飼料中裂殖壺藻不同添加量對凡納濱對蝦精莢再生的影響

關(guān)鍵詞：凡納濱對蝦（Litopenaeus uannamei）；裂殖壺藻（Schizochytrium）；精英再生；精子中圖分類號：S963 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號： ;1004-6755（2025）08-0069-06

Abstract：Schizochytrium is rich in docosahexaenoic aicd （DHA）.which exhibits a significant growth -promoting effect on the Litopenaeus vannamei. To investigate the effects of DHA on male development and spermatophore regeneration in Litopenaeus uannamei experimental diets were supplemented with 0% （Group A）， 3% （Group B）and 6% （Group C） Schizochytrium and fed to male shrimp with an initial body weight of （37，4±5，3）g .Results showed ： Compared with the control group with zero addition，the groups with 3% and 6% addition improved the quality of regenerated sperm pods，the percentage of live sperm and the total sperm count of male Litopenaeus vannaeus，among which the group with 3% addition was significantly higher than the control group （ .Plt;0.05 ）.With the extension of the breeding time，the quality of the regenerated sperm pods of the male shrimp in the control group on the lOth and 2Oth days of breeding was significantly lower than the initial value（ Plt;0.05： ， Compared with the initial values，the 3% addition group significantly improved the quality of regenerated sperm pods of male Litopenaeus vannamei at 1O days and 2O days （ Plt;0. 05 ），However，there was no significant difference between 10d and 20d ，The addition of the 6% group significantly improved the quality of the regenerated sperm pods of male Litopenaeus vannamei at 10 days （Plt;0.05） ， However，it decreased significantly after 2O days，showing no significant difference from the initial value. The study demonstrates that dietary supplementation with 3% Schizochytrium optimally supports gonadal development and spermatophore regeneration in male Litopenaeus uannamei ， providing a practical reference for its application in formulated broodstock feeds.

Key words：Litopenaeus vannamei ;Schizochytrium;spermatophore regeneration; sperm

凡納濱對蝦（Litopenaeusvannamei）是目前我國養(yǎng)殖面積最大和產(chǎn)量最高的對蝦品種[1]。蝦類養(yǎng)殖的健康發(fā)展受到苗種質(zhì)量的制約，而蝦類苗種的優(yōu)劣由親蝦性腺決定。凡納濱對蝦苗種生產(chǎn)性培育中，母蝦通常多次成熟和產(chǎn)卵，并具有開放式納精囊的繁殖特性，每次母蝦產(chǎn)卵前均需與雄蝦交配，交配后的雄蝦精莢重新再生需要7～10d 。因此，繁育場幼體生產(chǎn)數(shù)量和質(zhì)量，與雄性親蝦性腺良好的發(fā)育及精莢再生的質(zhì)量密不可分。親蝦繁殖方面的能力會受到很多營養(yǎng)因子的影響，其中影響較大的為蛋白質(zhì)、脂肪及微量元素2。目前甲殼類生殖營養(yǎng)方面的相關(guān)研究，尤其是對蝦類，絕大多數(shù)集中在母體卵巢發(fā)育的營養(yǎng)需求上，較少涉及雄性，而關(guān)于營養(yǎng)物質(zhì)對雄性對蝦精子、精莢及再生質(zhì)量的研究，更是少之又少[3-4]

脂肪在水產(chǎn)動物的生命活動中有著重要作用，對凡納濱對蝦來說，脂肪主要用于能量及生長過程。凡納濱對蝦的必需脂肪酸有亞油酸、亞麻酸、二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）等[5]，其中EPA和DHA的促生長作用相對更好。研究表明，二十二碳六烯酸（DHA）在對蝦性腺發(fā)育、受精卵孵化及變態(tài)的整個(gè)過程中起決定性作用。紀(jì)文娟]研究發(fā)現(xiàn)，蝦類缺乏合成二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）的能力，必須從外界獲得。對蝦飼料中DHA的普遍來源為海產(chǎn)魚油，但由于其魚腥味重、適口性差和生產(chǎn)及儲藏條件等限制，使其利用率逐年降低[8-9]。因而開發(fā)富含高質(zhì)量DHA的海洋微藻類及某些微生物來替代魚油具有很大的市場。

