晚期非小細胞肺癌患者TKI靶向治療與腫瘤組織EGFR基因突變的關系

趙諍 李海軍 陳效琴

[摘要] 目的 探討晚期非小細胞肺癌（NSCLC）患者酪氨酸激酶抑制劑（TKI）靶向治療與腫瘤組織表皮生長因子（EGFR）基因突變的關系。 方法 回顧性分析廣元市中心醫院2015年1月～2017年1月180例接受TKI靶向治療的NSCLC患者的臨床資料，所有患者均經病理證實為NSCLC，治療前對所有患者血漿樣本EGFR突變進行檢測，然后接受TKI靶向治療。分析EGFR突變與患者一般資料的關系，并探討EGFR突變對TKI靶向治療效果及預后的影響。 結果 180例NSCLC患者中，118例為野生型，62例為突變型，突變率為34.44%。性別、無吸煙史、組織學類型與EGFR突變有關（P < 0.05）；其余一般資料與EGFR突變無關（P > 0.05）。EGFR突變患者有效率高于EGFR野生型患者，差異有統計學意義（P < 0.05）。EGFR突變型患者1年生存率高于EGFR野生型，差異有統計學意義（P < 0.05）。 結論 NSCLC患者EGFR基因突變與性別、無吸煙史、組織學類型有關，EGFR突變型患者接受TKI靶向治療的效果較好，有利于提高患者1年生存率。

[關鍵詞] 非小細胞肺癌；酪氨酸激酶抑制劑；表皮生長因子；突變

[中圖分類號] R734.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2019）04（a）-0162-04

The relationship between TKI targeting therapy and EGFR gene mutation in patients with advanced non-small cell lung cancer

ZHAO Zheng1 LI Haijun1 CHEN Xiaoqin1 REN Jing1 ZHAO Shicai2

1.Clinical Laboratory， Guangyuan Central Hospital， Sichuan Province， Guangyuan 628000， China； 2.Department of Respiration Guangyuan Central Hospital， Sichuan Province， Guangyuan 628000， China

[Abstract] Objective To investigate the relationship between tyrosine kinase inhibitor （TKI） targeting therapy and epithelial growth factor receptor （EGFR） gene mutation in patients with advanced non-small cell lung cancer （NSCLC）. Methods The clinical data of 180 patients with NSCLC who received TKI targeted therapy from January 2015 to January 2017 in Guangyuan Center Hospital were retrospectively analyzed. All patients were pathologically confirmed as NSCLC， on all plasma samples from patients with EGFR mutation were detected before treatment， and then received TKI targeted therapy. The relationship between EGFR mutation and patient baseline data was analyzed， and the effect of EGFR mutation on the therapeutic effect of TKI targeted therapy and prognosis were discussed. Results A total of the 180 NSCLC patients， 118 were wild type and 62 were mutant， and the mutation rate was 34.44%. Sex， no smoking history， histology type were related to EGFR mutation （P < 0.05）； the other baseline data were not related to EGFR mutation （P > 0.05）. The EGFR mutant was higher than that of the EGFR wild type， and the difference was statistically significant （P < 0.05）. The 1 year survival rate of EGFR mutant patients was higher than that of EGFR wild type， and the difference was statistically significant （P < 0.05）. Conclusion The EGFR gene mutation in NSCLC patients is related to gender， no smoking history and histological type. EGFR mutant patients receiving TKI targeted therapy is better， which is beneficial to improve the 1 year survival rate of patients.

[Key words] Non small cell lung cancer； Tyrosine kinase inhibitor； Epithelial growth factor receptor； Mutation

