牛病毒性腹瀉病毒檢測與防控技術

牛病毒性腹瀉（BovineViralDiarrhea，BVDV）首次出現在1946年的美國，而后迅速在全球傳播。我國首例BVDV出現在1980年，隨著牛養殖業的快速發展，其流行范圍、危害程度都出現了不同程度的擴大。現如今，更是給集約化牛養殖帶來了不小的影響。一般情況下，感染BVDV的牛會出現產奶量、生長性能下降等情況，另外，該病毒突變率極高，控制難度大。因此，明確其臨床癥狀、掌握有效的檢測方法是成為疾病防控的關鍵和基礎。

1牛病毒性腹瀉病毒的臨床癥狀

牛病毒性腹瀉病毒的易感群體有兩個，一個是膘情好的成年母牛，一個是6～18個月齡的犢牛。由于這兩類牛群普遍具有較好的體質，所以，經常會成為BVDV的攜帶者，并在與其他健康牛接觸時將病毒傳播給對方。

牛感染BVDV的癥狀表現大體分為兩種，一種是急性感染，一種是慢性感染。

第一，急性感染：多見于新疫區或易感牛群，潛伏期最短為7d，一般不超過 10d 發病后，癥狀表現為超過40℃的高溫、食欲下降、呼吸急促、眼鼻處分泌物增多；發病后3d左右，病牛口腔出現黏膜糜爛、壞死，同時呼氣伴有惡臭味并開始出現流口水的癥狀。部分病牛還會出現消化系統癥狀，癥狀表現為水樣狀腹瀉、糞便伴有黏液且惡臭。若病癥嚴重，病牛還容易脫水死亡。若懷孕的母牛感染BVDV，其癥狀表現為流產、產下帶有先天性缺陷的牛犢。

第二，慢性感染：多見于老疫區或隱性感染的牛群，其癥狀表現為體溫略高、趾間皮膚糜爛、間歇性腹瀉、消化道彌漫性充血病變。對于病程長的病牛，后期還容易嚴重脫水，甚至是死亡。

2牛病毒性腹瀉病毒的檢測方法

2.1核酸檢測法

核酸檢測法可被用于各年齡段牛群的BVDV檢測，具有靈敏度高、定量快速、高特異性等特點2]。

第一，實時熒光定量PCR是一種通過熒光探針或染料，實時監測PCR擴增過程并根據循環閾值定量病毒核酸的核酸檢測法，其特點包括可檢測低至102copies/μL的病毒核酸、支持針對BVDV5-UTR保守區域設計引物、可用于病毒載量監測。目前，該檢測方法被用于BVDV研發中的病毒滴度測定。

第二，微滴式數字PCR是一種依托熒光信號統計數萬微滴中的陽性微滴數的核酸檢測方法，其特點包括最低檢測限達3.2copies/ μL ，適用于持續性感染牛（PI）的血液樣本檢測。目前，該檢測方法被廣泛用于PI牛的早期篩查以及病毒標準物質的開發等場景中。

2.2血清學檢測法

血清學檢測法是通過檢測牛體內針對BVDV的特異性 抗體或抗原，間接判斷感染狀態。

第一，病毒中和試驗（VNT）其原理是先將待檢血清與BVDV混合孵育，然后接種細胞，通過觀察細胞病變（CPE）抑制情況，間接判斷牛感染BVDV的情況。其中，判斷標準為中和抗體效價不低于1：256。該檢測方法具有準確性高、可區分抗體類型、病毒和細胞培養條件較為苛刻且耗時長、不支持對免疫耐受性的BVDV檢測。目前，被用于評估實驗室抗體效價、驗證疫苗免疫效果等場景中。

第二，酶聯免疫吸附試驗（ELISA）是一種常用的BVDV檢測方法，其原理是借助酶催化底物顯色反應，定量檢測抗體或抗原，其優勢在于操作便捷、檢測速度快、結果準確率高。目前，該檢測方法在BVDV檢測領域的應用包括基于BVDV重組E2蛋白檢測血清中的總抗體、基于BVDVNS3蛋白中1段具有免疫反應型的重組片段檢測血清中的總抗體、基于超免疫血清的雙抗體夾心ELISA檢測方法等。現階段，ELISA是臨床領域BVDV的常規檢測方法，其應用場景包括組織及臟器培養物中的BVDV檢測、大規模牛群BVDV抗體水平監測。不過，該方法的應用受限于所需特異性抗原制備等，仍無法被廣泛應用。

第三，膠體金免疫層析技術其原理是先將BVDV特異性抗體固定于試紙條的檢測線和質控線，然后以肉眼觀察其顏色變化，從而判斷牛感染BVDV情況。其特點包括檢測快速、便捷，支持現場檢測，存在交叉反應風險。目前，該檢測方法被用于散養戶、運輸環節的牛感染BVDV的快速初篩場景中。

在BVDV防控中，血清學檢測法具有不可替代的作用，表現為ELISA和膠體金試紙結合后，可被用于基層快速篩查場景中；免疫熒光抗體技術和雙抗體夾心ELISA結合后，可被用于直接檢測病毒場景中。