裂殖壺藻（Schizochytrium）是一類海洋真菌，其脂肪含量可占干重 50% 以上，DHA高達(dá)20% 以上[10]。Li等[11]研究認(rèn)為，在飼料中添加裂殖壺藻干粉不僅能提高斑點(diǎn)叉尾（Ictaluruspunctatus）肌肉中DHA的含量，同時(shí)會增強(qiáng)其免疫應(yīng)激能力。大量研究表明，裂殖壺藻可作為一種高DHA的強(qiáng)化飼料，其作用效果主要體現(xiàn)在三個(gè)方面：顯著提升了養(yǎng)殖品種的生長性能，同時(shí)有效優(yōu)化了飼料轉(zhuǎn)化效率；顯著提高了水產(chǎn)品肌肉組織中的DHA含量，改善了水產(chǎn)品營養(yǎng)品質(zhì)；對甲殼類養(yǎng)殖對象表現(xiàn)出良好的增效作用，可同時(shí)改善凡納濱對蝦的生長性能及肌肉營養(yǎng)品質(zhì)，并有效提升斑節(jié)對蝦的精莢再生質(zhì)量[12-13]

本研究以裂殖壺藻作為飼料DHA來源，以不同添加量飼料飼喂雄性凡納濱對蝦10d和20d后，通過評估其再生精莢質(zhì)量，一方面為裂殖壺藻替代魚油作為DHA來源的可行性提供參考；另一方面為裂殖壺藻在蝦類親本配合飼料配方中的占比優(yōu)化提供基礎(chǔ)理論數(shù)據(jù)。

1材料與方法

1.1 飼料設(shè)計(jì)

此試驗(yàn)飼料配方和營養(yǎng)成分見表1，飼料配制方法參考孫姍姍等[14]的相關(guān)研究。試驗(yàn)飼料制作流程如下：原材料經(jīng)過粉碎一60目過篩一各物料稱量一手動混合一機(jī)器二次混合（目的為使所有原材料混合均勻，營養(yǎng)物質(zhì)均勻分布）一顆粒劑進(jìn)行制粒一烘箱 90°C 烘干一密封袋密封一冰箱儲存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)對象

從南海水產(chǎn)研究所深圳試驗(yàn)基地8號高位池中，挑選精莢飽滿的雄性凡納濱對蝦，要求體長（2 （14.8±1.0）cm ，體質(zhì)量 （37.4±5.3）g ，放入室內(nèi)水泥池進(jìn)行暫養(yǎng)，待7d后擠出精莢并分養(yǎng)于12個(gè)循環(huán)水養(yǎng)殖缸（規(guī)格： 1. 3m×1. 0m×0. 4m） 中，每個(gè)養(yǎng)殖缸10尾，共計(jì)120尾，分3個(gè)試驗(yàn)組，每組4個(gè)重復(fù)。三種試驗(yàn)飼料分別為：A組（添加 0% 裂殖壺藻）B組（添加 3% 裂殖壺藻）、C組（添加 6% 裂殖壺藻），以上添加依據(jù)參考Bray等[15]的相關(guān)研究，試驗(yàn)周期為 20d 9

1.3試驗(yàn)條件及管理

本試驗(yàn)在中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所（深圳）的循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行。試驗(yàn)期間，每天分3次飼喂，飼喂量為對蝦總體質(zhì)量的2%～3%（8：0 0，12：00，18：00） ，根據(jù)對蝦吃食程度及時(shí)調(diào)整投喂比例。每日對養(yǎng)殖缸進(jìn)行清理，及時(shí)補(bǔ)充新鮮養(yǎng)殖水，水溫維持在27.5～31.5^°C ，溶解氧水平 5.6～6.4mg/L ，鹽度范圍 25%～30‰ ，自然光照，氣石進(jìn)行 24h 不間斷充氣。

1.4樣品采集及指標(biāo)檢測

分組前，采用人工擠壓法[16將雄性凡納濱對蝦精莢擠出，擠出精莢后進(jìn)行分組，試驗(yàn)進(jìn)行到第10天時(shí)，將試驗(yàn)對象雄性凡納濱對蝦精莢再次擠出，并對其再生精莢質(zhì)量、精子數(shù)和活精子數(shù)百分含量進(jìn)行評估。用形態(tài)觀察法[1判別精子質(zhì)量，判別標(biāo)準(zhǔn)如下：活精子擁有近球形的飽滿主體部，有正常棘突；畸形精子的顯著特點(diǎn)與活精子相反，主要為主體部畸形，并缺乏棘突或棘突彎曲。精子總數(shù)的測定采用黃建華等[18]的方法，隨機(jī)取一枚精莢進(jìn)行稱量，于玻璃勻漿器中加 1mL 鈣離子溶液，碾碎精莢并定量至 10mL ，用鈣離子溶液稀釋 10～100 倍，上下?lián)u晃使其混合均勻，從中取少量精液用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，在250倍顯微鏡下計(jì)數(shù)任意3個(gè)大格（16小格）精子的數(shù)量，取其平均值。可得出 1mL 的精子數(shù)量。精莢所含精子的總數(shù)公式如下：精子總數(shù) =10mL× 平均值×10 000× 稀釋倍數(shù)；活精子數(shù)百分含量 （%）= 正常精子總數(shù)/總精子數(shù) ×100 。