肺癌是目前發病率與死亡率最高的惡性腫瘤，死亡率占所有癌癥死亡病例的17.8%[1]。非小細胞肺癌（non small cell lung cancer，NSCLC）發病率占所有肺癌發病率85%以上，多數患者就診時已為晚期，此時已失去手術治療機會，因此臨床主要采取以放化療為主的內科治療[2]。放化療雖可在一定程度上控制疾病進展，延長患者生存時間，但療效有限[3]。因此，探索新的治療方法對延長患者生存期有重要意義。近年來，隨著分子生物技術快速發展，靶向治療已成為臨床關注及研究的熱點。表皮生長因子（Epithelial growth factor receptor，EGFR）是肺癌基因調控的主要通路及途徑，現已成為靶向治療研究的靶點[4]。臨床研究發現，EGFR是19區缺失突變及區點突變導致氨基酸序列及EGFR結果改變，也是增加藥物敏感性的重要作用機制[5]。因此本次研究回顧性分析NSCLC患者酪氨酸激酶抑制劑（Tyrosine kinase inhibitor，TKI）靶向治療與腫瘤組織EGFR基因突變的關系，為指導臨床治療提供一定依據。結果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析四川省廣元市中心醫院（以下簡稱“我院”）2015年1月～2017年1月180例接受TKI靶向治療的NSCLC患者的臨床資料，所有患者均經病理證實為NSCLC。本研究經我院醫學倫理委員會審查批準。納入標準：①經細胞學、組織學證實為Ⅲb期、Ⅳ期NSCLC，參與本次研究前未經其他治療；②均經EGFR基因檢測；③接受TKI靶向治療；④臨床資料完整。排除標準：①無法獲取足夠的血漿樣本用于突變檢測；②治療依從性差，不能規律服藥。本研究中男128例，女52例；年齡35～79歲，平均（59.12±10.20）歲。

1.2 主要儀器及試劑

多功能水平電泳儀（日本MUPID公司）、實時熒光定量PCR儀（美國安捷倫Mx3000P/3005P）、多功能離心機（德國Eppendorf 5702型）、低溫冰箱（DW-FW110，中科美菱）、漩渦混合器（江蘇海門其林貝爾）、精密恒溫水浴箱（美國SHELLAB恒溫水浴箱W20M-2型）、2.0 mL離心管（美國Corning）。

無水酒精、0.8%瓊脂糖凝膠（美國Lonza公司）、DNA提取試劑盒（德國凱杰）、EGFR基因突變檢測試劑盒（廈門艾德生物醫藥科技有限公司）。

1.3 檢測方法

血漿突變檢測采取PCR-熒光探針法，試劑盒采用PCR反應八聯管設計，突變探針由FAM熒光標記，內標探針由VIC熒光標記。①試劑準備：從冰箱取出試劑盒，充分溶解，計算實驗所需反應數。將PCR八聯管轉移至樣本準備區，剩余于-20℃冰箱避光保存。②樣本準備：嚴格參照DNA提取試劑盒提取樣本DNA，向16.2 μL待測樣本基因組DNA、16.2 μL弱陽性對照組、16.2 μL空白對照組中分別加入1.8 μL酶混合液，混勻快速離心10 s。將混勻樣本DNA依次取2 μL加入PCR反應液中，進行PCR反應液檢測。③PCR擴增：開機進行儀器自檢。將準備好的PCR八聯管，放置于樣品槽相應位置，設置擴增參數，擴增條件：42℃ 5 min，94℃ 3 min，94℃ 15 s，60℃ 60s）。反應體系25 μL，進行PCR擴增。反應結束，依據擴增曲線劃定合適熒光閾值，得到不同通道Ct值，并計算相關△Ct值。結果判定參考EGFR基因突變檢測試劑盒使用說明書。

1.4 治療方法

所有患者在完善血漿突變檢測后接受TKI靶向治療，吉非替尼（進口藥品：英國 AstraZeneca KK，國藥準字：J20100014，生產批號：20100125，規格250 mg/片）250 mg/d，厄洛替尼（進口藥品：意大利Roche Registration Ltd，國藥準字：H20120101，生產批號：20120227，規格150 mg/片）150 mg/d，連續治療6周。

1.5 觀察指標

①分析TKI靶向治療前EGFR突變與基線資料（性別、年齡、吸煙史、組織學類型、分化程度、臨床分期、淋巴結轉移、遠處轉移）的關系。②比較兩組治療前及治療6周后臨床療效。③分析兩組治療后1年生存率。

