著色性干皮病一家系的XP基因突變檢測

張正中 牟韻竹 楊浩 楊萍 劉一平 唐芹芹 劉林莉 陳星 眭維恥

【摘要】 目的檢測1個(gè)著色性干皮病家系的XPA和XPC基因突變。方法收集1個(gè)著色性干皮病家系的臨床資料，采集先證者及其家庭成員的外周血標(biāo)本，提取外周血白細(xì)胞中的DNA，采用PCR反應(yīng)擴(kuò)增XPA和XPC所有外顯子編碼區(qū)及其側(cè)翼序列，通過對PCR反應(yīng)產(chǎn)物直接測序進(jìn)行序列分析。結(jié)果該著色性干皮病家系未發(fā)現(xiàn)XPA和XPC的致病性基因突變。結(jié)論盡管XPA和XPC是國內(nèi)比較常見的著色性干皮病亞型，但該家系可能屬于其他的亞型。

【關(guān)鍵詞】著色性干皮病；突變；XPA ；XPC

【Abstract】Objectives To identify pathogenic mutation of the XPA and XPC gene in one familial cases of xeroderma pigmentosum.

MethodsWe collected blood samples and clinical data from one familial cases of xeroderma pigmentosum. Genomic DNA was extracted from peripheral blood. All the coding exons and exon-intron flanking sequences of XPA and XPC gene were amplified by polymerase chain reaction and products were analyzed by direct sequencing.

ResultsNo XPA and XPC pathogenic mutation was found in this family with xeroderma pigmentosum.

ConclusionsAlthough XPA and XPC is a more common subtypes with xeroderma pigmentosum in the domestic, but this family may be other subtypes.

【key words 】 Xeroderma Pigmentosum / XPA / XPC / mutation

【中圖分類號】R722.12 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B【文章編號】1004-4949(2014)07-0038-02

著色性干皮病（Xeroderma Pigmentosum，XP）是一種極其少見的常染色體隱性遺傳性損容性皮膚病，嚴(yán)重危害患者身心健康。1870年由匈牙利裔的皮膚病教授Kaposi首先描述，1882年命名［1］。其主要臨床特征為皮膚對日光、特別是紫外線高度敏感，皮膚干燥脫屑，雀斑樣色素沉著，皮膚易癌變。XP已發(fā)現(xiàn)7組互補(bǔ)型(XPA、XPB、XPC、XPD、XPE、XPF、XPG)和1種變異型(XPV），遺傳互補(bǔ)分析研究表明，XP互補(bǔ)組的分布有一定的地區(qū)性，日本人A組最多，歐美國家C組和D組分布較廣泛，中國人C組居多［2］。XP(A—G)和XPV基因已經(jīng)被全部定位克隆。本文對XP 1個(gè)家系進(jìn)行XPA和XPC基因的突變檢測。

1、 材料與方法

1.1 臨床資料

收集來自四川的1個(gè)著色性干皮病家系的臨床資料。先證者呂小會(huì)，女，18歲。因暴光部位起色斑15年，顏面變形6年就診。患者出生時(shí)膚色無明顯異常，15年前（2、3歲時(shí)）患者暴光部位開始起點(diǎn)狀色斑，后皮疹緩慢逐年增多，變密集，為褐色或黑色斑點(diǎn)、斑片。病程日久，遮蓋部位亦出現(xiàn)類似色斑，皮疹小、色淡，日曬或勞累后病變加重。6年前患者顏面出現(xiàn)變形，面部中央出現(xiàn)色素減退、皮膚萎縮。雙眼視力下降，眼裂縮小。讀小學(xué)時(shí)成績中上，無明顯智力障礙，有月經(jīng)紊亂史。其父母有近親婚配史，系表兄妹結(jié)婚。其哥亦是2、3歲發(fā)病，患病過程與患者相似，但較重，且出現(xiàn)瘤樣損害，19歲因該病去世，死于皮膚鱗癌。其姐24歲，系當(dāng)?shù)蒯t(yī)生，未見發(fā)病(圖1)。皮膚科情況：皮損分布于全身，以暴露部位為重。全身可見雀斑樣損害，以顏面、雙手足明顯，為密集褐色或黑色斑點(diǎn)、斑片，位于深褐色皮膚上。面部中央見色素減退斑片、皮膚萎縮。雙眼裂縮小，眼球粘連，肉芽增生，視力下降。口唇干燥，閉口不嚴(yán)（圖2）。全身皮膚干燥，未見瘤狀損害。病理活檢示角化過度，表皮細(xì)胞排列紊亂，棘細(xì)胞不規(guī)則增生，基底層色素不規(guī)則聚集（圖3）。

