傣藥黑螞蟻揮發(fā)油和脂溶性成分研究

羅建蓉 劉姍 尚文宏

【摘要】目的：研究傣藥黑螞蟻（學(xué)名雙齒多刺蟻）揮發(fā)油和脂溶性成分，為科學(xué)利用黑螞蟻資源提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：采用回流提取并用石油醚萃取得脂溶性成分，水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油;運(yùn)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析其化學(xué)成分。結(jié)果：從黑螞蟻脂溶性成分中鑒定39個(gè)成分，其中油酸（25.1%）和6-十八碳烯酸（17.93%）相對(duì)含量居高;從揮發(fā)油中鑒定41個(gè)化合物，以油酸（6.15%）和二十五烷（5.85%）較多。結(jié)論：油酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、膽甾醇和3，5-膽甾二烯為黑螞蟻油脂的特征性成分;黑螞蟻的脂溶性成分以脂肪酸類為主，而揮發(fā)油則以烴類物質(zhì)為主。

【關(guān)鍵詞】傣藥;雙齒多刺蟻;脂溶性成分;揮發(fā)油;氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

【中圖分類號(hào)】R284.1【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號(hào)】1007-8517（2019）1-0050-04

Abstract：ObjectiveToanalyzechemicalingredientsoffat-solublecompositionandvolatileoilfromDaimedicineofHeiMaYi（scientificname：Polyrhachisdives），inordertoprovideexperimentalbasisforreasonableutilizationofanimalmedicineofPolyrhachisdives.MethodEthanolrefluxextractionmethodwasusedtoextractmedicinalmaterialsofPolyrhachisdives，andpetroleumetherwasusedtoextractfat-solublecomponents.ThevolatileoilofPolyrhachisdiveswasextractedbysteamdistillation.ItsoilcomponentswereanalyzedbyGC-MStechnique.ResultThirty-ninecompoundswereidentifiedintheoilofPolyrhachisdives.Thecompoundswithhighercontentlevelincludedoleicacid（25.1%）and6-octadecenoicacid（17.93%）.Forty-onecompoundswereidentifiedinthevolatileoil.Thecompoundswithhighercontentlevelincludedoleicacid（6.15%）andpentacosane（5.85%）.Conclusionoleicacid，palmiticacid，palmitoleicacid，stearicacid，cholesterolandcholesta-3，5-dienewerecharacteristicconstituentsintheoilofPolyrhachisdives.FattyacidswerethemaincompoundsintheoilsofPolyrhachisdives，andhydrocarboncompoundswerethemaincompoundsinthevolatileoils.

Keywords：DaiMedicine;Polyrhachisdives;Fat-solubleComposition;VolatileOil;GC-MS

傣藥黑螞蟻屬昆蟲(chóng)綱膜翅目蟻科昆蟲(chóng)雙齒多刺蟻（PolyrhachisdivesSmith），又稱擬黑多刺蟻、鼎突多刺蟻，主要產(chǎn)自云南、廣西、廣東等省，在我國(guó)為食藥兩用昆蟲(chóng)?！侗静菥V目》記載螞蟻為“玄駒”，并有“獨(dú)腳蟻治療腫疽毒，搗涂之”。傣藥稱之為“摸郎”，有扶正固本、補(bǔ)腎壯陽(yáng)、祛瘀通絡(luò)之功效[1]。因富含氨基酸，鋅、鈣、鎂、鐵、錳等多種微量元素，D、B2、B12、C、E等多種維生素，及大量的糖類物質(zhì)和高能物質(zhì)三磷酸腺苷，民間常將黑蟻制成蟻粉或蟻酒服用，以健身防病[2-3]。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)黑蟻的醇提物有抗風(fēng)濕、抗炎、抗抑郁、增強(qiáng)性功能、調(diào)節(jié)人體免疫功能、調(diào)節(jié)血糖和血脂、抗衰老和護(hù)肝等藥理作用[3-5]。臨床上以黑蟻為主藥，治療風(fēng)濕、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、糖尿病、肝炎、失眠、陽(yáng)痿等疾病[2-3]。筆者在前人研究基礎(chǔ)上，采用GC-MS法研究分析黑蟻的物質(zhì)基礎(chǔ)，探討黑蟻脂溶性成分及揮發(fā)油的成分和組成，為科學(xué)合理利用傣藥黑蟻提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料

黑螞蟻購(gòu)自大理金貝藥材市場(chǎng)，經(jīng)大理大學(xué)楊自忠教授鑒定為昆蟲(chóng)綱膜翅目蟻科雙齒多刺蟻（PolyrhachisdivesSmith）。HP7890A/5975C型GC-MS聯(lián)用儀（Agilent公司）。試劑均為國(guó)產(chǎn)AR。

