不同標本DNA檢測對疑似巨細胞病毒感染嬰兒的檢測效能

Efficacy of DNA Testing in Different Specimens in Infants with Suspected Cytomegalovirus Infection/ ZHANG Hua，GUO Hui，XUE Ting.//Medical Innovation ofChina，2025，22（20）： 145-148

[Abstract]Objective：To investigate the efficacy of DNA testing in different specimens for infants with suspected cytomegalovirus （CMV） infection.Method： Atotal of 10O cases of suspected CMV-infected infants admited tothe Maternaland Child Health Hospitalof Ji'an from January2021 to December 2O22 wereselected as the study subjects，and ethylene diamine tetraaceticacid-anticoagulated blood，urine and sputum samples were collected from the infants，andreal-time fluorescencequantitative polymerase chain reaction method was applied to perform CMV-DNA detection，the positive rates of different specimens，the positive rates of CMV-DNA detection and the viral loads of different specimens with positive CMV-DNA detection were compared.Result： Among the 100 children with suspected of CMV infection，there was a statistically significant diference in the positive rate of different specimens （Plt;0.05） ; and the positive rate of CMV-DNA in urine and sputum specimenswere higher than thatin blood specimens， the differences were statistically significant （ P lt;0.05）. There was statistically significant difference in the viral load of positive CMV-DNA tests in blood， urine and sputum samples （ P lt;0.05）; the viral load of positive CMV-DNA tests in sputum was higher than those in blood and urine，the differences were statistically significant ?Plt;0.05， ; and the viral load of positive CMV-DNA tests in urine was higher than that in blood， the difference was statistically significant （Plt;0.05） . Conclusion： Infant sputum CMV-DNA test has high diagnostic value for CMV infection.

[Keywords] Human cytomegalovirusDNA Infant Sputum

First-author's address： Department of Pediatrics，the Maternal and Child Health Hospital of Ji'an， Ji'an343000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2025.20.034

巨細胞病毒（CMV）是一種常見的皰疹病毒，主要通過體液傳播。對于胎兒、新生兒及嬰幼兒群體，CMV感染可能引發急性或慢性病程，并潛在地導致神經系統遲發后遺癥，兒童CMV感染已成為一個跨越國界的公共衛生焦點。在全球范圍內，發達國家CMV感染率為 40%～50% ；而在發展中國家，感染率普遍超過 90%^[1] 。中國作為CMV感染的高風險區域，不僅孕產婦群體中的血清抗體陽性率居高不下，超過 95.0% ，兒童群體的相應指標也維持在 83.2%～87.3%^[2-3] 。CMV具有獨特的潛伏－活化生物學特性，一旦侵入宿主體內，便可能實現長期乃至終身寄居。盡管在免疫功能健全的個體中，CMV往往以無癥狀感染的形式隱匿存在，但在免疫力尚未成熟的胎兒、嬰幼兒及免疫受抑的個體中，能迅速引發多系統性疾病或專一器官損傷，展現出其強大的致病潛能[4。CMV感染對靶器官的損害模式與宿主年齡緊密相關，中樞神經系統受損及先天畸形多發生在宮內先天性感染的病例中，而嬰幼兒期感染則更傾向于表現為肝炎或肺炎的臨床征象。重癥先天性CMV感染的新生兒死亡率高達 30% ，而存活者往往伴隨著永久性的神經系統損傷。出生時無癥狀的患兒，其中 5%～17% 可能出現感覺神經性耳聾、智力發展滯后、運動障礙、癲癇及視網膜脈絡膜炎等在內的神經系統遲發后遺癥[5。因此，針對兒童CMV感染的早期識別與精準診斷，對減少出生缺陷和提高人口素質具有重要的現實意義。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2021年1月—2022年12月吉安市婦幼保健院收治的疑似CMV感染嬰兒共100例為研究對象，男52例，女48例；月齡1＼～12個月，平均（ 6.2±2.5 ）個月。納入標準：嬰兒伴有黃疸、淋巴結腫大等表現；血 IgM 、IgG陽性。排除標準：合并精神疾病；存在先天性心臟病；存在器官移植。

嬰兒家屬對本試驗知曉，并自愿簽署知情同意書。

本研究經吉安市婦幼保健院醫學倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1樣本采集血液樣本采集：入院時，抽取嬰兒 3mL 外周靜脈血液，并立即轉移至無菌試管中，確保全程無菌操作。尿液樣本收集：首先，使用75% 濃度的乙醇對嬰兒的會陰區域進行細致清潔，隨后收集其排出的新鮮尿液 3～5mL ，迅速注人無菌試管內，避免污染。痰液樣本采集：所有嬰兒的痰液采集工作均由經驗豐富的醫護人員通過專業的吸痰技術完成，確保安全且高效地收集痰液至無菌試管，以備后續分析。

