乳鐵蛋白基因rs1126478多態性與齲病易感性的Meta分析

周　政,劉高成,楊澤輝,李　琦,徐　江△

(1.石河子大學醫學院第一附屬醫院口腔科,新疆石河子 832000;2.新疆維吾爾自治區烏魯木齊口腔醫院修復科，新疆烏魯木齊 830002)

?

乳鐵蛋白基因rs1126478多態性與齲病易感性的Meta分析

周政1,劉高成2,楊澤輝2,李琦1,徐江1△

(1.石河子大學醫學院第一附屬醫院口腔科,新疆石河子 832000;2.新疆維吾爾自治區烏魯木齊口腔醫院修復科，新疆烏魯木齊 830002)

[摘要]目的系統評價乳鐵蛋白(LTF)基因rs1126478多態性與齲病易感性的關系。方法計算機檢索Pubmed,Web of science,Embase,EBSCO,Springerlink,中國知網(CNKI),維普(VIP),萬方及中國生物醫學文獻數據庫(CBM)，收集發表的有關LTF基因rs1126478多態性與齲病發病風險的文獻，以OR及其95%CI為效應指標，運用RevMan 5.2及Stata 12.0軟件進行統計學分析，并進行偏倚評估及敏感性分析。結果共納入5個病例對照研究，累積病例720例，對照412例，Meta分析結果顯示，4種模型中LTF基因rs1126478多態性與齲病發病風險相關性無統計學意義(GG+AG vs. AA：P=0.75，OR=0.93，95%CI=0.59～1.46；G vs. A：P=0.88，OR=0.97，95%CI=0.68～1.38；GG vs. AA：P=0.84，OR=1.07，95%CI =0.57～1.99；GG vs. AG+AA：P=0.52，OR=1.12，95%CI = 0.79～1.58)，按人種進行亞組分析結果顯示，在Caucasian及Asian人群中LTF基因rs1126478多態性與齲病發病風險相關性亦無統計學意義(P>0.05)。結論乳鐵蛋白基因rs1126478多態性可能與齲病易感性無關。

[關鍵詞]齲病；乳鐵蛋白；基因多態性；Meta分析

齲病是一種世界范圍內廣泛發生的常見口腔慢性疾病，已被世界衛生組織列為嚴重影響人類健康的第三大非傳染性疾病[1]。齲病發病機制復雜，目前學者普遍認為其是一種以細菌為主，并與宿主、食物及時間四聯因素相互作用而導致的一種感染性疾病[2]。近年來研究表明，除了已被證實的口腔菌群和飲食習慣外，宿主的基因遺傳因素在齲病的發生和進展中也發揮了重要作用，并與易感基因的多態性密切相關，其中乳鐵蛋白(lactotransferrin，LTF)基因多態性與齲病易感性的關系日益受到重視[3]。LTF是哺乳動物體內的一種多功能鐵結合糖蛋白，主要由嗜酸性中性粒細胞分泌，廣泛存在于各種生物體液中(如唾液、乳液、淚液等)，是人體內重要的非血紅素鐵結合蛋白，與齲病的發生發展密切相關[4-5]。研究發現，LTF具有抗感染及免疫調節的作用，可通過降低口腔內鐵濃度，抑制細菌間黏附和菌斑生物膜形成，從而抑制細菌生長并降低細菌毒力，防止齲病的發生[6-7]。目前國內外已有多篇文獻報道了LTF基因rs1126478多態性(A>G)與齲病發病風險的相關性，然而其研究結果并不一致[8-10]。為此，本研究采用Meta分析方法綜合評價相關研究，以期明確LTF基因rs1126478多態性與齲病發病風險的關聯。

1資料與方法

1.1文獻檢索系統全面檢索Pubmed,Web of science,Embase,EBSCO,Springerlink,中國知網(CNKI),維普(VIP),萬方及中國生物醫學文獻數據庫(CBM)，收集發表的有關LTF基因rs1126478多態性與齲病發病風險的文獻，包括學位論文。中文檢索策略：(齲病)AND(乳鐵蛋白OR LF OR LFT)AND(多態性OR SNP OR基因多態性)；英文檢索策略：(caries) AND (Lactotransferrin OR Lactoferrin OR LFT OR LF) AND (polymorphism OR SNP OR variant)。文種限中、英文，同時追溯納入文獻的參考文獻，保證文獻檢索盡可能全面，無發表年限限制。

表1　納入研究的基本特征

1.2納入文獻的篩選(1)在初次檢索的文獻中，根據題目和摘要初步篩除明顯不符合的文獻；(2)下載全文后，閱讀全文，進一步確定文獻是否合格；(3)在閱讀文獻過程中，根據納入文獻的參考文獻進一步補充合格的文獻。

