阿奇霉素原料及其分散片含量測定方法之比較研究

徐麗娟

摘 要：本文對阿奇霉素原料及其分散片含量測定方法之比較研究。高效液相色譜法：固定相為安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5μm），0.045mol/L磷酸二氫胺溶液∶乙腈（2∶1）（用三乙胺調pH至7.35）為流動相，檢測波長為210nm，流速1.0mL·min-1，柱溫：30℃；分光光度法：采用pH6.0的磷酸鹽緩沖液作為溶劑，加入75%硫酸溶液混合，放冷至室溫后測量；檢測波長為482nm。兩種方法均可對阿奇霉素原料及其分散片含量進行測定。

關鍵詞：阿奇霉素；方法；比較

阿奇霉素為半合成的十五元環大環內酯類抗生素。阿奇霉素化學名稱為：（2R，3S，4R，5R，8R，10R，11R，12S，13S，14R）-13-[（2，6-二脫氧-3-C-甲基-3-O-甲基-α-L-核-已吡喃糖基）氧]-2-乙基-3，4，10-三羥基-3，5，6，8，10，12，14-七甲基-11-[[3，4，6-三脫氧-3-（二甲氨基）-β-D-木-已吡喃糖基]氧]-1-氧雜-6-氮雜環十五烷-15-酮。阿奇霉素適應敏感細菌引起的鼻竇炎、中耳炎、急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發作；沙眼衣原體及非多種耐藥淋病奈瑟菌所致的尿道炎和宮頸炎；化膿性鏈球菌引起的急性咽炎、急性扁桃體炎；肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌以及肺炎支原體所致的肺炎等。本文對阿奇霉素原料及其分散片含量測定方法之比較研究。

1 儀器與試藥

美國必能信超聲波清洗機（北京星越天成科技有限公司）；CF-B數顯電熱恒溫水?。ㄉ虾＠醉嵲囼瀮x器制造有限公司）；1810-B石英自動雙重蒸餾水器（上?？德穬x器設備有限公司）；X1600四元低壓梯度液相色譜儀（南京皓而普分析設備有限公司）；Aurora-F1實驗室自動洗瓶機（杭州喜瓶者生物技術有限公司）；HWY-501A型恒溫水?。ㄉ虾２刭|儀器有限公司）；FA1204CFAC型全自動內校電子分析天平（北京同德創業科技有限公司）；DR5000臺式紫外可見分光光度計（廣州市怡華新電子儀器有限公司）。阿奇霉素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。乙腈（北京亞太龍興化工有限公司）、磷酸（南京大唐化工有限公司）、磷酸二氫鉀（北京亞太龍興化工有限公司）、冰醋酸（北京亞太龍興化工有限公司）、三乙胺（北京邁瑞達科技有限公司）、甲醇（青島市金宏鑫化工有限公司）、磷酸二氫銨（南京大唐化工有限公司）。

2 高效液相色譜法測定

2.1 色譜條件：依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下[1-5]。色譜柱為安捷倫Cl8規格為（4.6mm×250mm，5μm）；0.045mol/L磷酸二氫胺溶液∶乙腈（2∶1）（用三乙胺調pH至7.35）為流動相；檢測波長為210nm。理論板數按阿奇霉素峰計算應不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取阿奇霉素原料及其分散片，分別精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入流動相10ml，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）5分鐘，放冷，再稱定重量，用流動相補足減失的重量，搖勻，取續濾液，即得。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取阿奇霉素對照品約20mg，用流動相溶解并稀釋成每1ml中含1mg的溶液，作為對照溶液。

2.4 準曲線的制備

制備濃度為0.5、1、2、4、6、8、10mg·mL-1的對照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A（μg）為橫坐標，進樣量為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。試驗表明，阿奇霉素對照品在0.5～10mg·mL-1范圍內線性關系良好。

2.5 重現性試驗

分別稱取同批阿奇霉素原料及其分散片樣品6份，分別依照2.3項下供試品制0.79%，結果表明，此含量測定方法的重現性良好。

2.6 回收率試驗

采用加樣回收試驗，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的阿奇霉素對照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量（同時測定樣品含量），計算回收率。6次測定的平均回收率為99.5%，RSD為0.72%。

3 分光光度法測定

3.1 供試品溶液的制備

取阿奇霉素原料及其分散片，分別精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇10ml，稱定重量，超聲處理5分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，取續濾液，即得。

3.2 對照品溶液的制備

精密稱取阿奇霉素對照品約20mg，用乙醇溶解并稀釋成每1ml中含2mg的溶液，作為對照溶液。

3.3 檢測波長的選擇

取對照品溶液，加pH6.0的磷酸鹽緩沖液稀釋50倍，精密量取5mL，精密加入75%的硫酸溶液5mL，振搖混勻，放置30min，冷卻至室溫。以溶出介質為空白，在190nm～700nm范圍內進行掃描，結果阿奇霉素在482nm處有最大吸收，且輔料在此波長處無吸收，故選擇482nm作為測定波長。

3.4 線性關系試驗

取對照品溶液，加pH6.0的磷酸鹽緩沖液分別稀釋成阿奇霉素濃度分別為5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μg·mL-1、40μg·mL-1、60μg·mL-1、80μg·mL-1，精密量取5mL，精密加入75%的硫酸溶液5mL，振搖混勻，放置30min，冷卻至室溫。以溶出介質為空白，分別在482nm處測定其吸收度，以濃度（C）對吸收度（A）進行線性回歸，計算回歸方程。結果表明阿奇霉素的濃度在5～80μg·mL-1范圍內與吸收度呈良好線性關系。

3.5 樣品含量測定

取供試品溶液，用pH6.0的磷酸鹽緩沖液稀釋50倍，搖勻，濾過，精密量取5ml，精密加入75%的硫酸溶液5mL，振搖混勻，放置30分鐘，冷卻至室溫。以溶出介質為空白，分別在482nm處測定其吸收度，計算含量。

3.6 重現性試驗

取同批樣品5份，按樣品含量測定項下方法測定，結果含量的RSD為0.86%，表明方法重現性較好。

3.7 回收率的測定

精密稱取阿奇霉素標準品適量，按阿奇霉素分散片處方比例加入其他輔料，照“樣品含量測定”項下測定阿奇霉素含量，計算回收率。6次測定的平均回收率為99.3%，RSD為0.93%。

4 結果

兩種方法均可對阿奇霉素原料及其分散片含量進行測定。

參考文獻

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[3]紀標，王東凱，薛梅妍，李志強，徐颯.HPLC法測定注射用門冬氨酸阿奇霉素的含量和有關物質[J].中國抗生素雜志，2005（06）.

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[5]李海英，陳悅.高效液相色譜電化學檢測法在硫酸阿奇霉素含量測定和有關物質概況分析上的應用[J].西北藥學雜志，2003（04）.