勻，計(jì)數(shù)，取2 000個(gè)細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板中，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)孔，常規(guī)培養(yǎng)15 h。4%多聚甲醛固定后，結(jié)晶紫染色，用CanoScan 9000F MarkII 掃描儀進(jìn)行集落掃描，計(jì)數(shù)每孔集落數(shù)(以大于50 個(gè)細(xì)胞聚集計(jì)為1 個(gè)集落)。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SAS 8.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)采用重復(fù)測(cè)量的方差分析；多組之間的均數(shù)比較采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)；所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1FOXQ1-sh1成功沉默SW480細(xì)胞FOXQ1基因

Real-time PCR和Western blot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，第一條序列即FOXQ1-sh1沉默效果最佳。FOXQ1-sh1組與NC-shRNA組比較其mRNA水平下降了85.3%，蛋白質(zhì)水平下降了75.7%，F(xiàn)OXQ1的mRNA和蛋白表達(dá)量在陰性組和對(duì)照組之間的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，見(jiàn)圖1。后續(xù)實(shí)驗(yàn)均以FOXQ1-sh1為沉默載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞，命名為FOXQ1-shRNA組。NC-shRNA組轉(zhuǎn)染的細(xì)胞為陰性對(duì)照組，未轉(zhuǎn)染細(xì)胞為正常對(duì)照(control)組。

2沉默F(xiàn)OXQ1基因?qū)W480細(xì)胞的血管形成能力的影響

FOXQ1-shRNA組管腔形成的數(shù)量明顯少于NC-shRNA組(P<0.05)，同時(shí)FOXQ1-shRNA組大多沒(méi)有形成的完整管腔，且直徑明顯小于對(duì)照組,見(jiàn)圖2。

3沉默F(xiàn)OXQ1基因?qū)W480細(xì)胞存活率的影響

利用MTT、倍增時(shí)間及平板克隆來(lái)檢測(cè)2組細(xì)胞存活率的差異。結(jié)果表明，2組細(xì)胞的存活率沒(méi)有明顯差別。FOXQ1-shRNA組與NC-shRNA組細(xì)胞發(fā)生倍增的時(shí)間、集落形成數(shù)及細(xì)胞的存活率均無(wú)明顯差異,見(jiàn)圖3。

4沉默F(xiàn)OXQ1基因?qū)W480細(xì)胞VEGF-A、MMP2和cyclin D1 mRNA和蛋白表達(dá)的影響

FOXQ1-shRNA組的VEGF-A、MMP2的相對(duì)表達(dá)量分別為NC-shRNA組的(33.8±1.4)%和(35.7±9.4)%(P<0.01)，cyclin D1表達(dá)無(wú)顯著差異(P>0.05)，見(jiàn)圖4。

5Shh通路可誘導(dǎo)SW480 細(xì)胞的FOXQ1表達(dá)

利用含重組Shh蛋白(10 μg/L)培養(yǎng)基培養(yǎng)SW480細(xì)胞，48 h后，檢測(cè)細(xì)胞FOXQ1的表達(dá)變化，結(jié)果表明,重組蛋白Shh的處理能夠明顯增加SW480細(xì)胞FOXQ1的表達(dá)，見(jiàn)圖5。

6FOXQ1介導(dǎo)了Shh誘導(dǎo)的細(xì)胞血管生成能力的改變

在NC-shRNA組中，Shh的誘導(dǎo)明顯增強(qiáng)了細(xì)胞的血管形成，而在FOXQ1-shRNA組中Shh促血管形成能力程度有所減弱,見(jiàn)圖6。

細(xì)胞存活率實(shí)驗(yàn)表明Shh的誘導(dǎo)明顯增強(qiáng)了NC-shRNA組細(xì)胞的存活率，且與FOXQ1-shRNA組無(wú)明顯差異，見(jiàn)圖7。

在NC-shRNA組的細(xì)胞中，Shh誘導(dǎo)上調(diào)了MMP2、VEGF-A和cyclin D1的表達(dá)；在FOXQ1-shRNA組的細(xì)胞中，Shh誘導(dǎo)也可導(dǎo)致上述變化，但MMP2和VEGF-A的誘導(dǎo)程度均較NC-shRNA組細(xì)胞低，cyclin D1的誘導(dǎo)程度無(wú)明顯差異，說(shuō)明FOXQ1基因沉默可以部分逆轉(zhuǎn)Shh所誘導(dǎo)的VEGF-A和MMP2的表達(dá)，見(jiàn)圖8。