圖1 家系圖

圖2 臨床照片 圖3皮膚組織病理HE×100

1.2 標(biāo)本采集

本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)同意，患者及其家屬簽署知情同意書。抽取該著色性干皮病家系中先證者及其父母、姐姐的外周靜脈血各5mL于EDTA（乙二胺四乙酸）抗凝管中。血樣置于－18℃冰箱保存。

1.3DNA提取

采用鹽析法提取研究對象基因組DNA，并以100例無親屬關(guān)系正常人的基因組DNA作為對照，以排除可能存在的基因多態(tài)性。

1.4 引物設(shè)計(jì)

采用Primer 5.0引物設(shè)計(jì)軟件針對XPA和XPC所有外顯子設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增序列包括整個(gè)外顯子及超出目標(biāo)序列邊界（內(nèi)含子內(nèi)）50bp的序列。所有引物均由上海生工生物工程有限公司合成，引物采用PAGE膠純化后稀釋為20μmol/L備用。

1.5PCR擴(kuò)增、產(chǎn)物純化

配制PCR反應(yīng)體系，設(shè)定PCR反應(yīng)條件，使用PCR反應(yīng)擴(kuò)增儀（加拿大BBI公司）進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，采用Exon I和SAP 酶切純化，將純化產(chǎn)物進(jìn)行測序PCR 反應(yīng)，反應(yīng)后再進(jìn)行測序前純化。

1.6 直接測序

擴(kuò)增產(chǎn)物純化后送至上海生工生物工程有限公司, 經(jīng)3730測序列分析儀(美國ABI公司)直接測序。測序結(jié)果采用Chromas2.0軟件對基因序列進(jìn)行對比分析,確定有無突變位點(diǎn)。

2、 結(jié)果

該著色性干皮病家系未檢測出XPA和XPC的致病性基因突變。

3、 討論

著色性干皮病（xeroderma pigmentosum,XP；OMIM 278700)是一種罕見的常染色體隱性遺傳性皮膚病，嚴(yán)重影響美觀，危及生命。我國XP發(fā)病率約為1/25萬，患者雙親多有近親婚配史。臨床以易發(fā)生光損傷和日光誘發(fā)的皮膚癌為其特征，表現(xiàn)為皮膚干燥脫屑、雀斑樣損害、皮膚腫瘤。研究表明該病主要是由編碼參與DNA損傷修復(fù)系統(tǒng)中各個(gè)環(huán)節(jié)蛋白的基因發(fā)生突變,導(dǎo)致DNA損傷修復(fù)系統(tǒng)缺陷所致［3］。

XP已發(fā)現(xiàn)7個(gè)互補(bǔ)組（XPA-G）和1個(gè)變異型（XPV），我國C組多見，其次為A組。XP(A—G)和XPV致病基因已經(jīng)被全部定位克隆，XP(A—G)與核苷酸切除修復(fù)缺陷有關(guān)，XPV與跨損傷合成缺陷有關(guān)［3］。XP臨床分型存在困難，XP基因診斷是XP診斷及分型的金標(biāo)準(zhǔn)。北京大學(xué)第一醫(yī)院發(fā)現(xiàn)2個(gè)XPAC基因的無義突變［4,5］，并對其中1個(gè)XP家系成功實(shí)施產(chǎn)前診斷［6］。我們據(jù)先證者曝光部位雀斑樣色素斑點(diǎn)，其哥有類似病史，死于皮膚鱗癌，其父母有近親婚配史，系表兄妹結(jié)婚，確診1個(gè)四川XP家系。對該家系先證者進(jìn)行XPA和XPC基因突變檢測，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)致病性基因突變。分析認(rèn)為盡管XPA和XPC是國內(nèi)比較常見的著色性干皮病亞型，但該家系可能屬于其他的亞型。

目前國際上對XP進(jìn)行了一些基因治療方面的研究，如利用基因糾正過的患者角質(zhì)形成細(xì)胞體外構(gòu)建表皮層并移植到病變區(qū)域，局部應(yīng)用DNA修復(fù)酶或激活殘存DNA修復(fù)能力的藥物改善DNA修復(fù)能力［7］。產(chǎn)前診斷是目前防治著色性干皮病的最有效手段，采用新的基因產(chǎn)前診斷技術(shù)取代以往對胎兒創(chuàng)傷性的皮膚活檢，可以減少母體創(chuàng)傷和流產(chǎn)率，降低患者發(fā)生率，提高人口素質(zhì)。開展遺傳咨詢，禁止近親結(jié)婚［8］，早期進(jìn)行基因診斷與產(chǎn)前診斷，正確指導(dǎo)婚育、生育，并行嚴(yán)格防護(hù)措施（遮光），可明顯改善預(yù)后，優(yōu)生優(yōu)育。

參考文獻(xiàn)

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