抗體檢測在新型冠狀病毒肺炎診斷中的應(yīng)用進(jìn)展

劉澤端 磨立達(dá)

摘要：新型冠狀病毒肺炎（簡稱新冠肺炎）是由新型冠狀病毒 （2019-nCoV） 引起的一類新型的急性傳染病。2019-nCoV抗體檢測作為診斷新冠肺炎的主要依據(jù)，可協(xié)同核酸診斷。本文綜述2019-nCoV抗體檢測在新冠肺炎診斷中的應(yīng)用進(jìn)展，為臨床應(yīng)用及進(jìn)一步研究提供參考。

關(guān)鍵詞：新型冠狀病毒;抗體檢測;應(yīng)用進(jìn)展

【中圖分類號】R511 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號】1673-9026（2022）11--01

截止2022年3月，新型冠狀病毒肺炎波及全球各地，確診的總?cè)藬?shù)超過4.46億，我國積極采取了封城、隔離等防疫措施，取得了良好效果。衛(wèi)健委將2019-nCoV感染的肺炎納入傳染病防治法規(guī)定的乙類傳染病，命名為“新型冠狀病毒肺炎（簡稱新冠肺炎）”，按甲類傳染病管理，世界衛(wèi)生組織（WHO）在2020年3月將新冠肺炎正式命名為“Corona virus Disease 2019， COVID-19”，導(dǎo)致新冠肺炎疫情的病毒被命名為“2019 新型冠狀病毒（2019-nCoV）” [1]。

1.2019-nCoV抗體檢測的意義

目前，實(shí)驗(yàn)室將核酸檢測作為新冠肺炎診斷的一項(xiàng)“金標(biāo)準(zhǔn)”，但核酸檢測受標(biāo)本采集運(yùn)輸、標(biāo)本病毒含量、檢測試劑質(zhì)量等因素導(dǎo)致漏檢。由衛(wèi)健委發(fā)布《新型冠狀病毒肺炎診療指南（試行第七版）》[2]中，首次推薦將2019-nCoV抗體檢測作為診斷新冠肺炎的依據(jù)，檢測結(jié)果可以獲得機(jī)體近期或者以往是否感染過2019-nCoV。當(dāng)2019-nCoV侵入機(jī)體后，機(jī)體的免疫細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生特異性抗體，IgM抗體在急性感染后產(chǎn)生，親和力較低，持續(xù)的時(shí)間短，可提示是否處于急性感染或者近期感染;IgG抗體產(chǎn)生稍晚，有較強(qiáng)的親和力，維持時(shí)間長，可提示曾感染2019-nCoV或者當(dāng)前為感染中后期;因兩種抗體產(chǎn)生的時(shí)間與峰值時(shí)間不一致，聯(lián)合檢測可以監(jiān)測患者整個(gè)疾病過程的抗體表達(dá)水平[3]。2019-nCoV核酸檢測使用樣本多為上呼吸道樣本，采集過程容易導(dǎo)致醫(yī)護(hù)人員被感染，而2019-nCoV的抗體檢測采用含病毒量低或不含病毒的血液作為檢測樣本，采集便捷、運(yùn)輸要求低、依賴設(shè)備少、樣本更穩(wěn)定、檢測耗時(shí)短，在保護(hù)醫(yī)護(hù)人員安全的同時(shí)也極大提高了臨床檢測的效率，是一個(gè)很好的檢測指標(biāo)[4]。

2.2019-nCoV抗體檢測方法

目前2019-nCoV抗體采用的技術(shù)主要有化學(xué)發(fā)光（CLIA）、膠體金免疫層析（GICA）、酶聯(lián)免疫分析（ELISA）以及熒光免疫層析（ICA）等檢測方法，每種方法都具有一定的優(yōu)勢，但試劑盒間的敏感度、特異度及一致性有一些差異[5]。指南[6]指出存在差異的原因有：①試劑盒選擇S蛋白和/或N蛋白為捕獲抗原，②待檢抗體選擇IgM、IgG、IgA等一種或多種抗體聯(lián)合檢測，③使用雙抗原夾心法、間接法、捕獲法等不同的檢測方法，④廠家的生產(chǎn)工藝及質(zhì)量等方面;此外，受自身ASO、補(bǔ)體、RF等內(nèi)源性物質(zhì)以及脂濁、標(biāo)本溶血、免疫交叉反應(yīng)、實(shí)驗(yàn)污染等外源性因素干擾，檢測結(jié)果會(huì)出現(xiàn)假陽性，同時(shí)，受抗體表達(dá)窗口期、試劑盒靈敏度、樣本保存、操作不當(dāng)、抗體反應(yīng)弱等導(dǎo)致結(jié)果假陰性。

