結核感染T細胞斑點試驗在結核病診斷中的應用價值

羅榮華

摘要：目的 通過對比探討結核感染T細胞斑點試驗在結核病的診斷篩查中是否具有更高的臨床應用價值。方法 隨機選取我院2015年7月～2016年8月的可能為結核患者120例，分別進行T-SPOT.TB檢測和TST檢測，使用統(tǒng)計學軟件SPSS10.0統(tǒng)計分析T-SPOT.TB檢測及TST檢測的靈敏度和特異性等相關指標。結論 根據(jù)實驗結果T-SPOT.TB檢測的靈敏度為83.3%、特異度為88.8%、假陰性率為16.7%、假陽性率為13.3%；TST檢測的靈敏度為70.0%、特異度為70.0%、假陰性率為30.0%、假陽性率為30.0%。T-SPOT.TB檢測的靈敏度、特異度明顯高于TST檢測，而假陰性率、假陽性率明顯低于TST檢測。

說明T-SPOT.TB檢測具有相對較高的靈敏度和特異性，比TST更加準確，更適合臨床上結核病的篩查診斷。

關鍵詞：結核感染T細胞斑點試驗；結核病診斷；應用價值

結核病是由于結核分枝桿菌導致的一種常見的慢性傳染病，常見于肺部[1]。WHO統(tǒng)計在2011年全球新發(fā)結核病患者達870萬人，其中140萬因結核病致死。目前臨床上對于結核病的篩查常使用結核菌素實驗（TST），該方法假陽性率比較高，容易造成誤診。而WHO在2004年的報告中指明結核病診斷率只有37%[2]。有研究認為結核感染T細胞斑點試驗靈敏度和特異性較高，因此本文擬探討結核感染T細胞斑點試驗在結核病診斷中的應用價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 隨機選取我院2015年7月～2016年8月的可能為結核患者120例，其中男73例，女47例，年齡29～53歲。收集患者的家族病史、過往疾病史等相關資料。本次實驗均已將全部實情告訴患者。

1.2方法

1.2.1 T-SPOT.TB檢測方法 根據(jù)上海復星長征醫(yī)學科學有限公司的T-SPOT.TB試劑盒的說明書上的步驟進行。首先采集5 ml的外周靜脈血，注意用肝素鋰抗凝，分離出單個核細胞（PBMC）。準備好已經(jīng)包被IFN-γ抗體的微量板，在4個孔中分別滴加植物血凝素、陰性對照培養(yǎng)液、結核特異性抗原早期分泌靶向抗原（ESAT-6）、濾液培養(yǎng)蛋白10（CFP-10）。然后每個孔中分別滴加濃度為2×105的PMBC。放入培養(yǎng)箱中孵育24 h，溫度設置為37 ℃，然后采用PBS溶液洗脫抗原致敏效應T淋巴細胞，并加入堿性磷酸酶標記抗體，最后通過酶聯(lián)顯色使得細胞因子分泌的地方產(chǎn)生斑點，記錄斑點數(shù)。當測量孔點數(shù)為陰性對照的兩倍以上則認為是陽性[3]。

1.2.2 TST實驗方法 用還有5單位結核菌素的PPD 0.1 ml對患者進行前臂尺側(cè)皮內(nèi)實驗，3 d后觀察實驗結果，如果過硬結直徑大于10 mm則為陽性[3]。

1.3統(tǒng)計學方法 采用統(tǒng)計學軟件SPSS10.0對靈敏性、假陽性率等指標進行統(tǒng)計分析。

2 結果

2.1 T-SPOT.TB檢測與臨床診斷結果比較 臨床診斷結果為：在可能為結核的120例患者中，確診為結核病的有90例，T-SPOT.TB檢測陽性結果為75例。將T-SPOT.TB檢測與臨床診斷結果進行對比，見表1。

根據(jù)表1我們可以看出，臨床診斷中確診為結核病的90例患者，T-SPOT.TB檢測陽性75例（83.3%）、陰性15例（16.7%）；臨床診斷中非結核病患者30例，T-SPOT.TB檢測陽性4例（13.3%）、陰性26例（86.7%）。所以T-SPOT.TB檢測的靈敏度為83.3%、特異度為88.8%、假陰性率為16.7%、假陽性率為13.3%。