1.2.2 CMV-DNA提取尿液與痰液CMV-DNA提取：分別量取尿液與痰液樣本各 1mL ，并置于1.5mL 離心管中。隨后，以 13000r/min 的速度進行 10min 的離心處理，棄去上清液。向沉淀中加入50μL DNA提取液并充分混勻，隨后在 100^°C 條件下恒溫處理 10min 。之后，再次以 13000r/min 的速度離心 10min ，最終保留上清液作為PCR擴增的模板。血液CMV-DNA提取：從血漿中取出 100μL 與等體積的DNA濃縮液充分混合均勻。隨后，進行 10min 的離心處理（轉速為 13000r/min ），去除上清液。向沉淀中加入 20μL DNA提取液并徹底混合，于 100^qC 條件下加熱 10min 。之后，重復離心步驟（轉速同上），最終保留上清液用于PCR擴增。陰陽對照與質控品處理：遵循與尿液樣本相同的處理程序。CMV陽性定量參考品處理：通過振蕩使其充分混合均勻，隨后以 8000r/min 的速度短暫離心 5s ，確保無氣泡干擾，并妥善保存以備使用。

1.2.3實時熒光定量PCR檢測將 2μL 的DNA模板準確加人預先配置好試劑的PCR反應管中，隨后置人ABI7500熒光定量PCR儀進行擴增。擴增程序設定如下：首先，在 93‰ 下預變性 2min ；接著，進行10個循環的擴增，每個循環包括 93^°C 變性 45s 和 55^qC 退火/延伸 60s ；最后，再進行30個循環的擴增，每個循環條件為 93°C 變性 30s 和 55°C 退火/延伸 45s 。

1.2.4CMV-DNA陽性判定參考《巨細胞病毒感染診斷方案》中的標準，CMV-DNA拷貝數 gt;5× 10²copies/mL ，且增長曲線呈典型S曲線為陽性，否則為陰性[，同一患兒任意樣本檢測為陽性則診斷為CMV感染。

1.3 觀察指標

（1）疑似CMV感染嬰兒不同標本DNA檢測陽性情況：統計血液、尿液、痰液的CMV-DNA檢測陽性率。對于三種樣本檢測結果不一致的情況，再次采集兩次三種樣本進行重復檢測，以相同檢測結果 ?2 的情況為最終檢測結果。（2）不同標本CMV-DNA檢測陽性的病毒載量對比：主要為血液、尿液、痰液CMV-DNA檢測陽性的病毒載量。CMV-DNA載量采用 log₁₀ 對數轉換。

1.4統計學處理

應用SPSS20.0對行統計學檢驗。偏態分布的計量資料用 M （ Q₁ ， Q₃ ）表示，M為中位數， Q₁ 、Q₃ 分別為四分之一位數、四分之三位數，采用Kruskal-Wallis H 檢驗，兩兩比較采用Nemenyi法檢驗。陽性率等計數資料采用率（ % ）表示，比較用χ² 檢驗。 Plt;0.05 為差異有統計學意義。

2結果

2.1疑似CMV感染嬰兒不同標本DNA檢測陽性情況對比

疑似CMV感染的100例患兒中，血液CMV-DNA陽性15例，陽性率為 15% ；尿液CMV-DNA陽性40例，陽性率為 40% ；痰液CMV-DNA陽性42例，陽性率為 42% 。不同標本的陽性率對比，差異有統計學意義（ χ²=20.690 ， P=0.000 ），其中尿液、痰液標本CMV-DNA陽性率高于血液標本，差異有統計學意義（ χ²=15.674 ， P=0.000 ； χ²=17.887 ，P=0.000 ）。

2.2 不同標本CMV-DNA檢測陽性的病毒載量對比

經對數轉換，血液CMV-DNA檢測陽性的病毒載量為3.72（3.03，4.15） log₁₀ copies/mL，尿液CMV-DNA檢測陽性的病毒載量為4.77（3.87，5.13）log₁₀ copies/mL，痰液CMV-DNA檢測陽性的病毒載量為6.89（5.64，7.22） log₁₀ copies/mL。血液、尿液和痰液標本CMV-DNA檢測陽性的病毒載量對比，差異有統計學意義（ _H=45.721 ， P=0.000 ）；且痰液CMV-DNA檢測陽性的病毒載量高于血液和尿液，差異有統計學意義（ Z=5.124 ， P=0.000 Z=3.872 P=0.000 ），尿液CMV-DNA檢測陽性的病毒載量高于血液，差異有統計學意義（ Z=3.241 ， P=0.000 ）。