表1試驗(yàn)基礎(chǔ)飼料及營養(yǎng)成分 （%）

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)記錄使用SPSS25.0進(jìn)行單因素方差分析，各組間的差異顯著性用Duncan’s多重比較分析 ?Plt;0.05 。結(jié)果表示為“平均值士標(biāo)準(zhǔn)誤”（X±SE） 。

2結(jié)果

2.1裂殖壺藻添加進(jìn)飼料影響凡納濱對蝦雄蝦 再生精莢質(zhì)量

由表2可看出，10d時(shí)，精莢第一次再生， 3% 裂殖壺藻組的再生精莢質(zhì)量顯著大于 0% 裂殖壺藻組的再生精莢質(zhì)量（ Plt;0.05） ，而 0% 裂殖壺藻組小于 6% 裂殖壺藻組，但差異不明顯（ （Pgt;0.05）;20. d時(shí)，進(jìn)行第二次再生， 0% 裂殖壺藻組的再生精莢質(zhì)量小于 3% 裂殖壺藻組與 6% 裂殖壺藻組，且 3% 裂殖壺藻組與 0% 裂殖壺藻組差異顯著（ Plt;0.05 ，情況等同于第一次精莢再生時(shí)。此外，隨養(yǎng)殖時(shí)間的延長， 0% 裂殖壺藻組雄蝦 10d，20d 的再生精莢質(zhì)量降低，且均較初始值有較大幅度的下降； 3% 裂殖壺藻組雄蝦 ^10d 、20d的再生精莢質(zhì)量均顯著高于初始值（ .Plt;0.05 ），但10d和20d的再生精莢質(zhì)量差異不顯著； 6% 裂殖壺藻組雄蝦10d的再生精莢質(zhì)量比20d和初始值的再生精莢質(zhì)量明顯提高（ .Plt;0.05 ，而20d和初始值的再生精莢質(zhì)量無差異。

表2裂殖壺藻對凡納濱對蝦雄蝦再生精莢質(zhì)量的影響（mg）

主：同列 x，y 上標(biāo)不同表示差異顯著（ Plt;0. 05 ，包含相同字母表示差異不顯著 ?Pgt;0. 05 ；同行a、b上標(biāo)不同表示差異顯著Plt;0. 05 ），包含相同字母表示差異不顯著（ Pgt;0.05 。

2.2裂殖壺藻添加進(jìn)飼料影響凡納濱對蝦雄蝦再生精莢精子總數(shù)

由表3可看出，10d時(shí)精莢再生情況： 6% 裂殖壺藻組最低， 0% 裂殖壺藻組、 6% 裂殖壺藻組無顯著差別，而 3% 裂殖壺藻組的精子總數(shù)比 0% 、6% 裂殖壺藻組（ Plt;0. 05 明顯增加；20d時(shí)發(fā)生第二次精莢再生，各組精子總數(shù)為 3% 裂殖壺藻 56% 裂殖壺藻 gt;0% 裂殖壺藻，無顯著差異（ Pgt;0.05; ;各組間精子總數(shù)初始值并無明顯差異 （Pgt;0.05） 。 0% 裂殖壺藻組和 6% 裂殖壺藻組的精子總數(shù)與初始值相差不大（ Pgt;0. 05） ，但3% 裂殖壺藻組10d時(shí)再生精莢精子總數(shù)明顯高于初始值（ Plt;0.05） 。每組 10d 時(shí)再生精子總數(shù)和初始值均比各自20d時(shí)再生精子總數(shù)有顯著提高 ?Plt;0.05） 。

表3裂殖壺藻對凡納濱對蝦雄蝦再生精莢精子總數(shù)的影響 （10⁷）

注：同列 x，y 上標(biāo)不同表示差異顯著（ Plt;0. 05 ，包含相同字母表示差異不顯著（ Pgt;0. 05 ）；同行a、b、c上標(biāo)不同表示差異顯著（ Plt;0.05） ，包含相同字母表示差異不顯著（ Pgt;0.05）

2.3裂殖壺藻添加進(jìn)飼料影響凡納濱對蝦雄蝦 再生精莢活精子百分含量

由表4可看出，10d和20d時(shí)， 0%.3% 和6% 裂殖壺藻三組再生精莢活精子百分含量并無明顯差異（ Pgt;0.05 ，但 3%.6% 裂殖壺藻組均有增加趨勢。每組20d時(shí)再生精莢活精子百分含量均低于10d時(shí)再生精莢活精子百分含量和初始值，但差異并不顯著（ Pgt;0.05） 。而各組 10d 時(shí)再生精莢活精子百分含量高于初始值，但無明顯差異（ Pgt;0.05 ）。