2方法與結(jié)果

2.1揮發(fā)油的制備稱取100g黑螞蟻粉末（過(guò)2號(hào)篩）于圓底燒瓶中，加蒸餾水500mL，參照《中國(guó)藥典》（2015年版/四部）“通則2204”揮發(fā)油測(cè)定法甲法提取[6]，至揮發(fā)油體積不再增加，冷卻分層后分離揮發(fā)油，并用無(wú)水Na2SO4干燥[7]，得淺黃色油狀物，冷藏備用。

2.2脂溶性成分的制備稱取黑螞蟻粉末20g，用95%乙醇索式提取1h，將提取液減壓濃縮至小體積，用石油醚萃取3次，萃取液濃縮干，得淺黃色油狀提取物，冷藏備用。

2.3脂溶性成分GC-MS分析條件氣相色譜條件：HP-5MS石英毛細(xì)管柱（30m×250μm×0.25μm），高純氦為載氣，1mL/min恒流，分流比10∶1，進(jìn)樣量1μL，進(jìn)樣口溫度250℃;柱升溫程序?yàn)槠鹗?0℃，按10℃/min升溫至190℃，再以5℃·min-1升溫至290℃，保留6min。質(zhì)譜條件：EI離子源，離子源溫度230℃，電子能量70eV，溶劑延遲3min，質(zhì)量掃描范圍m/z12～550。

2.4揮發(fā)油GC-MS分析條件氣相色譜條件：同2.3項(xiàng)下;柱升溫程序?yàn)槠鹗?20℃，按10℃/min升溫至200℃，再以5℃/min升溫至220℃，保留5min，后以2.5℃/min升溫至290℃，保留10min。質(zhì)譜條件：同2.3項(xiàng)下。

2.5黑螞蟻脂溶性成分和揮發(fā)油分析結(jié)果黑螞蟻脂溶性成分和揮發(fā)油分別按上述檢測(cè)條件進(jìn)行GC-MS分析，得總離子流圖，如圖1所示。經(jīng)NIST11.L質(zhì)譜庫(kù)檢索，取相似度90%以上成分，采用面積歸一化法計(jì)算相對(duì)含量。從黑螞蟻脂溶性成分中分離出51個(gè)色譜峰，檢測(cè)鑒定出39個(gè)化合物，相對(duì)含量占總量85.16%，結(jié)果見(jiàn)表1;從揮發(fā)油中分離出59個(gè)色譜峰，并鑒定出41個(gè)化合物，占總量61.11%。結(jié)果見(jiàn)表2。

3討論

研究從黑螞蟻脂溶性成分中鑒定39個(gè)化合物，相對(duì)含量占總量85.16%，主要成分類型有脂肪酸，烷烴，甾類和脂肪醇。不飽和脂肪酸含量最高，占47.03%，僅油酸和6-十八碳烯酸各占25.1%，17.93%;烷烴檢出數(shù)目最多，有12個(gè)，占15.42%，其中二十七烷（2.51%），9-甲基十九烷（3.67%），三十一烷（3.44%）含量較高;另外檢出膽固醇（3.72%），膽甾-3，5-二烯（0.15%），膽甾-4-烯-3-酮（0.26%）和β-谷甾醇（0.36%）4個(gè)甾類成分;還檢出少量鹵代烴1-氯二十烷（0.86%）和1-氯二十七烷（1.61%）。從揮發(fā)油中鑒定41個(gè)成分，相對(duì)含量占總量61.11%，主要成分類型為烷烴，烯烴，脂肪醇和鹵代烴。共檢出烷烴19個(gè)，其數(shù)目和含量均最高，占38.3%，其中十七烷（3.67%），二十五烷（5.85%），二十六烷（5.05%），二十三烷（3.8%），二十八烷（3.03%）二十四烷（4.93%），二十九烷（2.62%）含量較高;檢出10個(gè)烯烴，占4.35%;另外檢出油酸（6.15%），2個(gè)鹵代烴成分1-碘代十八烷（4.93%）和1-氯二十七烷（1.73%）。本研究首次從黑蟻中發(fā)現(xiàn)膽甾-4-烯-3-酮、1-氯二十烷、1-氯二十七烷、1-碘代十八烷及多個(gè)烴類成分。

脂溶性成分和揮發(fā)油中檢出18個(gè)共有成分，主要為烷烴，脂肪醇，脂肪酸及其酯，其中烷烴數(shù)目較多有10個(gè)，但含量差異大;均檢出棕櫚酸甲酯、棕櫚酸和油酸，以棕櫚酸和油酸在脂溶性成分中含量較高;均檢出1-氯二十七烷，其含量相當(dāng)。黑蟻的脂溶性成分以脂肪酸類為主，并發(fā)現(xiàn)4個(gè)甾體類成分;而揮發(fā)油則以烴類物質(zhì)為主。油酸（OA）和棕櫚酸（PA）是最常見(jiàn)的膳食脂肪酸。OA刺激肝癌HepG2細(xì)胞可引起自噬并促進(jìn)凋亡[8];PA則刺激引起自噬抗凋亡，提示這兩種膳食脂肪酸引起的自噬所發(fā)揮的生物學(xué)作用可能不同[9]。烴類化學(xué)成分是昆蟲(chóng)信息素的活性成分，對(duì)昆蟲(chóng)的行為活動(dòng)起作用[10-11]。