1.3納入和排除標準

1.3.1納入標準(1)涉及LTF基因rs1126478多態性與齲病發病風險的相關報道；(2)所有研究均為病例對照研究或巢式病例對照研究；(3)各研究的設計和實驗方法類似；(4)所有病例均由高年資口腔專業醫師按WHO標準進行全口齲病檢查并診斷；(5)文獻數據完整或根據報道結果能推算出分析所需數據；(6)對于重復發表的研究，選擇質量最高者或樣本量最大且信息最詳細者。

1.3.2排除標準(1)研究未設立對照組；(2)重復報道的研究，質量較差、信息少及數據無法利用的文獻；(3)綜述、病例報道、摘要、評論性文章等；(4)用中、英文以外語種發表的文獻。

1.4文獻質量評價及資料的提取對每項研究從以下3個方面進行質量評估[11]：(1)研究對象的納入標準及其基本構成是否明確；(2)基線資料可比性及設計科學性依據是否充分；(3)處理因素、方法是否正確。以上3項，每項記0～3分。總分大于或等于5分者，認為質量可靠；總分大于或等于7分者，認為高質量。由2名評價者按照統一標準獨立進行質量評估，而后交叉核對，如遇分歧則討論解決或由第3位研究者協助解決。資料提取內容包括：第一作者、發表時間、地區、人種、基因型檢測方法、樣本量、病例組和對照組各基因型數量等。

1.5統計學處理合并分析采用RevMan 5.2軟件進行。合并效應量選用比值比(OR)及95%CI。采用Q檢驗對納入研究進行異質性檢驗，若各研究間無明顯異質性(P>0.1)采用固定效應模型進行合并，反之(P<0.1)采用隨機效應模型進行合并分析,用I2衡量異質性大小程度[12-13]。應用Stata 12.0軟件進行Begg′s及Egger′s test檢驗以評價發表偏倚。可根據重要的混雜因素(如人種)進行亞組分析，采用逐一排除的方法進行敏感性分析，檢驗水準為α=0.05，整合以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1文獻檢索結果根據檢索策略，初檢出相關文獻24篇。根據納入標準及排除標準逐層篩選后，最終納入文獻4篇，均為病例對照研究[8-10,14]，包括英文文獻3篇，中文文獻1篇，其中余占海等[14]研究中包含兩個針對不同民族的獨立研究，視為兩項病例對照研究。故本次Meta分析一共納入5項病例對照研究，其中3項研究對象為Caucsain人種，2項研究對象為Asian，累積病例720例，對照412例。對所有對照組進行HWE(Hardy-Weinberg equilibrium)檢驗，結果顯示納入研究的對照組均遵循HWE定律。納入分析的各研究特征和基因型分布見表1。

2.2Meta分析結果如圖1和表2所示，異質性檢驗結果顯示，在顯性模型(GG+AG vs. AA)中各研究間存在統計學異質性(Ph=0.09，I2=50%),故采用隨機效應模型進行合并分析，Meta分析結果顯示LTF基因rs1126478多態性與齲病發病風險無明顯相關性(P=0.75，OR=0.93，95%CI=0.59～1.46)，同樣的，在其他3種模型中各研究間均存在顯著異質性，采用隨機效應模型進行合并分析，Meta分析結果顯示在等位基因G vs. A模型、GG vs. AA模型及隱性模型GG vs. AG+AA中均未發現LTF基因rs1126478多態性與齲病發病風險存在顯著相關性(G vs. A：P=0.88，OR=0.97，95%CI=0.68～1.38；GG vs. AA：P=0.84，OR=1.07，95%CI =0.57～1.99；GG vs. AG+AA：P=0.52，OR=1.12，95%CI=0.79～1.58)。按人種進行亞組分析，結果顯示，在Caucsain及Asian人種中均未發現LTF基因rs1126478多態性與齲病易感性具有顯著相關性(P>0.05)，具體結果見表2。

表2　LTF基因rs1126478多態性與齲病易感性Meta分析結果

Ph：異質性檢驗P值；R：隨機效應模型；F：固定效應模型。

2.3發表偏倚分析LTF基因rs1126478多態性與齲病易感性Meta分析發表偏倚結果見圖2。以顯性模型GG+AG vs. AA為例，利用Begg′s test 繪制漏斗圖，結果顯示納入的5項研究完整地出現在圖上，且以合并效應量OR值為中心散開分布，基本對稱，呈倒置漏斗型。進一步采用Egger′s test進行檢驗，結果顯示P=0.718，表明納入合并分析的研究無明確的發表偏倚。

2.4敏感性分析采用逐一剔除的方法進行敏感性分析。在GG+AG vs. AA、G vs. A、GG vs. AA及GG vs. AG+AA 4種模型中分別進行逐一剔除分析，剔除任一項研究后，結果發現4種模型中Meta分析總效應量在剔除前后均未發生明顯改變。