1.6 療效標準

參照實體腫瘤療效標準[6]評估患者臨床療效，療效分為完全緩解（Complete response，CR）、部分緩解（Partial response，PR）、疾病穩定（Stable disease，SD）、疾病進展（Progressive disease，PD）。患者所有靶病灶消失，病理性淋巴結短直徑<10 mm為CR；靶病灶直徑水平減少≥30%為PR；靶病灶直徑水平減少<30%為SD；靶病灶直徑增加20%為PD。有效率（Response rate，RR）=（CR+PR）/總例數×100%。

1.7 統計學方法

采用SPSS 20.0統計學軟件對所得數據進行分析，計量資料采用均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。Kaplan-Meire法繪制生存率，采取Log-Rank檢驗，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 EGFR突變與一般資料的關系

本次研究180例NSCLC患者中，118例為野生型，62例為突變型，突變率為34.44%（62/180）。性別、無吸煙史、組織學類型與EGFR突變有關（P < 0.05）；其余一般資料與EGFR突變無關（P > 0.05）。見表1。

2.2 患者EGFR突變與TKI靶向治療效果的相關性分析

EGFR突變患者RR高于EGFR野生型患者，差異有統計學意義（P < 0.05）。見表2。

2.3 生存率分析

隨訪1年，每個月進行1次電話隨訪，截至隨訪末期，突變型失訪3例，野生型失訪8例，總失訪率為6.11%（11/180）；失訪按死亡計。EGFR突變型患者1年生存率為61.02%（36/59），EGFR野生型患者1年生存率為44.55%（49/110），兩組比較差異有統計學意義（P < 0.05）。見圖1。

3 討論

分子靶向治療的發展及應用給臨床治療帶來了新曙光，前期TKI靶向治療在EGFR突變型NSCLC患者治療中的效果也證實了分子靶向治療在EGFR突變型患者中的重要價值，其是目前應用最廣泛的靶向藥物[7-8]。

EGFR突變狀態與臨床基線資料的相關性結果顯示，性別、無吸煙史、組織學類型與EGFR突變有關，與既往研究[9-10]報道相符。姚曉燕等[11]研究顯示，758例NSCLC患者中，EGFR突變為49.7%，其中男性突變率為37.9%，女性為62.7%，腺癌突變率為54.4%，非腺癌為17.7%，吸煙患者突變率為55.1%，不吸煙患者為36.4%，EGFR突變在女性、腺癌、無吸煙史患者中較高。因此，臨床在檢測EGFR突變時，應重點篩查男性、非腺癌及吸煙患者。

TKI靶向治療效果結果顯示，EGFR突變型患者TKI靶向治療的RR及治療后1年生存率顯著高于EGFR野生型。文獻[12-13]報道，EGFR高表達的腫瘤細胞具有易轉移、細胞侵襲性強、療效差、預后不佳等特點。EGFR表達與腫瘤細胞酪氨酸激酶活性有關，其過表達可促使腫瘤細胞接受細胞生長信號，抑制EGFR表達則可抑制腫瘤細胞生長[14]。董丹丹等[15]文獻報道，對于EGFR酪氨酸激酶基因編碼區突變型腫瘤，TKI靶向治療療效可高達80%以上，而對于無突變的野生型腫瘤則基本無效。王志海等[16]研究結果也發現，EGFR突變型NSCLC經EGFR-TKI靶向治療可明顯提高臨床治療療效，延長患者生存時間。姜海英等[17]研究報道，EGFR突變狀態是晚期NSCLC患者一線EGFR-TKI治療效果和生存期的預測因素。

EGFR突變是NSCLC患者TKI靶向治療獲益的關鍵[18-19]，但是患者EGFR突變狀態的改變受多種因素影響，包括樣本檢測時間、檢測方法敏感性、患者治療方案等。有研究[20]顯示，對乳腺癌患者化療前與化療1個療程后的基因突變分析結果顯示，患者化療前、后突變率為25%、28%，20%的基礎野生型患者經1個療程化療后發生新的突變，這一結果提示突變會隨著化療而改變，了解突變狀態改變對治療方案選擇有重要意義，臨床應引起重視。

綜上，NSCLC患者EGFR基因突變與性別、無吸煙史、組織學類型有關；EGFR突變型患者接受TKI靶向治療的療效及預后均優于EGFR野生型。

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（收稿日期：2018-06-04 本文編輯：封 華）