飼料中裂殖壺藻不同添加量對凡納濱對蝦精莢再生的影響

關鍵詞：凡納濱對蝦（Litopenaeus uannamei）；裂殖壺藻（Schizochytrium）；精英再生；精子中圖分類號：S963 文獻標志碼：A 文章編號： ;1004-6755（2025）08-0069-06

Abstract：Schizochytrium is rich in docosahexaenoic aicd （DHA）.which exhibits a significant growth -promoting effect on the Litopenaeus vannamei. To investigate the effects of DHA on male development and spermatophore regeneration in Litopenaeus uannamei experimental diets were supplemented with 0% （Group A）， 3% （Group B）and 6% （Group C） Schizochytrium and fed to male shrimp with an initial body weight of （37，4±5，3）g .Results showed ： Compared with the control group with zero addition，the groups with 3% and 6% addition improved the quality of regenerated sperm pods，the percentage of live sperm and the total sperm count of male Litopenaeus vannaeus，among which the group with 3% addition was significantly higher than the control group （ .Plt;0.05 ）.With the extension of the breeding time，the quality of the regenerated sperm pods of the male shrimp in the control group on the lOth and 2Oth days of breeding was significantly lower than the initial value（ Plt;0.05： ， Compared with the initial values，the 3% addition group significantly improved the quality of regenerated sperm pods of male Litopenaeus vannamei at 1O days and 2O days （ Plt;0. 05 ），However，there was no significant difference between 10d and 20d ，The addition of the 6% group significantly improved the quality of the regenerated sperm pods of male Litopenaeus vannamei at 10 days （Plt;0.05） ， However，it decreased significantly after 2O days，showing no significant difference from the initial value. The study demonstrates that dietary supplementation with 3% Schizochytrium optimally supports gonadal development and spermatophore regeneration in male Litopenaeus uannamei ， providing a practical reference for its application in formulated broodstock feeds.

Key words：Litopenaeus vannamei ;Schizochytrium;spermatophore regeneration; sperm

凡納濱對蝦（Litopenaeusvannamei）是目前我國養(yǎng)殖面積最大和產量最高的對蝦品種[1]。蝦類養(yǎng)殖的健康發(fā)展受到苗種質量的制約，而蝦類苗種的優(yōu)劣由親蝦性腺決定。凡納濱對蝦苗種生產性培育中，母蝦通常多次成熟和產卵，并具有開放式納精囊的繁殖特性，每次母蝦產卵前均需與雄蝦交配，交配后的雄蝦精莢重新再生需要7～10d 。因此，繁育場幼體生產數量和質量，與雄性親蝦性腺良好的發(fā)育及精莢再生的質量密不可分。親蝦繁殖方面的能力會受到很多營養(yǎng)因子的影響，其中影響較大的為蛋白質、脂肪及微量元素2。目前甲殼類生殖營養(yǎng)方面的相關研究，尤其是對蝦類，絕大多數集中在母體卵巢發(fā)育的營養(yǎng)需求上，較少涉及雄性，而關于營養(yǎng)物質對雄性對蝦精子、精莢及再生質量的研究，更是少之又少[3-4]

脂肪在水產動物的生命活動中有著重要作用，對凡納濱對蝦來說，脂肪主要用于能量及生長過程。凡納濱對蝦的必需脂肪酸有亞油酸、亞麻酸、二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）等[5]，其中EPA和DHA的促生長作用相對更好。研究表明，二十二碳六烯酸（DHA）在對蝦性腺發(fā)育、受精卵孵化及變態(tài)的整個過程中起決定性作用。紀文娟]研究發(fā)現，蝦類缺乏合成二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）的能力，必須從外界獲得。對蝦飼料中DHA的普遍來源為海產魚油，但由于其魚腥味重、適口性差和生產及儲藏條件等限制，使其利用率逐年降低[8-9]。因而開發(fā)富含高質量DHA的海洋微藻類及某些微生物來替代魚油具有很大的市場。