討論

FOXQ1基因是叉頭框基因家族的重要成員之一[3]。近年來(lái)，其作為原癌基因的角色逐漸被人們認(rèn)識(shí)，與多種信號(hào)通路間的相互作用均與腫瘤密切相關(guān)[6-7]。國(guó)內(nèi)外的研究表明在大腸癌組織中FOXQ1基因表達(dá)明顯增高，并與腫瘤的分期及轉(zhuǎn)移相關(guān)，已證實(shí)在肺癌、乳腺癌、卵巢癌、結(jié)直腸癌等多種惡性腫瘤中，F(xiàn)OXQ1與腫瘤發(fā)生EMT關(guān)系密切，其異常表達(dá)可能導(dǎo)致E-cadherin的下調(diào)從而促進(jìn)發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，但其在結(jié)直腸癌的血管形成和生存率的作用及機(jī)制的研究，鮮有報(bào)道。

Figure 1.Silencing ofFOXQ1 expression in SW480 cells determined by real-time PCR and Western blot. Mean±SD.n=3.*P<0.05vsFOXQ1-sh3;##P<0.01vscontrol group.

圖1Real-time PCR和Western blot 檢測(cè)FOXQ1基因干擾的效率

Figure 2.The images of angiogenesisinvitroassay. The number of tube formation of human umbilical vein endothelial cells in various groups were counted by fluorescence microscopy (×100).

圖2體外血管形成實(shí)驗(yàn)

Figure 3.The proliferation ability of SW480 cells in different treatment groups. A: the effect ofFOXQ1 gene on the cell activity in each group was detected by MTT assay; B: after regular cultured for 7 d, the cell doubling time was calculated according to the formula; C: the images of the colony formation test in the 2 groups were showed. Mean±SD.n=3.

圖3FOXQ1基因沉默對(duì)SW480細(xì)胞的生長(zhǎng)能力、細(xì)胞倍增時(shí)間和平板克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果的比較

Kaneda等[6]的研究通過(guò)微陣分析，發(fā)現(xiàn)FOXQ1可通過(guò)上調(diào)WNT3A、RSPO2等基因從而調(diào)控結(jié)腸腫瘤的血管生成。我們的研究結(jié)果表明，F(xiàn)OXQ1可以通過(guò)對(duì)MMP2及VEGF-A的調(diào)控從調(diào)控的血管生成能力，這進(jìn)一步闡明了其具體機(jī)制；Kaneda等[6]的研究還發(fā)現(xiàn)，在體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中FOXQ1對(duì)增殖能力的影響呈相反表現(xiàn)，但在乳腺癌及胰腺癌等的研究中FOXQ1能促進(jìn)增殖能力[15]，我們的研究中FOXQ1對(duì)cyclin D1促增殖基因無(wú)調(diào)控作用，致其對(duì)生存率無(wú)影響支持其體外實(shí)驗(yàn)的結(jié)論，這會(huì)不會(huì)與缺氧等微環(huán)境因素相關(guān)或者干細(xì)胞特性獲取有關(guān)，值得進(jìn)一步研究。

Shh信號(hào)通路轉(zhuǎn)錄因子包括Gli1、Gli2和Gli3。Chatel等[16]報(bào)道在Shh通路在大腸癌SW480細(xì)胞株并沒(méi)有完整表達(dá)，主要是缺乏終末轉(zhuǎn)錄因子Gli1。然而大量的臨床研究及細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)都表明Shh的表達(dá)與大腸癌的關(guān)系密切[17]。仔細(xì)分析前人的研究，我們可以發(fā)現(xiàn)Gli2是Shh通路中除Gli1外的第二重要轉(zhuǎn)錄因子，基因組學(xué)研究表明它可以直接上調(diào)Gli1、CCND1、FOXA2、FOXC2、FOXP3等基因[17]，聯(lián)系我們的結(jié)果，課題組認(rèn)為正是Gli2調(diào)控FOXQ1的表達(dá)，而FOXQ1又可以發(fā)揮管理細(xì)胞惡性行為的作用，從而導(dǎo)致FOXQ1沉默可以部分逆轉(zhuǎn)Shh通路所誘導(dǎo)的促血管生成作用，而之所以FOXQ1基因?qū)hh所誘導(dǎo)增殖無(wú)明顯影響是因?yàn)镕OXQ1基因自身對(duì)Cyclin D1等促增殖基因無(wú)調(diào)控作用。

Figure 4.The expression of VEGF-A, MMP2 and cyclin D1 at mRNA and protein levels in the cells with or without silencing of FOXQ1 was detected by real-time PCR and Western blot. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vsNC-shRNA group.

