血清水通道蛋白4抗體檢測在視神經脊髓炎患者中的應用價值

李文強 梁成

【摘要】 目的：探討血清水通道蛋白4（AQP-4）抗體檢測在視神經脊髓炎患者中的應用價值。方法：選取2016年8月-2017年8月本院收治的視神經脊髓炎患者84例為研究A組、多發性硬化患者84例為研究B組、體檢正常人84例為對照組。三組均進行血清AQP-4抗體水平檢測。比較三組AQP-4陽性率，比較研究組首發受累部位、不同性別患者AQP-4抗體陽性率。結果：研究組AQP-4陽性率高于對照組，且研究A組高于研究B組，比較差異均有統計學意義（P<0.05）；研究A組各首發受累部位例數均多于研究B組（P<0.05）；女性AQP-4抗體陽性率高于男性（P<0.05）。結論：血清AQP-4抗體水平與視神經脊髓炎緊密相關，是區分神經脊髓炎與多發性硬化的重要物質，臨床利用價值與推廣價值較高。

【關鍵詞】 視神經脊髓炎； 血清水通道蛋白4抗體； 應用價值

【Abstract】 Objective：To explore the application value of serum aquaporin-4 antibody（AQP-4） in patients with neuromyelitis optica.Method：A total of 84 patients with neuromyelitis optica admitted to our hospital from August 2016 to August 2017 were selected as study A group，84 patients with multiple sclerosis as study B group and 84 healthy persons as control group.Serum AQP-4 antibody levels were detected in three groups.The positive rate of AQP-4 was compared between three groups，the first involvement site in study group were compared，the positive rate of AQP-4 antibody of different sex patients in study group was compared.Result：The positive rate of AQP-4 in study group was higher than that of control group，and that in study A group was higher than that of study B group，the differences were statistically significant（P<0.05）.The number of first involvement site in study A group was more than those of study B group（P<0.05）.The positive rate of AQP-4 antibody in females was higher than that of males（P<0.05）.Conclusion：Serum AQP-4 antibody level is closely related to neuromyelitis optica，it is an important substance to distinguish neuromyelitis from multiple sclerosis，has high clinical value and promotion value.

【Key words】 Neuromyelitis optica； Serum aquaporin-4 antibody； Application value

First-authors address：Second Hospital of Lanzhou University，Lanzhou 730030，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.33.032

視神經脊髓炎屬于中樞神經系統疾病的一種，主要會對患者的脊髓、視神經造成一定的影響，其癥狀主要為有選擇性地累及人體脊髓與神經，引發神經炎癥與脊髓炎癥，引發的病理因素主要是形成了壞死空洞、硬化斑、脫髓鞘等，同時伴有血管附近炎性細胞被浸潤的現象[1]。血清水通道蛋白4（AQP-4）抗體在視神經脊髓炎患者體內的水平較高，在大部分視神經脊髓炎患者體內均能檢測到[2]。AQP-4抗體的高度特異性為臨床診斷視神經脊髓炎提供了一定的線索。本院在視神經脊髓炎患者AQP-4抗體水平與臨床特征的相關性研究過程中，發現患者病情越嚴重，AQP-4抗體水平越高，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年8月-2017年8月本院收治的視神經脊髓炎患者84例為研究A組、多發性硬化患者84例為研究B組，本院體檢正常人84例為對照組。納入標準：患者均符合其診斷標準，且為首次發病；臨床資料均比較完整；研究對象均知曉同意此次研究。排除標準：伴隨有其他神經系統疾病的患者；有脊髓外傷、腦部手術史的患者；心肝腎功能不全的患者。本研究通過了醫院倫理委員會審核。

1.2 方法

1.2.1 血液采集 研究對象均在入院后的第2天清晨空腹抽取靜脈血2 mL，離心后提取上清液，將其保存在-80 ℃的冰箱中備用[3]。

1.2.2 材料準備 增強綠色熒光蛋白（EGFP）標記的人AQP-4（EGFP-AQP-4）M23質粒來源于牛津大學，DMEM培養基由Solarbia公司提供，瓊脂糖凝膠4B蛋白A（proteinA-sepharose 4B）、去蛋白酶抑制劑（PIC）、聚乙烯亞胺（PEI）均由Sigma公司提供，超低IgG胎牛血清、小牛血清均由GIBCO公司提供。SYNGERY2酶標儀由美國Bio-teck公司提供，顯微鏡由日本奧林巴斯公司提供[4]。

1.2.3 血清AQP-4抗體檢測方法 首先將人胚腎293（HEK293）細胞用175 cm2培養瓶進行培養，等到細胞貼合程度達到50%后應用PEI介導EGFP-AQP-4M23cDNA質粒對HEK293細胞進行轉染[5]，轉染率>70%后應用細胞裂解液對細胞進行裂解，后對其進行離心分取上清液，其中必然含有EGFP-AQP-4蛋白，對其進行熒光值（FU）測定，FU值保持在（500～600）/200 μL；對待測血清進行解凍，離心分取血清20 μL，后將EGFP-AQP-4 200 μL加入離心血清中，將其維持在4 ℃進行輪轉并過夜，后在混合液中加上提前經過超低IgG胎牛血清處理的ProteinA-Sepharose 4B 75 μL，之后在室溫下輪轉2 h，離心分取血清[6]。在分取出的血清液中加入1 mL細胞裂解液進行漂洗沉淀，連續進行3次，后將150 μL漂洗沉淀復合物加入其中，再將其加入96孔酶標板中，通過酶標儀獲得FU值，設定激發波長488 nm，發射波長507 nm[7]。標準值為健康人群的平均FU+3s值，高于標準值即為陽性，以上的血清進行3次檢測取平均值。