2.3病毒分離鑒定法

病毒分離鑒定法是實驗室鑒定BVDV最為基礎的鑒別方法，其核心在于患病動物組織樣本的獲取、培育與鑒定，其優勢在于技術體系成熟、檢測流程完善、適用范圍廣、支持對多種組織樣本的培育與鑒定。據悉，已有學者通過反復凍融、研磨、離心處理、RT-PCR與間接免疫熒光檢測動物組織樣本的病變情況；此外，還有學者通過破碎、離心處理、接種于MDBK細胞中盲傳5代、RT-PCR檢測、透射電鏡觀察等檢測細胞病變情況等。不過，由于該方法對實驗室環境、檢測人員的身體素質等有著較高要求，并且耗時長、檢測周期長，所以很難應用于大規模樣本檢測場景。

3牛病毒性腹瀉病毒防控要點

3.1加強飼料及草料的儲存管理

由于縣四季分明，雨量充沛，濕度相對較大，所以，養殖戶在飼料和草料儲存方面面臨更高的要求。

第一，優先選擇在干燥、通風良好的倉庫中存放飼料和草料。考慮到當地濕度較大，故在設計倉庫時可考慮加入架空地板設計，以阻止飼料和草料與地面直接接觸的方式，降低其受潮的可能性。為實現對倉庫內環境的有效控制，還需在倉庫內安裝除濕機、通風扇等溫濕度調節設備，以便于將室內溫濕度控制在合適范圍內，從而可以有效防范霉菌的滋生。為盡可能地消滅霉菌、病菌的生存空間，養殖戶還需定期清掃、消毒倉庫等。

第二，分區放置受污染和未受污染的飼料和草料，以避免飼料和草料出現交叉感染的情況；考慮到儀隴縣鼠害、蟲害相對較多，所以，在儲存飼料和草料時，還需在適當位置設置防鼠板、防蟲網等設施，用于阻止鼠蟲進入倉庫，破壞和污染飼料和草料。此外，還需加大飼料檢測力度，重點檢測其是否攜帶病毒或其他病原體，以實現從源頭有效控制飼料和草料的品質。

第三，分層堆放飼料和草料，以確保堆垛間空氣流通；合理規劃堆垛間距，為通風、檢查提供充足的操作空間；秉承“先進先用”的原則使用飼料和草料，以合理縮短飼料和草料的在倉存放時間，從而避免其品質下降嚴重；根據季節變化，調整堆放方式和儲存時間。比如，在5～9月降水集中期間，養殖戶應根據該時期內的降水頻率、降水量等，調整飼料和草料的防潮防澇措施，以免使其受潮、發霉。

3.2落實免疫接種

第一，由儀隴縣獸醫部門派遣專業人員到基層向養殖戶科普疫苗接種，同時，結合BVDV的覆蓋范圍、發病規律、疾病特征以及牛群的健康程度等，為養殖戶選擇疫苗提供專業化建議；為最大限度地發揮疫苗接種在BVDV防控中的作用，當地獸醫部門在選擇疫苗種類時，還需優先考慮適合本地牛群的疫苗，如BVDV滅活疫苗等。另外，還要仔細檢查疫苗的質量檢測證書等，以確保其安全、可靠。

第二，規范免疫程序。基于因地制宜的理念，制定個性化的免疫程序。一般情況下，在牛犢出生后的一段時間內，需完成首次疫苗接種，而后在適當時期完成加強針的接種。為確保免疫效果最優，在制定和完善免疫程序時，獸醫部門需綜合考慮儀隴縣的氣候、交通、養殖規模、養殖環境等。

第三，為進一步提高疫苗接種的規范性，儀隴縣需聯合獸醫有針對性組織養殖戶參加培訓，以提高其疫苗接種意識和能力。

第四，持續監控。在給牛接種疫苗后，養殖戶需要密切觀察牛的狀態，若出現異常，需立即聯系獸醫干預。此外，養殖戶還需重視對整個牛群的健康監測，其內容包括體溫、皮膚黏膜狀況等[3。另外，還要持續監控PI牛，通過篩選、淘汰PI牛，減少感染BVDV的牛數量。

3.3合理養殖

第一，嚴格控制牛養殖密度，確保每平方米的牛數量不超過1.2頭，同時，按 12～16m² 頭控制飼養面積；第二，適時清理牛舍衛生并通風，以確保牛舍環境良好；第三，加強日常檢查，通過定期對牛進行健康檢查，及時發現和處理患病牛；第四，推廣牛健康檔案制度，詳細記錄牛的接種記錄、患病信息等信息，以實現對牛健康狀況的精準掌握。

結語

綜上，牛病毒性腹瀉病毒會給養殖戶帶來巨大威脅，而檢測方法是獸醫部門聯合養殖戶落實病毒防控的基礎和前提。因此，基層要加深對各種檢測方法的認知和理解，掌握其原理、適用場景等，以便在實際工作中準確選擇和應用合適的檢測方法。此外，還要組織養殖戶從飼料管理、免疫接種、合理養殖等角度入手，做好日常防控，從而降低牛的染病率，減少經濟損失。

參考文獻：

[1] 舒磊.試論牛、羊、豬感染牛病毒性腹瀉病毒臨床癥狀、鑒別診斷以及防控[J].中國動物保健，2021，23（10）：22+24.

[2] 賈偉娟，王海鋒，付明山，等.牛病毒性腹瀉病毒檢測方法研究進展［J].養殖與飼料，2024，23（03）：81-85.

[3] 牟思洋，李焱，何小強，等.牛病毒性腹瀉病毒流行和防控研究進展[J].養殖與飼料，2024，23（10）：90-94.收稿日期：2025-04-28

作者簡介：李開明（1970—），男，漢族，獸醫師。研究

方向：動物疫病防控。