圖4Real-time PCR和Western blot檢測(cè)VEGF-A、MMP2和cyclin D1的mRNA和蛋白表達(dá)水平

Figure 5.After induced by recombinant Shh proteins for 48 h, the FOXQ1 expression at mRNA and protein levels in the SW480 cells was determined by real-time PCR and Western blot. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsNc-shRNA group.

圖5利用含重組蛋白Shh培養(yǎng)基培養(yǎng)NC-shRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞48 h后檢測(cè)FOXQ1基因的表達(dá)情況

本研究的結(jié)果進(jìn)一步揭示了FOXQ1在大腸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的分子作用機(jī)理，這可能為尋找大腸癌生物治療新的作用靶點(diǎn)提供理論依據(jù)，為大腸癌的靶向治療提供新的思路。

Figure 6.FOXQ1 gene silencing partially reversed the angiogenic ability induced by Shh protein induction. Mean±SD.n=3.*P<0.05vsShh+NC-shRNA group.

圖6FOXQ1基因沉默可部分逆轉(zhuǎn)Shh所誘導(dǎo)SW480細(xì)胞的促血管生成能力

Figure 7.FOXQ1 gene silencing had no obvious difference on proliferation ability induced by Shh protein induction. Mean±SD.n=3.

圖7FOXQ1基因沉默對(duì)Shh所誘導(dǎo)SW480細(xì)胞增殖能力的影響

Figure 8.FOXQ1 gene silencing partially reversed the expressions of VEGF-A and MMP2 at mRNA and protein levels in the cells induced by Shh protein induction. Mean±SD.n=3.*P<0.05vsShh+NC-shRNA group.

圖8FOXQ1基因沉默對(duì)3組細(xì)胞VEGF-A、MMP2和cyclin D1表達(dá)情況的影響

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(責(zé)任編輯： 陳妙玲， 余小慧)

FOXQ1 gene mediate angiogenesis and proliferation induced by Shh in SW480 cells

ZHU Shuang-wei, LI Xiang-shu, PENG Xu-dong, CHEN Cheng, CHEN Xiao-long, WEI Zheng-qiang

(DepartmentofGeneralSurgery,TheFirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China.E-mail:384535713@qq.com)

[ABSTRACT]AIM: To explore the effect of FOXQ1 gene silencing on angiogenesis and proliferation ability of colon cancer cells induced by Sonic hedgehog (Shh). METHODS: Lentivirus expressing different FOXQ1-shRNA or negative cantrol (NC)-shRNA was used to infect the SW480 cells. The best silencing condition was screened and used in the following experiments. The SW480 cells were divided into interfered group (FOXQ1-shRNA) and control group (NC-shRNA). The MTT assay was used to observe the doubling time and cell activity. Tube formation assay was performed to detect the ability of angiogenesis. Meanwhile, the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF)-A, matrix metalloproteinase (MMP) 2 and cyclin D1 at mRNA and protein levels was determined by real-time PCR and Western blot. After induction of the cells by recombinant Shh proteins, the changes of angiogenesis and proliferation ability in each group were detected. At the same time, the transformation of related gene was examined. RESULTS: Compared with control group, the angiogenic ability in interfered group was decreased, and no obvious difference of proliferation ability was observed. The expression of VEGF-A and MMP2 was declined significantly, and the expression of cyclin D1 was not obviously changed. Recombinant Shh proteins improved the expression of FOXQ1 gene. Compared with NC-shRNA group, after induction, the angiogenic ability of FOXQ1-shRNA group was decreased, and the proliferation ability was not obviously changed. CONCLUSION: FOXQ1 gene mediates the angiogenic ability but does not affect the proliferation ability of SW480 cells. Meanwhile, it may be regulated by shh pathway.

[KEY WORDS]FOXQ1 gene; Sonic hedgehog; Colorectal cancer; Cell proliferation; Angiogenesis

doi:10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.03.014

[中圖分類(lèi)號(hào)]R730.23； R392-33； R735.3+4

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

通訊作者△Tel: 023-89011172; E-mail：384535713@qq.com

[收稿日期]2015- 08- 21[修回日期] 2015- 12- 24

[文章編號(hào)]1000- 4718(2016)03- 0470- 07

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