圖1　LTF基因rs1126478多態性與齲病易感性的關系(GG+AG vs. AA)

圖2　發表偏倚分析漏斗圖(GG+AG vs. AA)

3討論

齲病的發生與環境及基因的交互作用有著密切聯系，而唾液是齲病發生最重要的外環境[15]。在齲病的發生過程中，唾液具有沖洗、緩沖促進再礦化等作用[16]。唾液中含有種類豐富的抗菌蛋白，Silva等研究發現唾液中的抗菌蛋白可有效抑制口腔細菌的聚集、黏附，并抑制其代謝和營養，從而抑制細菌生長。乳鐵蛋白是人體內重要的鐵結合陽離子蛋白，可通過多種途徑影響齲病的發生、發展過程，對唾液乳鐵蛋白與齲病關系的研究顯示，唾液乳鐵蛋白濃度與個體患齲風險成顯著負相關[17]。

LTF基因定位于人3p21，包含17個外顯子，約由700個氨基酸殘基構成，大小約23～25 kb[18]，其基因編碼區序列改變可能造成蛋白結構異常，從而影響其功能。rs1126478位點位于LTF基因2號外顯子區，其多態性可導致第29位賴氨酸轉換為精氨酸，由此可能導致其功能發生改變[10]。Velliyagounder等研究發現喪失賴氨酸殘基的乳鐵蛋白變異體其抗變異鏈球菌活性明顯降低。目前國內外有關乳鐵蛋白基因rs1126478多態性與齲病易感性的關系已有較多研究，然而其研究結果并不一致。Fine等[8]研究發現基因型為AA的個體罹患齲病的風險明顯降低，且其抗變異鏈球菌感染能力明顯較GG基因型個體強。Azevedo等[10]研究也發現，rs1126478多態性與巴西人群齲病易感性有關，攜帶等位基因A的個體DMFT指數明顯減低，提示等位基因A可能是齲病發病的保護因素。然而Volckova等[9]及余占海等[14]研究結果顯示LTF基因rs1126478多態性與捷克及中國人群齲病易感性無明顯關聯。

本研究應用Meta分析方法分析了LTF基因rs1126478多態性與齲病易感性的關系，以基因型GG或等位基因G為暴露因素，結果顯示二者之間無明顯相關性。由于基因多態性與種族及地域關系關系密切，因此筆者根據人種進行了亞組分析，同樣的，結果顯示在Caucasian及Asian人群中均未發現LFT基因rs1126478多態性與齲病發病風險存在顯著關聯，以上結果均提示rs1126478多態性可能與齲病發病風險無關。本次Meta分析結果與之前的單項研究結果的不一致可能是由于樣本差異造成的，單項研究的樣本量往往較小且可能存在地域差異，使其可信度受限，本次Meta分析對多項獨立研究進行了合并分析，累積病例720例，對照412例，一定程度上克服了單個研究樣本量小、地域局限的不足，使研究結果更為可靠。本次Meta分析利用漏斗圖和Egger′s檢驗對發表偏倚進行了定性和定量評價，結果未發現明確的發表偏倚，敏感性分析亦未發現總效應量發生明顯改變，以上均提示研究結果比較可靠。

本研究雖然系統科學地設計了研究方案，但仍存在一定的局限性：(1)本組研究納入的對照組由于原始研究設計的差異存在一定的不一致性，可能影響結果的可靠性；(2)本研究納入文獻限定在中、英文報告文獻，統計學分析雖然未發現明顯的發表偏倚，仍不能排除發表偏倚存在的可能；(3)齲病是一種多基因、多因素共同參與的慢性疾病，由于原始數據的缺乏，未能分析年齡、飲食習慣及其他基因的相互作用，在未來的研究中應加以考慮。

綜上所述，LTF基因rs1126478多態性可能與齲病易感性無關。然而由于納入研究的數量有限，今后期待開展更多的大樣本、高質量、同質性好、包含不同種族的病例對照研究，更科學準確地評價rs1126478多態性與齲病易感性的關系，為基礎研究及臨床防治提供更可信的證據。

參考文獻

[1]Motta LJ,Bortoletto CC,Marques AJ,et al.Association between respiratory problems and dental caries in children with bruxism[J].Indian J Dent Res,2014,25(1):9-13.

[2]Reich E,Lussi A,Newbrun E.Caries-risk assessment[J].Int Dent J,1999,49(1):15-26.

[3]胡曉潘，余占海，李志強，等．齲病易感基因的研究進展[J]．口腔醫學研究，2013，29(2)：188-190．

[4]劉學敏，金明光，張莉，等．乳鐵蛋白在口腔醫學研究中的應用進展[J]．口腔醫學研究，2013，29(4)：386-388．

[5]Sargent PJ,Farnaud S,Evans RW.Structure/function overview of proteins involved in iron storage and transport[J].Curr Med Chem,2005,12(23):2683-2693.