多位學(xué)者對(duì)黑蟻化學(xué)成分進(jìn)行了研究報(bào)道。沈立榮等[12]采用超臨界CO2萃取蟻油經(jīng)GC-MS分析出24個(gè)化合物，包含脂肪酸、烴類、甾體、硫醇等類型，主要成分為9-十八碳烯酸、油酸、亞油酸及其酯、膽甾醇和3，5-膽甾二烯等物質(zhì);韋桂寧等[13]從黑蟻石油醚部位甲酯化產(chǎn)物中鑒定出13個(gè)脂肪酸，其中棕櫚酸和油酸含量較高;鄭巍等[14]用系統(tǒng)分離方法從黑蟻氯仿部位分離到7個(gè)化合物;王婧等[15]發(fā)現(xiàn)黑蟻的水提液風(fēng)味物質(zhì)主要為胺類、雜環(huán)、醇、醛、酮等大極性物質(zhì)。本研究的黑蟻脂溶性成分與文獻(xiàn)[12]均檢出油酸、棕櫚酸、9-甲基十九烷、二十二碳烯、膽甾醇和3，5-膽甾二烯;與文獻(xiàn)[13]有6個(gè)相同成分，為月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸和油酸，其含量均為油酸較高;與文獻(xiàn)[14]有棕櫚酸、硬脂酸、油酸和β-谷甾醇4個(gè)共有成分?？梢?jiàn)油酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、膽甾醇和3，5-膽甾二烯等為黑蟻藥材中穩(wěn)定存在的特征性成分。

參考文獻(xiàn)

[1]云南省食品藥品監(jiān)督管理局.云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)（第一冊(cè)）[S].昆明：云南科學(xué)技術(shù)出版社，2005：50-51.

[2]王玉玲，王艷萍.擬黑多刺螞蟻的食用價(jià)值及保健功能[J].農(nóng)產(chǎn)品加工（學(xué)刊），2010（10）：77-79.

[3]趙大成，秦雪梅，申國(guó)華，等.薄層掃描法測(cè)定螞蟻藥材及其風(fēng)濕克酒中亮氨酸的含量[J].中國(guó)藥房，2004，15（2）：111-112.

[4]賀勝英，常征，鄭有鶴.我國(guó)鼎突多刺蟻的研究進(jìn)展[J].廊坊師范學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2012，12（1）：54-57.

[5]韋桂寧，楚世峰，蘇華，等.擬黑多刺蟻醇提物抗抑郁作用研究[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2015，31（9）：1280-1286.

[6]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（四部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：203-204.

[7]孫迎娜，班書(shū)賢，王瑞明，等.青翹與老翹揮發(fā)油化學(xué)成分的比較研究[J].中國(guó)藥房，2016，27（15）：2087-2090.

[8]劉凱，徐樹(shù)瑩，徐斌，等.晚期自噬在非酒精性脂肪肝中的促凋亡作用[J].北京醫(yī)學(xué)，2011，33（12）：950-952.

[9]劉芳，劉凱，劉道潔，等.棕櫚酸對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞自噬和凋亡的影響[J].山東醫(yī)藥，2014，54（12）：8-9.

[10]鐘偉，殷幼平.蜚蠊聚集信息素的研究進(jìn)展[J].中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志，2002，13（5）：392-393.

[11]呂燕青，何余容，陳科偉.擬澳洲赤眼蜂對(duì)小菜蛾腹部鱗片和卵表十三種飽和烷烴的接觸反應(yīng)[J].植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2010，37（6）：535-540.

[12]沈立榮，任玉翠，馮鳳琴，等.超臨界CO2萃取鼎突多刺蟻蟻油的正交試驗(yàn)和GC-MS分析[J].中國(guó)中藥雜志，2005，30（1）：33-36.

[13]韋桂寧，蘇啟表，曾憲彪，等.擬黑多刺蟻乙醇提取物石油醚部位抗痛風(fēng)作用及物質(zhì)基礎(chǔ)研究[J].中藥藥理與臨床，2013，29（1）：99-103.

[14]鄭巍，郭良君，譚興起.擬黑多刺蟻化學(xué)成分的研究[J].中南藥學(xué)，2012，10（3）：178-180.

[15]王婧，劉通訊.擬黑多刺蟻的理化分析[J].現(xiàn)代食品科技，2010，26（10）：1092-1095，1163.

（收稿日期：2018-11-02編輯：陶希睿）