阿奇霉素原料及其分散片含量測(cè)定方法之比較研究

徐麗娟

摘 要：本文對(duì)阿奇霉素原料及其分散片含量測(cè)定方法之比較研究。高效液相色譜法：固定相為安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5μm），0.045mol/L磷酸二氫胺溶液∶乙腈（2∶1）（用三乙胺調(diào)pH至7.35）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，流速1.0mL·min-1，柱溫：30℃；分光光度法：采用pH6.0的磷酸鹽緩沖液作為溶劑，加入75%硫酸溶液混合，放冷至室溫后測(cè)量；檢測(cè)波長(zhǎng)為482nm。兩種方法均可對(duì)阿奇霉素原料及其分散片含量進(jìn)行測(cè)定。

關(guān)鍵詞：阿奇霉素；方法；比較

阿奇霉素為半合成的十五元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。阿奇霉素化學(xué)名稱為：（2R，3S，4R，5R，8R，10R，11R，12S，13S，14R）-13-[（2，6-二脫氧-3-C-甲基-3-O-甲基-α-L-核-已吡喃糖基）氧]-2-乙基-3，4，10-三羥基-3，5，6，8，10，12，14-七甲基-11-[[3，4，6-三脫氧-3-（二甲氨基）-β-D-木-已吡喃糖基]氧]-1-氧雜-6-氮雜環(huán)十五烷-15-酮。阿奇霉素適應(yīng)敏感細(xì)菌引起的鼻竇炎、中耳炎、急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作；沙眼衣原體及非多種耐藥淋病奈瑟菌所致的尿道炎和宮頸炎；化膿性鏈球菌引起的急性咽炎、急性扁桃體炎；肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌以及肺炎支原體所致的肺炎等。本文對(duì)阿奇霉素原料及其分散片含量測(cè)定方法之比較研究。

1 儀器與試藥

美國(guó)必能信超聲波清洗機(jī)（北京星越天成科技有限公司）；CF-B數(shù)顯電熱恒溫水浴（上海雷韻試驗(yàn)儀器制造有限公司）；1810-B石英自動(dòng)雙重蒸餾水器（上海康路儀器設(shè)備有限公司）；X1600四元低壓梯度液相色譜儀（南京皓而普分析設(shè)備有限公司）；Aurora-F1實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)洗瓶機(jī)（杭州喜瓶者生物技術(shù)有限公司）；HWY-501A型恒溫水浴（上海昌吉地質(zhì)儀器有限公司）；FA1204CFAC型全自動(dòng)內(nèi)校電子分析天平（北京同德創(chuàng)業(yè)科技有限公司）；DR5000臺(tái)式紫外可見分光光度計(jì)（廣州市怡華新電子儀器有限公司）。阿奇霉素對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。乙腈（北京亞太龍興化工有限公司）、磷酸（南京大唐化工有限公司）、磷酸二氫鉀（北京亞太龍興化工有限公司）、冰醋酸（北京亞太龍興化工有限公司）、三乙胺（北京邁瑞達(dá)科技有限公司）、甲醇（青島市金宏鑫化工有限公司）、磷酸二氫銨（南京大唐化工有限公司）。

2 高效液相色譜法測(cè)定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[1-5]。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5μm）；0.045mol/L磷酸二氫胺溶液∶乙腈（2∶1）（用三乙胺調(diào)pH至7.35）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。理論板數(shù)按阿奇霉素峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取阿奇霉素原料及其分散片，分別精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入流動(dòng)相10ml，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）5分鐘，放冷，再稱定重量，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取阿奇霉素對(duì)照品約20mg，用流動(dòng)相溶解并稀釋成每1ml中含1mg的溶液，作為對(duì)照溶液。

2.4 準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為0.5、1、2、4、6、8、10mg·mL-1的對(duì)照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，阿奇霉素對(duì)照品在0.5～10mg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別稱取同批阿奇霉素原料及其分散片樣品6份，分別依照2.3項(xiàng)下供試品制0.79%，結(jié)果表明，此含量測(cè)定方法的重現(xiàn)性良好。

2.6 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的阿奇霉素對(duì)照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測(cè)定含量（同時(shí)測(cè)定樣品含量），計(jì)算回收率。6次測(cè)定的平均回收率為99.5%，RSD為0.72%。

3 分光光度法測(cè)定

3.1 供試品溶液的制備

取阿奇霉素原料及其分散片，分別精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇10ml，稱定重量，超聲處理5分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

3.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取阿奇霉素對(duì)照品約20mg，用乙醇溶解并稀釋成每1ml中含2mg的溶液，作為對(duì)照溶液。

3.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取對(duì)照品溶液，加pH6.0的磷酸鹽緩沖液稀釋50倍，精密量取5mL，精密加入75%的硫酸溶液5mL，振搖混勻，放置30min，冷卻至室溫。以溶出介質(zhì)為空白，在190nm～700nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果阿奇霉素在482nm處有最大吸收，且輔料在此波長(zhǎng)處無(wú)吸收，故選擇482nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

3.4 線性關(guān)系試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，加pH6.0的磷酸鹽緩沖液分別稀釋成阿奇霉素濃度分別為5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μg·mL-1、40μg·mL-1、60μg·mL-1、80μg·mL-1，精密量取5mL，精密加入75%的硫酸溶液5mL，振搖混勻，放置30min，冷卻至室溫。以溶出介質(zhì)為空白，分別在482nm處測(cè)定其吸收度，以濃度（C）對(duì)吸收度（A）進(jìn)行線性回歸，計(jì)算回歸方程。結(jié)果表明阿奇霉素的濃度在5～80μg·mL-1范圍內(nèi)與吸收度呈良好線性關(guān)系。

3.5 樣品含量測(cè)定

取供試品溶液，用pH6.0的磷酸鹽緩沖液稀釋50倍，搖勻，濾過(guò)，精密量取5ml，精密加入75%的硫酸溶液5mL，振搖混勻，放置30分鐘，冷卻至室溫。以溶出介質(zhì)為空白，分別在482nm處測(cè)定其吸收度，計(jì)算含量。

3.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同批樣品5份，按樣品含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定，結(jié)果含量的RSD為0.86%，表明方法重現(xiàn)性較好。

3.7 回收率的測(cè)定

精密稱取阿奇霉素標(biāo)準(zhǔn)品適量，按阿奇霉素分散片處方比例加入其他輔料，照“樣品含量測(cè)定”項(xiàng)下測(cè)定阿奇霉素含量，計(jì)算回收率。6次測(cè)定的平均回收率為99.3%，RSD為0.93%。

4 結(jié)果

兩種方法均可對(duì)阿奇霉素原料及其分散片含量進(jìn)行測(cè)定。

參考文獻(xiàn)

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