[6]Caraher EM,Gumulapurapu K,Taggart CC,et al.The effect of recombinant human lactoferrin on growth and the antibiotic susceptibility of the cystic fibrosis pathogen Burkholderia cepacia complex when cultured planktonically or as biofilms[J].J Antimicrob Chemother,2007,60(3):546-554.

[7]Ochoa TJ,Clearly TG.Lactoferrin disruption of bacterial type Ⅲ secretion systems[J].Biometals,2004,17(3):257-260.

[8]Fine DH,Toruner GA,Velliyagounder KA,et al.A lactotransferrin single nucleotide polymorphism demonstrates biological activity that can reduce susceptibility to caries[J].Infect Immun,2013,81(5):1596-1605.

[9]Volckova M,Linhartova PB,Trefna T,et al.Lack of association between lactotransferrin polymorphism and dental caries[J].Caries Res,2014,48(1):39-44.

[10]Azevedo LF,Pecharki GD,Brancher JA,et al.Analysis of the association between lactotransferrin (LTF) gene polymorphism and dental caries[J].J Appl Oral Sci,2010,18(2):166-170.

[11]Stang A.Critical evaluation of the Newcastle-Ottawa scale for the assessment of the quality of nonrandomized studies in meta-analyses[J].Eur J Epidemiol,2010,25(9):603-605.

[12]Higgins JP,Thompson SG.Quantifying heterogeneity in a meta-analysis[J].Stat Med,2002,21(11):1539-1558.

[13]Higgins JP,Thompson SG,Deeks JJ,et al.Measuring inconsistency in meta-analyses[J].BMJ,2003,327(7414):557-560.

[14]余占海，蘇琳涵，張軒，等．乳鐵蛋白基因多態性與甘肅漢族及裕固族人群齲病易感性的初步研究[J]．牙體牙髓牙周病學雜志，2013，23(10)：644-647,639．

[15]陳亞剛，胡德渝．唾液檢測用于齲病風險性評估的研究進展[J/CD]．中華口腔醫學研究雜志:電子版，2008，2(1)：75-78．

[16]王國珍，羅云綱，魏洪濤．兒童齲病的研究進展[J]．中國實驗診斷學，2013，17(8)：1545-1548．

Meta-analysis on association between lactotransferrin gene rs1126478 polymorphism and caries susceptibility

Zhou Zheng1,Liu Gaocheng2,Yang Zehui2,Li Qi1,Xu Jiang1△

(1.Department of Stomatology,First Affiliated Hospital,School of Medicine,Shihezi University,Shihezi, Xinjiang 832000,China;2.Department of Prosthodontics,Urumqi Stomatological Hospital,Urumqi,Xinjiang 830002,China)

[Abstract]ObjectiveTo systematically evaluate the association between lactotransferrin(LTF) gene rs1126478 polymorphism and caries susceptibility.MethodsThe published literatures on the association between LTF gene rs1126478 polymorphism and caries susceptibility were retrived from the electronic databases of Pubmed,Web of science,Embase,EBSCO,Springerlink,CNKI,VIP,Wanfang and CBM by computer.The pooled odds ratios (ORs) and its 95% confidence intervals (95%CIs) were used as the effect indicators.The statistical analysis was performed by using the RevMan 5.2 and Stata 12.0 softwares.The bias evaluation and sensitivity analysis were also performed.ResultsA total of 5 case-control studies involving 720 cases and 412 controls were included.The meta analysis results showed that no statistical significance in the association between LTF gene rs1126478 polymorphism and caries susceptibility was revealed in all four genetic models (GG+AG vs. AA：P=0.75，OR=0.93，95%CI=0.59-1.46；G vs. A：P=0.88，OR=0.97，95%CI=0.68-1.38；GG vs. AA：P=0.84，OR=1.07，95%CI =0.57-1.99；GG vs. AG+AA：P=0.52，OR=1.12，95%CI = 0.79-1.58).Similarly,the subgroup analysis by ethnicity showed no statistical significance in the onset risk between Caucasian and Asian populations as well (both P>0.05).ConclusionThe LTF gene rs1126478 polymorphism may have no relation with the susceptibility to caries.

[Key words]caries;lactotransferrin;polymorphism;Meta-analysis

doi:·循證醫學·10.3969/j.issn.1671-8348.2016.09.025

作者簡介：周政(1977-)，碩士，副主任醫師，主要從事齲病及牙體缺損方面的研究。△通訊作者，E-mail:xujiangshz@126.com。

[中圖分類號]R781.1

[文獻標識碼]A

[文章編號]1671-8348(2016)09-1236-04

(收稿日期：2015-09-08修回日期：2015-12-18)