3討論

CMV是皰疹病毒家族中基因組最大的成員，是一種雙鏈DNA病毒，可編碼200多種蛋白質，屬于 β 皰疹病毒亞科，其對宿主或組織培養細胞有明顯的種屬特性，CMV可存在與人體上皮、內皮、平滑肌等多種細胞中，肝、腎、肺、胰等是CMV的主要靶器官[7-9]。CMV 感染者是唯一傳染源，感染后可在人體內形成巨大的細胞質內嗜堿性包涵體及核內嗜酸性包涵體，導致細胞病變和溶解破壞[1]。CMV的傳播途徑多元，既可通過血液、體液及移植器官的直接交換實現，又以母嬰傳播為核心模式，涵蓋胎盤傳遞、分娩過程及哺乳等關鍵環節。CMV的水平傳播包括與感染兒童唾液、尿液、淚液等體液的密切接觸，醫療過程中的血液制品輸注、器官/骨髓移植及性接觸[1]。部分免疫正常的個體感染后表現為無癥狀感染，對于免疫功能低下的嬰兒，CMV感染可導致多器官損傷，導致神經發育障礙，影響嬰兒智力、視力及聽力的發展，甚至會導致死亡[12]。

本研究中，100例疑似CMV感染的患兒中，不同標本的陽性率對比差異顯著，其中尿液、痰液標本CMV-DNA陽性率高于血液標本，差異有統計學意義（ Plt;0.05 ）。血液、尿液和痰液標本CMV-DNA檢測陽性的病毒載量比較，差異有統計學意義（ Plt;0.05 ），痰液CMV-DNA檢測陽性的病毒載量高于血液和尿液，差異有統計學意義（ Plt;0.05 ），尿液CMV-DNA檢測陽性的病毒載量高于血液，差異有統計學意義（ Plt;0.05 ）。提示痰液標本CMV-DNA檢測對嬰兒CMV感染更具敏感性。在探討CMV感染的臨床診斷策略時，筆者發現其臨床表現的多樣性和非特異性顯著，因此，高度依賴于精準的實驗室檢查以明確診斷。盡管病毒培養技術被視為診斷的金標準，但其冗長的周期與嚴苛的技術門檻在實際臨床應用中構成了顯著障礙。血清學檢測雖然操作簡便，但在病毒感染的早期階段，其敏感性有限，難以滿足快速診斷的需求[13-14]。相比之下，PCR技術憑借其能夠實現早期檢測及病毒載量量化的能力，在評估抗病毒治療效果方面展現出重要價值[15-16]。特別是在嬰幼兒CMV 感染的診斷中，血液與尿液作為傳統的主要檢測標本，反映了病毒傾向于侵襲管道上皮細胞，腎小管上皮細胞是CMV的主要靶細胞，患兒尿液中CMV濃度較高，若感染CMV， 24～72h 即可檢出，因而CMV感染的患兒尿液CMV-DNA 陽性檢出率高[17-18]。然而，有研究指出，單獨依賴尿液標本進行新生兒CMV感染的診斷可能存在局限性，如標本污染風險及感染后持續排毒導致的假陽性問題[19-20]。鑒于這些挑戰，提出采用多種標本聯合檢測的策略，并優先推薦尿液，但需謹慎評估其局限性。值得注意的是，在臨床實踐中，面對眾多年幼的肺炎患兒，他們往往因無法自主排痰而加劇呼吸道阻塞的風險。此時，吸痰術作為一種有效的輔助治療手段，不僅能幫助清理呼吸道，還提供了一個創新的思路一一通過吸痰術獲取的痰液作為CMV感染檢測的潛在標本。本研究進一步揭示，與尿液相比，痰液中的CMV-DNA載量顯著更高，這一發現提示痰液標本在提升檢測敏感度和特異度方面可能具有獨特優勢，為嬰兒CMV感染的診斷開辟了新的視角。

綜上所述，嬰兒肺炎中的痰液標本CMV-DNA檢測對CMV感染具有較高的診斷價值。

參考文獻

[1]蔣吳君，李明磊，華軍.兒童巨細胞病毒肺部感染的診斷和挑戰[J].中國醫師進修雜志，2023，46（5）：472-475.