裂殖壺藻（Schizochytrium）是一類海洋真菌，其脂肪含量可占干重 50% 以上，DHA高達20% 以上[10]。Li等[11]研究認為，在飼料中添加裂殖壺藻干粉不僅能提高斑點叉尾（Ictaluruspunctatus）肌肉中DHA的含量，同時會增強其免疫應激能力。大量研究表明，裂殖壺藻可作為一種高DHA的強化飼料，其作用效果主要體現在三個方面：顯著提升了養(yǎng)殖品種的生長性能，同時有效優(yōu)化了飼料轉化效率；顯著提高了水產品肌肉組織中的DHA含量，改善了水產品營養(yǎng)品質；對甲殼類養(yǎng)殖對象表現出良好的增效作用，可同時改善凡納濱對蝦的生長性能及肌肉營養(yǎng)品質，并有效提升斑節(jié)對蝦的精莢再生質量[12-13]

本研究以裂殖壺藻作為飼料DHA來源，以不同添加量飼料飼喂雄性凡納濱對蝦10d和20d后，通過評估其再生精莢質量，一方面為裂殖壺藻替代魚油作為DHA來源的可行性提供參考；另一方面為裂殖壺藻在蝦類親本配合飼料配方中的占比優(yōu)化提供基礎理論數據。

1材料與方法

1.1 飼料設計

此試驗飼料配方和營養(yǎng)成分見表1，飼料配制方法參考孫姍姍等[14]的相關研究。試驗飼料制作流程如下：原材料經過粉碎一60目過篩一各物料稱量一手動混合一機器二次混合（目的為使所有原材料混合均勻，營養(yǎng)物質均勻分布）一顆粒劑進行制粒一烘箱 90°C 烘干一密封袋密封一冰箱儲存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗對象

從南海水產研究所深圳試驗基地8號高位池中，挑選精莢飽滿的雄性凡納濱對蝦，要求體長（2 （14.8±1.0）cm ，體質量 （37.4±5.3）g ，放入室內水泥池進行暫養(yǎng)，待7d后擠出精莢并分養(yǎng)于12個循環(huán)水養(yǎng)殖缸（規(guī)格： 1. 3m×1. 0m×0. 4m） 中，每個養(yǎng)殖缸10尾，共計120尾，分3個試驗組，每組4個重復。三種試驗飼料分別為：A組（添加 0% 裂殖壺藻）B組（添加 3% 裂殖壺藻）、C組（添加 6% 裂殖壺藻），以上添加依據參考Bray等[15]的相關研究，試驗周期為 20d 9

1.3試驗條件及管理

本試驗在中國水產科學研究院南海水產研究所（深圳）的循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中進行。試驗期間，每天分3次飼喂，飼喂量為對蝦總體質量的2%～3%（8：0 0，12：00，18：00） ，根據對蝦吃食程度及時調整投喂比例。每日對養(yǎng)殖缸進行清理，及時補充新鮮養(yǎng)殖水，水溫維持在27.5～31.5^°C ，溶解氧水平 5.6～6.4mg/L ，鹽度范圍 25%～30‰ ，自然光照，氣石進行 24h 不間斷充氣。

1.4樣品采集及指標檢測

分組前，采用人工擠壓法[16將雄性凡納濱對蝦精莢擠出，擠出精莢后進行分組，試驗進行到第10天時，將試驗對象雄性凡納濱對蝦精莢再次擠出，并對其再生精莢質量、精子數和活精子數百分含量進行評估。用形態(tài)觀察法[1判別精子質量，判別標準如下：活精子擁有近球形的飽滿主體部，有正常棘突；畸形精子的顯著特點與活精子相反，主要為主體部畸形，并缺乏棘突或棘突彎曲。精子總數的測定采用黃建華等[18]的方法，隨機取一枚精莢進行稱量，于玻璃勻漿器中加 1mL 鈣離子溶液，碾碎精莢并定量至 10mL ，用鈣離子溶液稀釋 10～100 倍，上下搖晃使其混合均勻，從中取少量精液用血球計數板計數，在250倍顯微鏡下計數任意3個大格（16小格）精子的數量，取其平均值。可得出 1mL 的精子數量。精莢所含精子的總數公式如下：精子總數 =10mL× 平均值×10 000× 稀釋倍數；活精子數百分含量 （%）= 正常精子總數/總精子數 ×100 。

表1試驗基礎飼料及營養(yǎng)成分 （%）

1.5 統(tǒng)計分析

數據記錄使用SPSS25.0進行單因素方差分析，各組間的差異顯著性用Duncan’s多重比較分析 ?Plt;0.05 。結果表示為“平均值士標準誤”（X±SE） 。