1.3 觀察指標 比較三組AQP-4陽性率；比較研究A、B組首發受累部位，主要包括腦內病灶、胸髓、腦干、長脊髓、頸髓、雙側、單側視神經[8]；比較研究組不同性別患者AQP-4抗體陽性率[9]。

1.4 統計學處理 使用SPSS 18.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組基線資料比較 研究A組男2例，女82例；年齡22～68歲，平均（42.5±3.5）歲；病程3個月～14年，平均（8.8±3.3）年。研究B組男3例，女81例；年齡21～69歲，平均（43.1±4.2）歲；病程2個月～13年，平均（9.1±3.4）年。對照組男4例，女80例；年齡23～68歲，平均（42.8±3.2）歲。三組一般資料比較差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 三組AQP-4陽性率比較 研究組AQP-4陽性率高于對照組（字2=7.670，P<0.05），且研究A組高于研究B組（字2=4.421，P<0.05），見表1。

2.3 研究A、B組首發受累部位例數比較 研究A組各首發受累部位例數均多于研究B組（P<0.05），見表2。

2.4 研究組不同性別患者AQP-4抗體陽性率比較 女性AQP-4抗體陽性率高于男性（字2=14.207，P<0.05），見表3。

3 討論

視神經脊髓炎屬于一種自身免疫疾病，引發的原因可能主要與病菌感染、病毒感染、肺炎等有關[10]。通過對患者進行免疫病理檢查，發現早期具有活動能力病灶血管附近存在補體活化、免疫球蛋白沉積物，這就說明體液在視神經脊髓炎發生發展過程中發揮了一定的作用。

視神經脊髓炎與多發性硬化患者在免疫病理、血清學、神經影像學、發病過程等方面均存在不同[11]。在視神經脊髓炎患者的血清、腦脊液中可以檢測到其他抗體，其在疾病的復發與超敏反應過程中均發揮了一定的作用[12]。AQP家族是近幾年新發現的一類具有特異性的膜內在蛋白，可以通過多種途徑在動植物體內分布。當前在臨床上發現的主要有7種，分別為AQP-1、AQP-3、AQP-4、AQP-5、AQP-8、AQP-9、AQP-11[13]。AQP-4是存在于腦組織中進行表達的水通道蛋白，在腦水腫、腦缺血的病理發生過程中起到了很大的作用。在人體中樞神經系統中首先發現的是AQP-4，主要存在于腦微血管細胞表面、海馬齒狀回細胞表面、中樞膠質界膜細胞表面、小腦浦肯野細胞表面[14]。由于其存在極性分布的特點，充分說明AQP-4在保持大腦水平恒定、穩定方面具有重要的意義，同時AQP-4可以參與血管間的水調節、膠質細胞間的水調節。AQP-4可以有選擇性地與視神經脊髓炎標志物NMO-IgG抗體結合。

NMO-IgG抗體是中樞神經系統中存在的血清AQP-4抗體。引發視神經脊髓炎的主要原因就在于血清AQP-4抗體自身發生了抗體反應[15]。血清AQP-4抗體具有很高的特異度與靈敏度，因此在臨床上對其進行檢測有利于診斷視神經脊髓炎。本研究結果顯示，研究組AQP-4陽性率高于對照組（P<0.05），且研究A組高于研究B組（P<0.05）；研究A組各首發受累部位例數均多于研究B組（P<0.05）。這就充分說明，通過血清AQP-4抗體水平可以有效地區分視神經脊髓炎患者與多發性硬化患者，可以將其作為臨床上檢查視神經脊髓炎的重要指標之一。當前臨床上多認為節段較長脊髓炎的發生與血清AQP-4抗體水平存在緊密的聯系，這就說明，如果在為患者進行檢查的過程中發現節段較長脊髓病灶>3個，則需要對患者的血清AQP-4抗體水平進行檢測，以便盡早明確病情發展進程，為早期治療奠定基礎。

通過對血清AQP-4抗體水平的滴度進行檢測可以發現脊髓節段的長度與血清AQP-4抗體水平成正比，同時血清AQP-4抗體水平與復發率成正相關[16]。血清AQP-4抗體呈現陽性的患者視力都較差，且容易發生神經炎。在當前臨床上通過檢測血清AQP-4抗體判斷患者的病情嚴重程度已經應用的越來越廣泛[17]。

本研究顯示，女性患者AQP-4抗體陽性率高于男性患者（P<0.05），說明女性患有視神經脊髓炎、多發性硬化的概率更高。臨床上通常是對患者體內的血清AQP-4抗體水平進行檢測并觀察是否有高度表達等情況來判斷視神經脊髓炎的發生情況[18]。根據血清AQP-4抗體陽性情況，可以發現視神經脊髓炎患者體內的血清AQP-4抗體越高，患者的陽性率越高，這就說明，通過血清AQP-4抗體水平可以鑒別是否發生了視神經脊髓炎，且通過血清AQP-4抗體水平可以預測患者的病情發展進程及預后狀況，為患者早期接受臨床治療提供依據，并預測患者發生殘疾的危險程度[19]。因此，視神經脊髓炎患者一定要進行血清AQP-4抗體水平檢測，觀察其表達情況，并給予相應的治療措施，以便及時控制疾病發展進程，改善患者預后[20]。

綜上所述，血清AQP-4抗體水平與視神經脊髓炎緊密相關，是區分神經脊髓炎與多發性硬化的重要物質，臨床利用價值與推廣價值較高。

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（收稿日期：2018-09-27） （本文編輯：董悅）