表4裂殖壺藻對凡納濱對蝦雄蝦再生精莢活精子百分含量的影響 （%）

3討論

王清印等[19]報(bào)道，中國對蝦（Fenneropenae-uschinensis）精莢再生平均時(shí)間為3d，表明雄性對蝦精莢可多次再生。Leung—Trujillo等[20]用人工擠壓或電刺激法對三種對蝦精莢再生的時(shí)間進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，南美白對蝦（Penaeusse-tiferus）精莢形成時(shí)間為 5～7d ，凡納濱對蝦為2～4d ，南美藍(lán)對蝦（Penaeusstylirostris）為4～6d 。綜合多方面因素，本次試驗(yàn)選取10d為一個(gè)周期，結(jié)果顯示，經(jīng)過10d和 20d 的試驗(yàn)，試驗(yàn)對象雄性凡納濱對蝦的精莢均已重復(fù)生成且飽滿。這與此前林莉等[21]發(fā)現(xiàn)，日本囊對蝦（Mar-supenaeusjaponicus）隨精莢再生次數(shù)增加出現(xiàn)精莢再生間隔時(shí)間延長的情況，且精莢質(zhì)量、精子合格率和受精能力呈下降趨勢一致，即第20天時(shí)再生的精莢質(zhì)量、精子總數(shù)及再生精莢的活精子數(shù)量均低于第10天再生時(shí)的情況。這表明隨著養(yǎng)殖時(shí)間的不斷延長，凡納濱對蝦雄蝦的再生精莢質(zhì)量及數(shù)量均會下降，從而導(dǎo)致其繁殖性能受到影響。此等情況也被Rosas等[22]在野生雄性白對蝦中發(fā)現(xiàn)。

影響雄蝦繁殖性能的因素是多方面的，而導(dǎo)致其繁殖力下降的原因包括養(yǎng)殖時(shí)間過長、餌料營養(yǎng)不均衡等，其中影響對蝦繁殖、性腺發(fā)育及精莢再生的重要因素為營養(yǎng)條件[23]。有研究發(fā)現(xiàn)[23-24]，以鮮活餌料為食的雄性凡納濱對蝦，其精莢再生質(zhì)量較高，包括精子總數(shù)和正常精子總數(shù)均呈現(xiàn)上升趨勢，而在養(yǎng)殖池內(nèi)經(jīng)人工養(yǎng)殖超過兩周，雄性白對蝦的精莢內(nèi)異常精子數(shù)量逐步增加。在本研究中，飼料中添加了裂殖壺藻，增強(qiáng)了DHA含量，促進(jìn)了雄蝦精莢再生，使精巢的產(chǎn)精量進(jìn)一步提高，因此 0% 裂殖壺藻組凡納濱對蝦雄蝦精莢再生質(zhì)量、精子數(shù)量及活精子數(shù)百分含量低于 3% 裂殖壺藻組和 6% 裂殖壺藻組，其中3% 裂殖壺藻組效果最好。這表明飼料中添加裂殖壺藻，會增加飼料中的不飽和脂肪酸含量，促進(jìn)了凡納濱對蝦雄蝦的精莢再生，這與劉棟梁[13]研究結(jié)果類似。

目前，對于對蝦苗種的研究更多集中于雌性親蝦上，對雄性親蝦的研究及報(bào)道少之又少。對蝦精子的生成是一個(gè)持續(xù)的過程，精莢的發(fā)育及精子質(zhì)量直接關(guān)系到卵子的受精率、孵化率和幼體的健康質(zhì)量，因此，在繁殖過程中對精子質(zhì)量也應(yīng)有所關(guān)注。營養(yǎng)物質(zhì)中的脂類物質(zhì)會直接影響親蝦的性腺發(fā)育及后續(xù)的繁殖能力，包括但不限于對雄性對蝦精子的發(fā)生、精莢的形成及再生質(zhì)量的影響。本研究在飼料中添加了含有大量DHA的裂殖壺藻[25]，試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加適量的裂殖壺藻將提高雄性親蝦的精莢質(zhì)量及精子數(shù)量，可能會促進(jìn)后續(xù)的育苗過程。探究裂殖壺藻對雄性親蝦精莢質(zhì)量、數(shù)量再生情況的影響，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義及實(shí)用價(jià)值。

4結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加適量的裂殖壺藻，對凡納濱對蝦雄蝦精莢的再生會產(chǎn)生促進(jìn)作用。本試驗(yàn)中，當(dāng)凡納濱對蝦雄蝦精莢兩次再生時(shí)，添加3% 裂殖壺藻組的雄蝦精莢質(zhì)量、精子總數(shù)和活精子百分?jǐn)?shù)要高于其他兩組。因此，在實(shí)際養(yǎng)殖凡納濱對蝦親蝦的過程中，可在親蝦飼料中添加3% 的裂殖壺藻。

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