2結果

2.1裂殖壺藻添加進飼料影響凡納濱對蝦雄蝦 再生精莢質量

由表2可看出，10d時，精莢第一次再生， 3% 裂殖壺藻組的再生精莢質量顯著大于 0% 裂殖壺藻組的再生精莢質量（ Plt;0.05） ，而 0% 裂殖壺藻組小于 6% 裂殖壺藻組，但差異不明顯（ （Pgt;0.05）;20. d時，進行第二次再生， 0% 裂殖壺藻組的再生精莢質量小于 3% 裂殖壺藻組與 6% 裂殖壺藻組，且 3% 裂殖壺藻組與 0% 裂殖壺藻組差異顯著（ Plt;0.05 ，情況等同于第一次精莢再生時。此外，隨養(yǎng)殖時間的延長， 0% 裂殖壺藻組雄蝦 10d，20d 的再生精莢質量降低，且均較初始值有較大幅度的下降； 3% 裂殖壺藻組雄蝦 ^10d 、20d的再生精莢質量均顯著高于初始值（ .Plt;0.05 ），但10d和20d的再生精莢質量差異不顯著； 6% 裂殖壺藻組雄蝦10d的再生精莢質量比20d和初始值的再生精莢質量明顯提高（ .Plt;0.05 ，而20d和初始值的再生精莢質量無差異。

表2裂殖壺藻對凡納濱對蝦雄蝦再生精莢質量的影響（mg）

主：同列 x，y 上標不同表示差異顯著（ Plt;0. 05 ，包含相同字母表示差異不顯著 ?Pgt;0. 05 ；同行a、b上標不同表示差異顯著Plt;0. 05 ），包含相同字母表示差異不顯著（ Pgt;0.05 。

2.2裂殖壺藻添加進飼料影響凡納濱對蝦雄蝦再生精莢精子總數

由表3可看出，10d時精莢再生情況： 6% 裂殖壺藻組最低， 0% 裂殖壺藻組、 6% 裂殖壺藻組無顯著差別，而 3% 裂殖壺藻組的精子總數比 0% 、6% 裂殖壺藻組（ Plt;0. 05 明顯增加；20d時發(fā)生第二次精莢再生，各組精子總數為 3% 裂殖壺藻 56% 裂殖壺藻 gt;0% 裂殖壺藻，無顯著差異（ Pgt;0.05; ;各組間精子總數初始值并無明顯差異 （Pgt;0.05） 。 0% 裂殖壺藻組和 6% 裂殖壺藻組的精子總數與初始值相差不大（ Pgt;0. 05） ，但3% 裂殖壺藻組10d時再生精莢精子總數明顯高于初始值（ Plt;0.05） 。每組 10d 時再生精子總數和初始值均比各自20d時再生精子總數有顯著提高 ?Plt;0.05） 。

表3裂殖壺藻對凡納濱對蝦雄蝦再生精莢精子總數的影響 （10⁷）

注：同列 x，y 上標不同表示差異顯著（ Plt;0. 05 ，包含相同字母表示差異不顯著（ Pgt;0. 05 ）；同行a、b、c上標不同表示差異顯著（ Plt;0.05） ，包含相同字母表示差異不顯著（ Pgt;0.05）

2.3裂殖壺藻添加進飼料影響凡納濱對蝦雄蝦 再生精莢活精子百分含量

由表4可看出，10d和20d時， 0%.3% 和6% 裂殖壺藻三組再生精莢活精子百分含量并無明顯差異（ Pgt;0.05 ，但 3%.6% 裂殖壺藻組均有增加趨勢。每組20d時再生精莢活精子百分含量均低于10d時再生精莢活精子百分含量和初始值，但差異并不顯著（ Pgt;0.05） 。而各組 10d 時再生精莢活精子百分含量高于初始值，但無明顯差異（ Pgt;0.05 ）。