[2]左江成，鄧琛琛，楊潔，等.湖北宜昌市育齡婦女和母嬰巨細胞病毒感染現狀調查及感染風險評估[J].現代檢驗醫學雜志，2020，35（6）：91-94.

[3]楊娟，楊博，王望橋，等.深圳市坪山區婚檢女性和孕婦巨細胞病毒感染情況調查[J].中國婦幼保健，2021，36（6）：1348-1350.

[4]張冬梅，應海燕，楊慶，等.新生兒巨細胞病毒感染及發育障礙與PAX9基因多態性的關系[J]中華醫院感染學雜志，2021，31（12）：1766-1769.

[5]XIEM，TRIPATHIT，HOLMESNE，etal.Serologicalscreening for cytomegalovirus during pregnancy： a systematicreview ofclinical practice guidelines and consensus statements[J].PrenatDiagn，2023，43（7）：959-967.

[6]中華醫學會兒科學分會感染消化學組.巨細胞病毒感染診斷方案[J].中國實用兒科雜志，2000，15（2）：121.

[7] SU L，CHEN Y，FU M，et al.CD14 facilitates perinatal humancytomegalovirus infection in biliary epithelial cells via CD55[J].JHEP Rep，2024，6（5）：101018.

[8]張瑜，郭軻，劉道路.巨細胞病毒活動性感染患兒NK細胞及GGT水平與CMV DNA 的相關性[J].肝臟，2024，29（2）：220-222.

[9]陳艷，侍效春，劉曉清.不同巨細胞病毒感染患者的外周血淋巴細胞亞群分析[J].北京醫學，2024，46（3）：181-185.

[10] KANEKO M，MURAOKA J，KUSUMOTO K，et al.Lowmaternal immunoglobulin Gavidityand single parityasadverseimplications of human cytomegalovirus vertical transmission inpregnant women with immunoglobulin M positivity[J].Viruses，2021，13（5）：362-365.

[11]徐水寶，盧洪洲.先天性巨細胞病毒感染的研究進展[J].微生物與感染，2022，17（2）：123-128.

[12]陳英虎.重視先天性巨細胞病毒感染的篩查和全病程管理[J].中華臨床感染病雜志，2023，16（4）：251-255.

[13]陳瑜.制約臨床病毒血清學檢測的瓶頸問題及解決方案[J].中華實驗和臨床病毒學雜志，2022，36（6）：625-628.

[14]藍陳福，李司鵬，徐曉紅，等.麗水地區嬰兒巨細胞病毒感染篩查與隨訪結果分析[J].中國醫師進修雜志，2020，43（8）： 678-685.

[15]王金林，史亞茹，王文韜，等.實時熒光定量及數字PCR技術在病毒檢測中的應用及研究進展[J].醫學診斷，2023，13（3）： 320-327.

[16]賴金甜，李相新，鄭芬，等.化學發光法聯合定量PCR用于嬰幼兒巨細胞病毒感染合并肺炎的診斷價值[J].廣東醫學，2019，40（14）：2104-2107.

[17]邱銳琴，吳小波，杜志云，等.尿液病毒載量檢測對先天性巨細胞病毒感染診斷及病情評估的價值分析[J].中國實驗診斷學，2021，25（1）：43-46.

[18]中國醫師協會新生兒科醫師分會，中國醫師協會新生兒科醫師分會感染專業委員會，中華新生兒科雜志編輯委員會.新生兒巨細胞病毒感染管理專家共識[J].中華新生兒科雜志，2021，36（6）：1-7.

[19]李東明，何升.先天性巨細胞病毒感染早期篩查研究現狀[J/OL].中華婦幼臨床醫學雜志：電子版，2022，18（6）：627-633（2023-04-11） [2024-10-10].htps：//d.wanfangdata.com.cn/periodical/ChlQZXJpb2RpY2FsQ0hJTmV3UzIwMjQwNzA0EhN6aGZ5bGN5eHp6MjAyMjA2MDAyGgh0OHNham12ag%3D%3D.D0I：10.3877/cma.j.issn.1673-5250.2022.06.002.

[20] ZHANG X Y，LIU C，NEPAL S，et al.A hybrid approach forscalable sub-tree anonymization over big data using MapReduceon cloud[J].Journal of Computer and System Sciences，2014，80（5）： 1008-1020.

（收稿日期：2024-11-15）（本文編輯：郎序瑩）