2.2 TST檢測與臨床診斷結果比較 TST檢測陽性結果為60例。將TST檢測與臨床診斷結果進行對比，見表2。

根據(jù)表2我們可以看出，臨床診斷中確診為結核病的90例患者，TST檢測陽性63例（70.0%）、陰性27例（30.0%）；臨床診斷中非結核病患者30例，TST檢測陽性9例（30.0%）、陰性21例（70.0%）。所以TST檢測的靈敏度為70.0%、特異度為70.0%、假陰性率為30.0%、假陽性率為30.0%。

3 結論

根據(jù)實驗結果T-SPOT.TB檢測的靈敏度為83.3%、特異度為88.8%、假陰性率為16.7%、假陽性率為13.3%；TST檢測的靈敏度為70.0%、特異度為70.0%、假陰性率為30.0%、假陽性率為30.0%。T-SPOT.TB檢測的靈敏度、特異度明顯高于TST檢測，而假陰性率、假陽性率明顯低于TST檢測。說明T-SPOT.TB檢測具有相對較高的靈敏度和特異性，比TST更加準確，更適合臨床上結核病的篩查診斷。

T-SPOT.TB檢測的原理是：結核病患者的PBMC中會含有特異性T細胞，當T淋巴細胞受到結核分枝桿菌抗原刺激后分泌出IFN-y。所以在包被有干擾素抗體的微孔板放入患者的PBMC與 ESAT-6、CFP-10、進行培養(yǎng)孵育。如果患者的PBMC中存在特異性T細胞時，那么培養(yǎng)液中的ESAT-6、CFP一10會刺激它分泌IFN-y，而IFN-y會被微孔板上的抗IFNC所捕捉，并與加入的堿性磷酸酶標記抗體結合，最終通過顯色反應形成斑點。其中1個斑點代表著1個結核分枝桿菌致敏的T淋巴細胞，最后根據(jù)斑點總數(shù)來判斷患者是否感染上結核分枝桿菌[4]。

TST檢測是目前臨床應用非常廣泛的一種方法，它操作簡便快捷，但是它會受到機體自身免疫狀態(tài)影響，有研究認為在我國卡介苗接種率較高，會導致TST假陽性率較大。而T-SPOT.TB檢測不會受到機體自身免疫狀態(tài)影響，因此我們建議臨床應該進一步推廣使用T-SPOT.TB檢測來進行結核病的篩查診斷[5]。

另外需要說明的是，T-SPOT.TB檢測并非十全十美，它的價格相對較貴，對于結核病患者的病情是否為活動性、潛伏性等情況目前T-SPOT.TB檢測并不能進行有效檢測[6]。

參考文獻：

[1]張敦熔.現(xiàn)代結核病學[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2000.

[2]王立紅，付秀華，張桂芝，等.結核感染T細胞斑點試驗在結核病診斷中的應用價值[J].中國防癆雜志，2013，35（12）：992-996.

[3]陶臻，曾娟.結核感染T細胞斑點試驗在結核病診斷中的應用價值[J].臨床肺科雜志，2012，17（9）：1632-1633.

[4]努爾阿米娜·鐵力瓦爾迪，黎靜.結核感染T細胞斑點試驗在結核病診斷中的應用價值[J].新疆醫(yī)學，2013，43（8）：36-38.

[5]高茜，杜黎明.T淋巴細胞斑點試驗在結核病診斷中的臨床應用[J]. 臨床肺科雜志，2012，17（12）：2205-2207.

[6]王立紅，付秀華，張桂芝，等.結核感染T細胞斑點試驗在結核病診斷中的應用價值[J].中國防癆雜志，2013，35（12）：1632-1633.