表4裂殖壺藻對凡納濱對蝦雄蝦再生精莢活精子百分含量的影響 （%）

3討論

王清印等[19]報道，中國對蝦（Fenneropenae-uschinensis）精莢再生平均時間為3d，表明雄性對蝦精莢可多次再生。Leung—Trujillo等[20]用人工擠壓或電刺激法對三種對蝦精莢再生的時間進行研究，結果發(fā)現，南美白對蝦（Penaeusse-tiferus）精莢形成時間為 5～7d ，凡納濱對蝦為2～4d ，南美藍對蝦（Penaeusstylirostris）為4～6d 。綜合多方面因素，本次試驗選取10d為一個周期，結果顯示，經過10d和 20d 的試驗，試驗對象雄性凡納濱對蝦的精莢均已重復生成且飽滿。這與此前林莉等[21]發(fā)現，日本囊對蝦（Mar-supenaeusjaponicus）隨精莢再生次數增加出現精莢再生間隔時間延長的情況，且精莢質量、精子合格率和受精能力呈下降趨勢一致，即第20天時再生的精莢質量、精子總數及再生精莢的活精子數量均低于第10天再生時的情況。這表明隨著養(yǎng)殖時間的不斷延長，凡納濱對蝦雄蝦的再生精莢質量及數量均會下降，從而導致其繁殖性能受到影響。此等情況也被Rosas等[22]在野生雄性白對蝦中發(fā)現。

影響雄蝦繁殖性能的因素是多方面的，而導致其繁殖力下降的原因包括養(yǎng)殖時間過長、餌料營養(yǎng)不均衡等，其中影響對蝦繁殖、性腺發(fā)育及精莢再生的重要因素為營養(yǎng)條件[23]。有研究發(fā)現[23-24]，以鮮活餌料為食的雄性凡納濱對蝦，其精莢再生質量較高，包括精子總數和正常精子總數均呈現上升趨勢，而在養(yǎng)殖池內經人工養(yǎng)殖超過兩周，雄性白對蝦的精莢內異常精子數量逐步增加。在本研究中，飼料中添加了裂殖壺藻，增強了DHA含量，促進了雄蝦精莢再生，使精巢的產精量進一步提高，因此 0% 裂殖壺藻組凡納濱對蝦雄蝦精莢再生質量、精子數量及活精子數百分含量低于 3% 裂殖壺藻組和 6% 裂殖壺藻組，其中3% 裂殖壺藻組效果最好。這表明飼料中添加裂殖壺藻，會增加飼料中的不飽和脂肪酸含量，促進了凡納濱對蝦雄蝦的精莢再生，這與劉棟梁[13]研究結果類似。

目前，對于對蝦苗種的研究更多集中于雌性親蝦上，對雄性親蝦的研究及報道少之又少。對蝦精子的生成是一個持續(xù)的過程，精莢的發(fā)育及精子質量直接關系到卵子的受精率、孵化率和幼體的健康質量，因此，在繁殖過程中對精子質量也應有所關注。營養(yǎng)物質中的脂類物質會直接影響親蝦的性腺發(fā)育及后續(xù)的繁殖能力，包括但不限于對雄性對蝦精子的發(fā)生、精莢的形成及再生質量的影響。本研究在飼料中添加了含有大量DHA的裂殖壺藻[25]，試驗結果表明，飼料中添加適量的裂殖壺藻將提高雄性親蝦的精莢質量及精子數量，可能會促進后續(xù)的育苗過程。探究裂殖壺藻對雄性親蝦精莢質量、數量再生情況的影響，具有重要的現實意義及實用價值。

4結論

本研究發(fā)現，飼料中添加適量的裂殖壺藻，對凡納濱對蝦雄蝦精莢的再生會產生促進作用。本試驗中，當凡納濱對蝦雄蝦精莢兩次再生時，添加3% 裂殖壺藻組的雄蝦精莢質量、精子總數和活精子百分數要高于其他兩組。因此，在實際養(yǎng)殖凡納濱對蝦親蝦的過程中，可在親蝦飼料中添加3% 的裂殖壺藻。

參考文獻：

[1]賈高旺，郭冉，何偉，等.凡納濱對蝦的脂肪營養(yǎng)需求[J].河北漁業(yè)，2018（2）：57-59.

[2]WOUTERS R，LAVENS P，NIETO J，et al. Penaeid shrimpbroodstock nutrition：An updated review on research and de-velopment[J].Aquaculture，2001（202）：1—21.

[3]MOURENTEG，RODRIGUEZ A.Variation in the lipidcontent ofwild-caughtfemales of the marine shrimp Penae-us kerathrrus during sexual maturation[J]Marine Biology，1991，110（1）：21—28.