2.1 CLIA

化學(xué)發(fā)光法目前以磁微粒化學(xué)發(fā)光法較為普遍，是以磁微粒為載體，通過對被檢測物質(zhì)催化底物的發(fā)光強(qiáng)度進(jìn)行檢測，計(jì)算出濃度。磁性納米顆粒具有表面積大、分離富集能力好、易操控等特點(diǎn)，檢測敏感性較高。鄭培明等[7]指出：應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法檢測2019-nCoV中IgM、IgG抗體的敏感性分別為48%、56%，特異性均為100%。胡燕等[8]經(jīng)臨床研究得出：化學(xué)發(fā)光法檢測2019-nCoV IgM、IgG抗體的敏感性分別為75.86%、90.52%，特異性分別為99.42%、98.84%，準(zhǔn)確性分別為96.86%、96.75%。CLIA結(jié)果穩(wěn)定、自動(dòng)化檢測程度高，能夠?qū)贵w進(jìn)行定量檢測，但需要配套的檢測設(shè)備，臨床使用受限于設(shè)備的普及程度，基層醫(yī)院少見，常見于需要定量檢測、監(jiān)測抗體水平的變化情況的醫(yī)療機(jī)構(gòu)[9]。

2.2 GICA

膠體金免疫層析技術(shù)是特異性抗體與膠體金標(biāo)記的抗原形成免疫復(fù)合物，在檢測區(qū)被包被的抗體捕獲形成一條肉眼可見的紅色條帶。檢測使用10uL的全血、血清或血漿樣本，15min便可觀察結(jié)果，如檢測線（T）與質(zhì)控線（C）出現(xiàn)條帶，結(jié)果為陽性，如僅C出現(xiàn)條帶，結(jié)果為陰性 [10]。鄧杰倫等[11]采用GICA檢測血清內(nèi)的2019-nCoV IgM抗體，靈敏度與特異度分別是50%、90.91%。李暉等[12]采用GICA檢測血清內(nèi)的2019-nCoV IgM、IgG靈敏度為 78.7%、73.0%，特異度分別為98.2%、99.3%。羅雪蓮等[13]指出：GICA無需專用儀器、無需特殊培訓(xùn)、檢測結(jié)果直觀，具有操作簡便、快速、經(jīng)濟(jì)、實(shí)用性強(qiáng)等特點(diǎn)，但是檢測結(jié)果容易受到環(huán)境、標(biāo)本質(zhì)量、視覺判定、試劑批間差異等因素影響，適合人力資源不足、資金有限、缺乏專業(yè)檢測儀器的基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)，無需設(shè)備便可以對無癥狀感染或者疑似患者開展檢測。

2.3 ELISA

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)指的是選用包被于聚苯乙烯等固相載體上的可溶性的抗原或抗體，將其與待測抗體及酶標(biāo)記的抗體/抗原特異性結(jié)合形成三元復(fù)合物，根據(jù)酶催化底物產(chǎn)生吸光度變化得到結(jié)果[14]。李德昌等[15]研究兩種ELISA試劑盒靈敏度和特異度分別為87.7%，70.1%和特異度分別為83.9%，89.2%。吳重陽等[16]研究ELISA檢測2019-nCoV IgM和IgG抗體的靈敏度分別為55.26%、60.53%，特異度均為97.67%。ELISA對實(shí)驗(yàn)室操作、儀器配置要求相對較低，能夠同時(shí)用于多個(gè)樣品檢測，但是檢測速度慢，步驟繁瑣、干擾因素較多，目前大型醫(yī)療機(jī)構(gòu)使用較少，常見于基層醫(yī)院[17]。

2.4 ICA

熒光免疫層析技術(shù)具有敏感度高、穩(wěn)定性好、受自然熒光干擾低等優(yōu)點(diǎn)。徐云云等[18]采用ICA檢測2019-nCoV IgM 抗體的靈敏度為88.75%，特異度為96%。薛雄燕等[19]檢測2019-nCoV總抗體的陽性樣本符合率為90.9%，陰性標(biāo)本符合率為100%。熒光免疫層析技術(shù)不僅有效的延續(xù)了傳統(tǒng)膠體金免疫層析技術(shù)無需對樣本進(jìn)行特殊處理的優(yōu)點(diǎn)，因此檢測過程中所需的樣本數(shù)量較少，同時(shí)還結(jié)合了熒光檢測技術(shù)具備的敏感度高的優(yōu)點(diǎn)，可見該技術(shù)在一定程度解決了膠體金免疫層析技術(shù)存在的弊端。免疫熒光層析法使用小型檢測設(shè)備，可實(shí)現(xiàn)床旁每日檢測，該法重復(fù)性、靈敏度優(yōu)于膠體金法，低于化學(xué)發(fā)光法，性能介于膠體金法和化學(xué)發(fā)光法之間。

3. 結(jié)語

綜上所述，2019-nCoV抗體檢測作為新冠肺炎診治的一個(gè)重要補(bǔ)充或協(xié)同檢測手段，較核酸檢測優(yōu)勢明顯，其打破了核酸檢測技術(shù)對場地和操作人員方面的限制，還有效降低醫(yī)護(hù)人員感染的風(fēng)險(xiǎn)。2019-nCoV抗體的檢測方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，各級醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)可根據(jù)自身?xiàng)l件采購相應(yīng)試劑，實(shí)現(xiàn)疑似患者快速準(zhǔn)確篩檢和確診的前移和下移，為疾病防控、疾病篩查及臨床診斷提供有利依據(jù)，有效減輕經(jīng)濟(jì)及社會(huì)負(fù)擔(dān)。此外，抗體檢測會(huì)受到各種因素干擾，提倡多技術(shù)相結(jié)合，加強(qiáng)科研攻關(guān)，取長補(bǔ)短，增強(qiáng)實(shí)用性，提高疾病的快速明確診斷和鑒別診斷的能力。

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