[4]PALACIOSE，IBARRA A M，RACOTTAIS. Tissuebio-chemical composition in relation to multiple spawning in wildand pond-reared Penaeus uannamei brookstock[J].Aqua-culture，2000，185（3—4）：353-371.

[5]陳科.低鹽度下凡納濱對蝦脂肪營養(yǎng)生理研究[D].上海：華東師范大學，2017.

[6]杜少波，胡超群，沈琪.親蝦營養(yǎng)需求研究進展[J].熱帶海洋學報， 2002（4）：80-92

[7]季文娟.高度不飽和脂肪酸對中國對蝦親蝦的產卵和卵質的影響[J].水產學報，1998（3）：49-55.

[8]楊麗，曾娟，吳正云，等.裂殖壺藻發(fā)酵過程中脂肪酸合成代謝規(guī)律及其影響因素探討[J].中國釀造，2019，38（4）：116—120.

[9]王修婧.不同比率DHA/EPA干預高脂小鼠脂質代謝作用及機制[D].武漢：武漢輕工大學，2016.

[10]朱路英，張學成，王淑芳，等.一種海洋真菌一裂殖壺菌的營養(yǎng)成分分析[J].食品科學，2009，30（24）：272-275.

[11]LIMH，ROBINSONEH，TUCKERCS，etal. Effectsofdriedalgae Schizochytrium sp.，a rich source of docosa-hexaenoic acid，on growth，fatty acid composition，and senso-ry quality ot channel catish Ictalurus punctatusLJ」.Aqua-culture，2009，292（3/4）：232-236.

[12]曾娟，劉海燕，顧繼銳，等.裂殖壺藻在水產養(yǎng)殖中的應用[J].中國飼料，2015（13）：27—28，37.

[13]劉棟梁.維生素E和裂壺藻對斑節(jié)對蝦精莢再生的影響[D].上海：上海海洋大學，2018.

[14]孫姍姍.裂殖壺藻對雄性凡納濱對蝦消化、生理生化指標以及精莢再生的影響[D].天津：天津農學院，2020.

[15] BRAY W A，LAWRENCE A L，LESTER L J. Reproductionofeyestalk-ablated Penaeus stylirostris fed various levelsof total dietary lipid[J].Journal of the World AquacultureSociety，2010，21（1）：41-52.

[16]洪心.人工移植精莢技術在斑節(jié)對蝦育苗中的應用[J].福建水產，2012，34（4）：331-334.

[17] LEROY J L，HOECK V V，CLEMENTE M，et al. Theeffect of nutritionally induced hyperlipidaemia on invitrobovine embryo quality[J].Human Reproduction，2010，25（3）：768-778.

[18]黃建華，楊其彬，馬指明，等.池塘養(yǎng)殖斑節(jié)對蝦的生長、發(fā)育與性成熟[J].水產學報，2013，37（3）：397－406.

[19]王清印，李健，孫修濤，等.中國對蝦雄對蝦交配能力和精莢再生的研究[J].海洋與湖沼，1998（1）：22-28.

[20] LEUNG TRUJILLO JR，LAWRENCE A L.Spermatophoregeneration times in Penaeus setiferus，Penaeus uannameiand Penaeus stylirostris[J].Journal of the world aquacul-ture society，1991，22（4）：244-251.

[21］林莉，姚東明，林瓊武，等.日本囊對蝦精莢再生能力的研究[J].廈門大學學報（自然科學版），2014，53（2）：283-288.

[22]ROSASC，SANCHEZ A，CHIMAL MA，et al. The effectofelectrical stimulation on spermatophore regeneration inwhite shrimp Penaeus setiferus[J].Aquatic Living Re-sources，2007，6（2）：139-144.

[23] LEUNG TRUJILLO J R，LAWRENCE A L. Observation onthe decline in sperm quality of Penaeus setiferus under laborato-ry conditions[J].Aquaculture，1987，65（3—4）：363-370.

[24]CEBALLOSVAZQUEZ B，APARICIO SIMONB，PALAC-IOS E，et al. Sperm quality over consecutive spermatophoreregenerations in thepacificwhite shrimp Litopenaeusuan-namei[J].Journal of theWorld Aquaculture Society，2004，35（2）：178—188.

[25]宋澤，彭雍博，宋悅凡，等.裂殖壺菌營養(yǎng)成分及其多糖特征分析[J].大連海洋大學學報，2019，34（2）：247—251.